食品中有害物质的检测

1、 第十三章第十三章 食品中有害物质的检测食品中有害物质的检测 （1212节）节）教学重点教学重点1 1、有机氯、有机磷农药的理化性质。有机氯、有机磷农药的理化性质。2 2、两种农药测定预处理方法。两种农药测定预处理方法。3 3、两种农药测定的主要方法。两种农药测定的主要方法。一、有害物质与有毒物质的概念一、有害物质与有毒物质的概念在自然界中在自然界中, , 当某物质或含有该物质的物料被按当某物质或含有该物质的物料被按其原来的用途正常使用时其原来的用途正常使用时, , 若因该物质而导致人若因该物质而导致人体生理机能、自然环境或生态平衡遭受破坏时体生理机能、自然环境或生态平衡遭受破坏时, , 则称

2、该物质为有害物质。则称该物质为有害物质。有毒物质有毒物质: : 一般的定义为凡是以小剂量进入机体一般的定义为凡是以小剂量进入机体, ,通过化学或物理化学作用能够导致健康受损的物通过化学或物理化学作用能够导致健康受损的物质质。有毒物质是相对的剂量决定有毒物质是相对的剂量决定。第一节第一节 概述概述二、食品中有害物质的种类与来源二、食品中有害物质的种类与来源食品中有害物质分三大类：食品中有害物质分三大类： 是生物性有害物质是生物性有害物质, , 如黄曲霉、口蹄疫致病菌如黄曲霉、口蹄疫致病菌 是化学性有害物质是化学性有害物质, , 如如DDTDDT、氯丙醇、河豚毒、氯丙醇、河豚毒 素、重金属等；素、

3、重金属等； 是物理性有害物质是物理性有害物质, , 如金属屑、石子、动物排如金属屑、石子、动物排 泄物、放射性元素等。泄物、放射性元素等。第第二二节节 食品中药食品中药物物残留及其检测残留及其检测 农药是农业生产中使用的各种药剂统称，种类农药是农业生产中使用的各种药剂统称，种类很多。我国农药生产现状及发展趋势：很多。我国农药生产现状及发展趋势： 目前全世界实际生产和使用的农药的品种为目前全世界实际生产和使用的农药的品种为500500多种，其中大量使用的有多种，其中大量使用的有100100种，主要是化学种，主要是化学合成生产的。合成生产的。1 1、我国现有主要农药合成企业近我国现有主要农药合成企

4、业近400400家，已建成家，已建成 700700千吨以上原药生产装置，可常年生产千吨以上原药生产装置，可常年生产250250 多种原药、农药中产量居世界第二位（美国第多种原药、农药中产量居世界第二位（美国第 一），农药产量呈逐年增长的趋势。一），农药产量呈逐年增长的趋势。2 2、农药包括：杀虫剂、杀菌剂、除草剂、植物生农药包括：杀虫剂、杀菌剂、除草剂、植物生 长调节剂。长调节剂。3 3、常用的常用的农药农药有：有机氯杀虫剂有：有机氯杀虫剂 有机磷杀虫剂有机磷杀虫剂、拟除虫菊杀虫剂拟除虫菊杀虫剂 氨基甲酸酯杀虫剂氨基甲酸酯杀虫剂 有机氯农药有机氯农药（Organochlorine pestic

5、ides, OCPs）主要有六六六粉主要有六六六粉( (六氯环己烷六氯环己烷) )、DDT(DDT(二氯二苯三二氯二苯三氯乙烷氯乙烷) )毒性特点：毒性特点：难分解、半衰期难分解、半衰期1010年以上，高残留；年以上，高残留；污染食品严重，脂溶性强，蓄积于脂肪和脂肪高污染食品严重，脂溶性强，蓄积于脂肪和脂肪高的组织；中等毒性，致癌、致畸作用。的组织；中等毒性，致癌、致畸作用。性质：性质：不溶于水，易溶于脂肪、丙酮、乙醇、石不溶于水，易溶于脂肪、丙酮、乙醇、石油醚、环己烷，对光、热、酸稳定，对碱不稳定。油醚、环己烷，对光、热、酸稳定，对碱不稳定。 有机磷农药有机磷农药（OPPsOPPs） 是含有

