EGFR血液检测专家共识讲座

1、非小细胞肺癌血液EGFR基因突变检测中国专家共识中国非小细胞肺癌血液EGFR基因突变检测专家组人员程颖 (吉林省肿瘤医院肿瘤内科)韩宝惠（上海交通大学附属胸科医院肺内科）黄诚（福建省肿瘤医院胸部肿瘤科）梁智勇（北京协和医院病理科）林冬梅（北京大学肿瘤医院病理科）刘卫平（四川大学华西医院病理科）刘艳辉（广东省人民医院病理科）陆舜（上海交通大学附属胸科医院肿瘤内科）卢铀（四川大学华西医院胸部肿瘤科）邵建永（中山大学附属肿瘤医院分子诊断科）宋勇（南京军区总医院呼吸内科）王洁（中国医学科学院肿瘤医院肿瘤内科）王哲海（山东肿瘤医院肿瘤内科）吴一龙（广东省人民医院、广东省医学科学院、广东省肺癌研究肿瘤内科

2、）应建明（中国医学科学院肿瘤医院病理科）张力（中山大学附属肿瘤医院肿瘤内科）张绪超（广东省人民医院、广东省医学科学院、广东省肺癌研究肿瘤内科）周彩存（同济大学附属上海市肺科医院肿瘤内科）周晓军（南京军区总医院病理科）周晓燕（复旦大学附属肿瘤医院病理科）共识主要内容1.EGFR基因突变和EGFR靶向治疗2.EGFR组织检测的指南推荐3.EGFR的组织检测现状4.EGFR血液检测标本采集及处理外周血游离DNA提取血液EGFR检测方法报告及周期5.血液EGFR基因突变检测发展与展望肺癌的流行病学CA Cancer J Clin. 2015 Mar;65(2):87-108l肺癌是世界范围内发病率（1

3、80万，13%）和死亡率（160万，19.4%）均最高的恶性肿瘤l2012年中国新发肺癌患者约65.3万，死亡患者约59.7万，发病率和死亡率均居所有恶性肿瘤首位来自国际癌症研究机构(IARC)2012年全球肿瘤流行病学统计数据（GLOBOCAN）EGFR基因突变和EGFR靶向治疗肺腺癌驱动基因突变图谱亚洲人群NSCLC中药物疗效相关的EGFR突变19外显子缺失（约占45%）和21外显子L858R突变（约占40%）为EGFR最主要突变，且均为EGFR TKI的敏感性突变Nature Review 2007, 7:169EGFR基因突变和EGFR靶向治疗研究研究 RR 中位中位PFS IPASS

4、 71.2% vs 47.3% 9.8 vs 6.4 月 First-SIGNAL 84.6% vs 37.5% 8.4 vs 6.7 月 WJTOG 3405 62.1% vs 32.2% 9.6 vs 6.6月 NEJGSG002 73.7% vs 30.7% 10.8 vs 5.4 月 OPTIMAL 83% vs 36% 13.1 vs 4.6 月 EURTAC 58% vs 15% 9.7 vs 5.2 月 LUX-LUNG 3 61% vs 22% 11.1 vs 6.9 月 LUX-LUNG 6 67% vs 23%11.0 vs5.6 月TKI化疗TKI化疗缓解率无进展生存约7

5、0%约30%10-11个月5-6个月对于EGFR基因突变阳性患者八项随机研究奠定了八项随机研究奠定了TKI在在EGFR基因突变阳性患者中一线治疗的地位基因突变阳性患者中一线治疗的地位EGFR组织检测的指南推荐晚期非鳞癌的NSCLC患者应进行EGFR突变检测；除了从不吸烟或者很少吸烟的鳞癌患者（每年10000Number of samples(%)DNA copies/200uL plasma (N=86) Fraction of EGFR mutant in total cfDNANumber of EGFR M+ plasma samples61376353activating mutati

6、ons, N=32T790M, N=11总量少总量少 500未转移未转移 4期期3期期2期期1期期 100806040200结直肠胃食管胰腺乳腺局限期转移性可检测ctDNA的发生率(%)100806040200可检测ctDNA的发生率(%)I期III期II期IV期1.0*10061.0*10051.0*10041.0*10031.0*10021.0*10011.0*1001.0*10-01每5ml的突变片断I期III期II期IV期EGFR血液检测-易瑞沙获得血液ctDNA伴随诊断适应症欧盟和中国相继批准阿斯利康易瑞沙血液ctDNA伴随诊断非小细胞肺癌患者用药前检测EGFR突变p IVIFUM(

7、易瑞沙后续评估)研究中，652例患者中血液与配对组织EGFR突变状态的一致性是94.3%94.365.799.896.567.610097.961.899.8020406080100120一致性 灵敏度 特异性 所有突变19缺失L858R对于无法获取组织样本或者组织样本量不足以检测的患者，可选择血液ctDNA用于评价EGFR突变状态Jan YD, et al. 2014 ASCO Abstract 1868