6、是含有CPCP键或键或COPCOP、CSPCSP、CCNPNP键的有机化合物。应用广。键的有机化合物。应用广。（1 1） 分类：分类：l高毒有机磷高毒有机磷 （早期发展，现已被禁止使用）（早期发展，现已被禁止使用） 如对硫磷（如对硫磷（16051605）、内吸磷（）、内吸磷（10591059）、甲胺磷）、甲胺磷（39113911）等；）等；l中等毒有机磷中等毒有机磷 如乐果、杀螟松、倍硫磷等；如乐果、杀螟松、倍硫磷等；l低毒有机磷低毒有机磷 如敌百虫、马拉硫磷、双硫磷等。如敌百虫、马拉硫磷、双硫磷等。过量或施用时期不当或使用高毒农药过量或施用时期不当或使用高毒农药是造是造成有机磷农药污染食品的

7、主要原因成有机磷农药污染食品的主要原因（2 2）特点）特点化学性质不稳定，易分解，污染食品后残留时间短，化学性质不稳定，易分解，污染食品后残留时间短，在生物体不易蓄积。在加工处理过程（碾磨、洗涤、在生物体不易蓄积。在加工处理过程（碾磨、洗涤、去皮、烹调）中可减少。以急性毒性为主，表现出去皮、烹调）中可减少。以急性毒性为主，表现出神经中毒症状。长时间接触对肝脏功能有损。神经中毒症状。长时间接触对肝脏功能有损。 拟除虫菊酯类拟除虫菊酯类 是模拟天然除虫菊酯化学结构而合成的农药。是模拟天然除虫菊酯化学结构而合成的农药。 常用的有氯菊酯、溴菊酯、氯氰菊酯、甲醚菊酯。常用的有氯菊酯、溴菊酯、氯氰菊酯、甲

8、醚菊酯。 特点：特点：l高效、低毒、低残留，在环境中的降解以光解为高效、低毒、低残留，在环境中的降解以光解为主；主；l对胆碱酯酶无抑制作用；对胆碱酯酶无抑制作用；l亲脂性强，可溶于多种有机溶剂，在水中的溶解亲脂性强，可溶于多种有机溶剂，在水中的溶解 度小度小, , 在酸性条件下稳定，在碱性条件下易分解。在酸性条件下稳定，在碱性条件下易分解。 氨基甲酸酯类氨基甲酸酯类是一种高效、低毒、低残留的农药。是一种高效、低毒、低残留的农药。通式：通式：常见的有：甲萘威、呋喃丹、速灭威等。常见的有：甲萘威、呋喃丹、速灭威等。CONHCH3O甲萘威甲萘威4 4、食品中农药残留分析检测技术食品中农药残留分析检测

9、技术1. 1. 薄层色谱法（薄层色谱法（TLCTLC）2. 2. 气相色谱法（气相色谱法（GCGC）3. 3. 气相色谱气相色谱- -质谱法（质谱法（GC-MSGC-MS）4. 4. 液相色谱法（液相色谱法（HPLCHPLC）5. 5. 液相色谱液相色谱- -质谱法（质谱法（LC-MSLC-MS）6. 6. 超临界流体色谱（超临界流体色谱（SFCSFC）7. 7. 毛细管电泳（毛细管电泳（CECE）8. 8. 免疫分析（免疫分析（IAIA）化学法、比色、分光光度法化学法、比色、分光光度法缺少特异性，灵敏度低缺少特异性，灵敏度低纸色谱、薄层色谱法纸色谱、薄层色谱法GCGC、HPLC HPLC G

10、C-MSGC-MS、LC-MSLC-MS定性定量、多残留检测定性定量、多残留检测5 5、食品中有机氯农药残留量测定食品中有机氯农药残留量测定GB/T 5009.19GB/T 5009.19GC-ECDGC-ECD法法l配标准混合使用液配标准混合使用液l样品提取（样品提取（用丙酮、己烷、乙醚、石油醚等用丙酮、己烷、乙醚、石油醚等） 与净化（与净化（用用H2SO4H2SO4磺化磺化）、浓缩（）、浓缩（ KDKD减压减压浓缩浓缩）、）、GCGC检测、检测、ECDECD检测器。检测器。l色谱柱用硬质玻璃柱，若用不锈钢柱，易引色谱柱用硬质玻璃柱，若用不锈钢柱，易引起农药分解。起农药分解。采样液体样品时，

11、应用玻璃瓶，不能用塑料瓶。采样液体样品时，应用玻璃瓶，不能用塑料瓶。l检测器的温度不应低于检测器的温度不应低于250250，否则，检测，否则，检测器很难平衡。器很难平衡。l注意尾吹气流量及分流比。注意尾吹气流量及分流比。 食品中农药残留提取方法食品中农药残留提取方法 索式提取法索式提取法 超声波提取法超声波提取法 高速均质提取法高速均质提取法 固相微萃取和超临界流体萃取技术固相微萃取和超临界流体萃取技术 提取液净化方法提取液净化方法 液液- -液分配法液分配法 吸附柱层析法吸附柱层析法 固相萃取净化法固相萃取净化法 凝胶色谱净化法凝胶色谱净化法 气相色谱法测定食品中有机氯农药残留量气相色谱法测

12、定食品中有机氯农药残留量农药标准溶液：分别准确称取农药标准溶液：分别准确称取-666-666、 666666、 666666、 666666、p p，p-DDTp-DDT、p,p-DDDp,p-DDD、p,p-DDEp,p-DDE、o,p-DDTo,p-DDT、七氯、艾氏剂、狄氏、七氯、艾氏剂、狄氏剂、五氯硝基苯等农药标准品适量剂、五氯硝基苯等农药标准品适量, ,用苯配成用苯配成100g/mL100g/mL的贮备液存于冰箱中备用。临用时，的贮备液存于冰箱中备用。临用时，根据各农药在仪器上的响应灵敏度根据各农药在仪器上的响应灵敏度, ,用石油醚将贮用石油醚将贮备液稀释成一定不同浓度的标准使用液，

13、如六六六备液稀释成一定不同浓度的标准使用液，如六六六建议标准使用液浓度为建议标准使用液浓度为20g/mL,20g/mL,滴滴涕为滴滴涕为0.01g/mL,0.01g/mL,再用石油醚为稀释液配成标准混合使再用石油醚为稀释液配成标准混合使用液。用液。实验步骤实验步骤（一）样品的处理（一）样品的处理1 1植物性样品的提取与净化植物性样品的提取与净化（1 1）粮食：称取粉碎的、过）粮食：称取粉碎的、过2020目筛的粮食试样目筛的粮食试样10g10g，置，置于于100mL100mL具塞三角瓶中，加入具塞三角瓶中，加入20mL20mL石油醚，于振荡器上石油醚，于振荡器上振摇提取振摇提取30min30mi

14、n。（2 2）蔬菜：取适量蔬菜擦净）蔬菜：取适量蔬菜擦净, ,去掉不可食部分后称取蔬菜去掉不可食部分后称取蔬菜试样试样20g20g，切细，切细, ,置于研钵中置于研钵中, ,加适量石英沙加适量石英沙, ,充分研细充分研细, ,研匀，研匀，用用30mL30mL丙酮和丙酮和30mL30mL石油醚洗入烧杯中石油醚洗入烧杯中, ,经抽滤，滤液移经抽滤，滤液移入入250mL250mL分液漏斗中，加入分液漏斗中，加入100mL 20g/L100mL 20g/L硫酸钠水溶液，硫酸钠水溶液，充分摇匀，静置分层，将下层溶液转移到另一充分摇匀，静置分层，将下层溶液转移到另一250mL250mL分分液漏斗中，用液漏

15、斗中，用40mL40mL石油醚分石油醚分2 2次萃取，合并次萃取，合并3 3次萃取的石次萃取的石油醚层，过油醚层，过15g15g无水硫酸钠，于旋转蒸发仪上减压浓缩至无水硫酸钠，于旋转蒸发仪上减压浓缩至10mL10mL。（3 3）层析柱的制备：玻璃层析柱中先加入）层析柱的制备：玻璃层析柱中先加入1cm1cm高无水硫高无水硫酸钠，再加入酸钠，再加入5g55g5水脱活弗罗里硅土，最后加入水脱活弗罗里硅土，最后加入1cm1cm高高无水硫酸钠，轻轻敲实，用无水硫酸钠，轻轻敲实，用20mL20mL石油醚淋洗净化柱，弃石油醚淋洗净化柱，弃去淋洗液，柱面要留有少量液体。去淋洗液，柱面要留有少量液体。（4 4）

16、净化与浓缩：准确吸取试样提取液）净化与浓缩：准确吸取试样提取液2mL2mL，加入已淋，加入已淋洗过的净化柱中，用洗过的净化柱中，用100mL100mL石油醚乙酸乙酯（石油醚乙酸乙酯（95955 5）洗脱，收集洗脱液于蒸馏瓶中，于旋转蒸发仪上浓缩近干，洗脱，收集洗脱液于蒸馏瓶中，于旋转蒸发仪上浓缩近干，用少量石油醚多次溶解残渣于刻度离心管中，最终定容至用少量石油醚多次溶解残渣于刻度离心管中，最终定容至1.0mL1.0mL，供气相色谱分析。，供气相色谱分析。2 2动物性样品的提取与净化动物性样品的提取与净化(1)(1)肉类去筋后肉类去筋后, ,切成小块切成小块, ,制成肉糜制成肉糜, ,称取称取2

17、0g(20g(精确到精确到0.01g)0.01g)于研钵中于研钵中, ,加无水硫酸钠加无水硫酸钠80g,80g,研成细粉研成细粉, ,移入具塞三角瓶中移入具塞三角瓶中, ,加环己烷加环己烷100mL100mL，振摇，振摇30min,30min,过滤过滤, ,收集滤液于另一分收集滤液于另一分液漏斗中加浓硫酸液漏斗中加浓硫酸10 mL10 mL磺化磺化, ,振摇、放气、静置分层，振摇、放气、静置分层，弃磺化层。有机相多次加浓硫酸弃磺化层。有机相多次加浓硫酸5 mL5 mL，反复磺化，直到，反复磺化，直到无色透明，弃磺化层。有机相加无色透明，弃磺化层。有机相加2%2%硫酸钠溶液硫酸钠溶液100 mL

18、100 mL，振摇、放气、静置分层，弃水层。有机相过振摇、放气、静置分层，弃水层。有机相过15g15g无水硫酸无水硫酸钠脱水于钠脱水于K-DK-D浓缩器中，浓缩至约浓缩器中，浓缩至约0.5-1.0mL0.5-1.0mL，定容至，定容至1mL1mL。浓缩样液可直接用于。浓缩样液可直接用于GCGC仪检测。同时做空白实验。仪检测。同时做空白实验。（2 2）蛋类：蛋类去壳，制成匀浆，称取蛋类试样）蛋类：蛋类去壳，制成匀浆，称取蛋类试样10g10g（精确到（精确到0.01g0.01g），于具塞三角瓶中，加丙酮），于具塞三角瓶中，加丙酮50mL50mL，振摇振摇30min,30min,过滤于过滤于K-DK

19、-D浓缩器中，浓缩除去丙酮，向浓缩器中，浓缩除去丙酮，向残渣加环己烷残渣加环己烷50mL50mL溶解，移入分液漏斗中溶解，移入分液漏斗中, ,振摇、静置振摇、静置分层，分出有机相，再用分层，分出有机相，再用20mL20mL环己烷分两次萃取，合环己烷分两次萃取，合并有机相，经并有机相，经15g15g无水硫酸钠脱水于分液漏斗中，用环无水硫酸钠脱水于分液漏斗中，用环己烷补足至己烷补足至100mL100mL，加浓硫酸，加浓硫酸10mL10mL磺化，以下操作磺化，以下操作同肉类样品处理。浓缩样液可直接用于同肉类样品处理。浓缩样液可直接用于GCGC仪检测。同仪检测。同时做空白实验。时做空白实验。（3 3）

20、乳类：取）乳类：取50g50g鲜乳样或与此相当乳制品于分液漏斗鲜乳样或与此相当乳制品于分液漏斗中，加乙醇中，加乙醇50 mL50 mL，草酸钾，草酸钾0.5g,0.5g,振摇振摇1min,1min,加乙醚加乙醚50mL,50mL,摇匀摇匀, ,加环己烷加环己烷50mL,50mL,振摇振摇2min,2min,静置分层，弃下层静置分层，弃下层, ,有机有机相经相经15g15g无水硫酸钠脱水无水硫酸钠脱水, ,置置K-DK-D浓缩器中，浓缩，残液为浓缩器中，浓缩，残液为黄色透明油状物，加环己烷黄色透明油状物，加环己烷50mL50mL溶解，移入分液漏斗中溶解，移入分液漏斗中, ,用环己烷补足至用环己烷

21、补足至100mL100mL，加浓硫酸，加浓硫酸10mL10mL磺化，以下操磺化，以下操作同肉类样品处理。浓缩样液可直接用于作同肉类样品处理。浓缩样液可直接用于GCGC仪检测。同仪检测。同时做空白实验。时做空白实验。 3 3测定测定（1 1）粮食、蔬菜气相色谱条件）粮食、蔬菜气相色谱条件色谱柱：石英弹性毛细管柱，色谱柱：石英弹性毛细管柱，0.25mm0.25mm（内径）（内径）15m15m，内涂有，内涂有OVOV101101固定液。固定液。温度：柱温自温度：柱温自180180升至升至230230保持保持30min30min；检测器、；检测器、进样口温度进样口温度250250。气体流速：氮气：气体

22、流速：氮气：40mL/min40mL/min，尾吹气：，尾吹气：60mL/min60mL/min，分流比，分流比1 15050。（2 2）蛋类、肉类和乳类气相色谱条件）蛋类、肉类和乳类气相色谱条件色谱柱：石英弹性毛细管柱，色谱柱：石英弹性毛细管柱，0.32mm0.32mm（内径）（内径）30m30m，内涂有，内涂有OVOV101101固定液固定液0.25m0.25m。温度：柱温自温度：柱温自6060以以40/min40/min的速度升温至的速度升温至170170，再以再以2/min2/min的速度升温的速度升温55，再以，再以40/min40/min的速度升的速度升温至温至280280，保持，

23、保持10min10min；检测器温度；检测器温度300300；进样；进样口温度口温度270270。气体流速：氮气：气体流速：氮气：1mL/min1mL/min；尾吹：；尾吹：50mL/min50mL/min。4 4色谱分析色谱分析吸取吸取1L1L试样液注入气相色谱仪，记录色谱峰的保留时间试样液注入气相色谱仪，记录色谱峰的保留时间和峰高。再吸取和峰高。再吸取1L1L混标溶液进样，记录色谱峰的保留时混标溶液进样，记录色谱峰的保留时间和峰高。根据组分在色谱上的出峰时间与标准组分比较间和峰高。根据组分在色谱上的出峰时间与标准组分比较定性：用外标法与标准组分比较定量。定性：用外标法与标准组分比较定量。5

24、 5、注意事项、注意事项1 1本法检测灵敏度高，在分析时应注意防止由于色谱柱本法检测灵敏度高，在分析时应注意防止由于色谱柱中高沸点固定液、样品净化不完全及载气不纯等带来的中高沸点固定液、样品净化不完全及载气不纯等带来的污染，使其灵敏度下降。污染，使其灵敏度下降。2 2色谱柱要用硬质玻璃柱，若采用不锈钢柱，金属易引色谱柱要用硬质玻璃柱，若采用不锈钢柱，金属易引起农药分解。起农药分解。3 3分析液体样品中有机氯农药采样时，应用玻璃瓶，不分析液体样品中有机氯农药采样时，应用玻璃瓶，不能用塑料瓶，因塑料瓶对有机氯农药测定有严重影响。能用塑料瓶，因塑料瓶对有机氯农药测定有严重影响。4 4电子捕获检测器有

25、放射源，故检测器的出口一定要接电子捕获检测器有放射源，故检测器的出口一定要接到室外，且每到室外，且每6 6个月应测试一次有无放射形泄漏。个月应测试一次有无放射形泄漏。5 5电子捕获检测器的操作温度一般为电子捕获检测器的操作温度一般为250-300250-300，无论，无论柱温多么低，检测器的温度均不应低于柱温多么低，检测器的温度均不应低于250250，否则，检，否则，检测器很难平衡。测器很难平衡。6 6、食品中有机磷农药残留量的测定食品中有机磷农药残留量的测定 GB/T 5009.20-2003 GB/T 5009.20-2003 原理：原理：果蔬中有机果蔬中有机磷残留磷残留提取提取有机溶剂有

26、机溶剂净化净化气化气化注入注入GCGC 浓缩浓缩色谱柱中色谱柱中分离分离FPDFPD检测检测记录色谱峰记录色谱峰比较样品和标比较样品和标准品的色谱峰准品的色谱峰外标定量（外标定量（多用峰高）多用峰高）仪器与试剂仪器与试剂（一）仪器（一）仪器1 1气相色谱仪：附有火焰光度检测器（气相色谱仪：附有火焰光度检测器（FPDFPD）2 2电动振荡器电动振荡器3 3组织捣碎机组织捣碎机4 4旋转蒸发仪旋转蒸发仪（二）试剂（二）试剂1 1二氯甲烷二氯甲烷2 2无水硫酸钠：在无水硫酸钠：在700700灼烧灼烧4h4h后备用。后备用。3 3中性氧化铝：中性氧化铝：300300活化活化4h4h。4 4有机磷农药标

27、准贮备液：分别准确称取有机磷农药标有机磷农药标准贮备液：分别准确称取有机磷农药标准品敌敌畏、乐果、马拉硫磷、对硫磷、甲拌磷、稻瘟准品敌敌畏、乐果、马拉硫磷、对硫磷、甲拌磷、稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫磷及虫螨磷各净、倍硫磷、杀螟硫磷及虫螨磷各10.0mg10.0mg，用苯（或三，用苯（或三氯甲烷）溶解并稀释至氯甲烷）溶解并稀释至100mL100mL，放在冰箱中保存。，放在冰箱中保存。5 5有机磷农药标准使用液：临用时用二氯甲烷稀释为使有机磷农药标准使用液：临用时用二氯甲烷稀释为使用液，使其浓度为敌敌畏、乐果、马拉硫磷、对硫磷、用液，使其浓度为敌敌畏、乐果、马拉硫磷、对硫磷、甲拌磷每毫升各相当于甲拌磷

28、每毫升各相当于1.0g1.0g，稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫，稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫磷及虫螨磷每毫升各相当于磷及虫螨磷每毫升各相当于2.0g2.0g。果蔬果蔬搅碎搅碎足量的无水硫足量的无水硫酸钠酸钠30100g30100g取样取样10g10g振摇振摇0.5h0.5h脱色脱色70ml70ml二二氯甲烷氯甲烷脱水脱水定容至定容至2ml2ml过滤过滤35ml35ml滤滤液液室温通风室温通风挥挥至近至近干干移入移入5ml5ml具具塞刻度试管塞刻度试管0.20.80.20.8g g 活性炭活性炭二氯甲烷多二氯甲烷多次研洗残渣次研洗残渣样品处样品处理理不同种类样品，处理方法有所不同。不同种类样品，处理方法有所不

29、同。实验步骤实验步骤（一）样品处理（一）样品处理1 1蔬菜：取适量蔬菜擦净蔬菜：取适量蔬菜擦净, ,去掉不可食部分后称取蔬菜去掉不可食部分后称取蔬菜试样，将蔬菜切碎混匀。称取试样，将蔬菜切碎混匀。称取10.0g10.0g混匀的试样，置于混匀的试样，置于250mL250mL具塞锥形瓶中，加具塞锥形瓶中，加30g30g100g100g无水硫酸钠脱水无水硫酸钠脱水（根据蔬菜含水量），剧烈振摇后如有固体硫酸钠存在，（根据蔬菜含水量），剧烈振摇后如有固体硫酸钠存在，说明所加无水硫酸钠已够。加说明所加无水硫酸钠已够。加0.2g0.2g0.8g0.8g活性炭脱色活性炭脱色（根据蔬菜色素含量）。加（根据蔬菜色

30、素含量）。加70mL70mL二氯甲烷，在振荡器二氯甲烷，在振荡器上振摇上振摇0.5h0.5h，经滤纸过滤。量取，经滤纸过滤。量取35mL35mL滤液，在通风柜滤液，在通风柜中室温下自然挥发至近干，用二氯甲烷少量多次研洗残中室温下自然挥发至近干，用二氯甲烷少量多次研洗残渣，移入渣，移入10mL10mL具塞刻度试管中，并定容至具塞刻度试管中，并定容至2mL2mL，备用。，备用。2 2谷物：脱壳、磨粉、过谷物：脱壳、磨粉、过2020目筛、混匀。称取目筛、混匀。称取10g10g置于置于具塞锥形瓶中，加入具塞锥形瓶中，加入0.5g0.5g中性氧化铝（脱油）（小麦、中性氧化铝（脱油）（小麦、玉米再加玉米再

31、加0.2g0.2g活性炭）及活性炭）及20mL20mL二氯甲烷，振摇二氯甲烷，振摇0.5h0.5h，过滤，滤液直接进样。若农药残留过低，则加过滤，滤液直接进样。若农药残留过低，则加30mL30mL二氯二氯甲烷，振摇过滤，量取甲烷，振摇过滤，量取15mL15mL滤液浓缩，并定容至滤液浓缩，并定容至2mL2mL进进样。样。（二）色谱条件（二）色谱条件1 1色谱柱：色谱柱：玻璃柱，内径玻璃柱，内径3mm3mm，长，长1.5m1.5m2.0m2.0m。 担体：担体：6060目目8080目美国目美国Chromosorb W AW Chromosorb W AW DMCSDMCS（酸洗二甲基二氯硅烷化白色

32、担体）（酸洗二甲基二氯硅烷化白色担体）（1 1）分离测定敌敌畏、乐果、马拉硫磷和对硫磷）分离测定敌敌畏、乐果、马拉硫磷和对硫磷的色谱柱的色谱柱2.52.5SESE3030（甲基硅橡胶，极弱极性）和（甲基硅橡胶，极弱极性）和3 3QFQF1 1（三氟丙基甲基聚硅氧烷，中等极性）混合（三氟丙基甲基聚硅氧烷，中等极性）混合固定液固定液1.51.5OVOV1717和和2 2QFQF1 1混合固定液混合固定液（2 2）分离测定甲拌磷、稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫磷及虫）分离测定甲拌磷、稻瘟净、倍硫磷、杀螟硫磷及虫 螨磷的色谱柱螨磷的色谱柱3 3PEGAPEGA（聚乙二醇己二酸酯，较强极性（聚乙二醇己二酸酯，较

33、强极性 ）和）和 5 5QFQF1 1混合固定液混合固定液2 2NPGANPGA（己二酸新戊二醇聚酯，中等极性（己二酸新戊二醇聚酯，中等极性 ）和）和 3 3QFQF1 1混合固定液混合固定液2 2气流速度：气流速度：载气为氮气载气为氮气80mL/min80mL/min；空气；空气50mL/min50mL/min； 氢气氢气180mL/min180mL/min（根据仪器选择各自的最佳比例条件）。（根据仪器选择各自的最佳比例条件）。3 3温度：温度：进样口进样口220220；检测器；检测器240240；柱温；柱温180180，但测定敌敌畏（其稳定性差）为但测定敌敌畏（其稳定性差）为130130。

34、（三）测定（三）测定 将有机磷农药标准使用液将有机磷农药标准使用液2L2L5L5L分别注入气相色分别注入气相色谱仪中，可测得不同浓度有机磷标准溶液的峰高，分别谱仪中，可测得不同浓度有机磷标准溶液的峰高，分别绘制有机磷农药标准曲线。同时取试样溶液绘制有机磷农药标准曲线。同时取试样溶液2L2L5L5L注入气相色谱仪中，测得峰高，从标准曲线图中查出相注入气相色谱仪中，测得峰高，从标准曲线图中查出相应的含量。应的含量。二氯甲烷作提取剂二氯甲烷作提取剂毒性较小毒性较小较便宜较便宜说明：国际上多用说明：国际上多用乙腈乙腈作为作为有机磷农药的提取剂及分有机磷农药的提取剂及分配净化试剂，但其毒性较配净化试剂，

35、但其毒性较大，且较贵。大，且较贵。7 7、蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类 农药残留量的快速检测农药残留量的快速检测 GB/T 5009.199-2003 GB/T 5009.199-2003方法：方法：速测卡法（纸片法）速测卡法（纸片法）实验原理：实验原理： 胆碱脂酶可催化靛酚乙酸脂（胆碱脂酶可催化靛酚乙酸脂（红色红色）水解为乙酸与靛）水解为乙酸与靛酚（酚（蓝色蓝色），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱脂酶有），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱脂酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或

36、氨基甲酸脂类农可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸脂类农药的存在。药的存在。实验试剂：实验试剂：1 1、固化有胆碱脂酶和靛酚乙酸脂试纸卡片（速测卡）；、固化有胆碱脂酶和靛酚乙酸脂试纸卡片（速测卡）；2 2、pH 7.5 pH 7.5 磷酸盐缓冲液：分别称取磷酸盐缓冲液：分别称取15.0g15.0g磷酸氢二钠磷酸氢二钠NaNa2 2HPOHPO4 412H12H2 2OO与与1.59g1.59g无水磷酸二氢钾无水磷酸二氢钾KHKH2 2POPO4 4 ，用用500 mL500 mL蒸馏水溶解。蒸馏水溶解。 实验步骤：实验步骤： 1 1、整体测定法、整体测定法（1 1）选取具有代表性的蔬菜样

37、品，擦去表面泥土，剪成）选取具有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成1cm1cm左右方形碎片左右方形碎片, ,取取5g5g放入带盖瓶中，加入放入带盖瓶中，加入10 mL10 mL缓冲缓冲溶液，振摇溶液，振摇5050次，静置次，静置2min2min以上以上. .（2 2）取一片速测卡，用白色药片沾取提取液，放置取一片速测卡，用白色药片沾取提取液，放置10min10min以上进行预反应，有条件时在以上进行预反应，有条件时在3737恒温装置中放恒温装置中放置置10min10min。预反应后的药片表面必须保持湿润。预反应后的药片表面必须保持湿润。（3 3）将速测卡对折，用手捏将速测卡对折，用手捏3mi

38、n3min或用恒温装置恒温或用恒温装置恒温3min3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。，使红色药片与白色药片叠合发生反应。注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照卡。注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照卡。2 2、表面测定法（粗筛法）、表面测定法（粗筛法）（1 1）擦去蔬菜表面泥土，滴）擦去蔬菜表面泥土，滴2 23 3滴缓冲液在蔬菜表面，滴缓冲液在蔬菜表面， 用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。（2 2）取一片速测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。）取一片速测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。（3 3）放置）放置10 min10 min以上进行预反应，有条件时在以上进行预反应，有条件时在37 37 恒恒 温装置中放置温装置中放置10 min10 min。预反应。预反应10 min10 min，预反应后，预反应后 的药片表面必须保持湿润。的药片表面必须保持湿润。（4 4）将速测卡对折，用手捏）将速测卡对折，用手捏3min3min或用恒温装置恒温或用恒温装置恒温 3min3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。，使红色药片与白色药片叠合发生反应。 注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照卡。注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照卡。结果判断：结果判断： 结果以酶被有机磷或氨基甲酸脂类农药抑制（为阳结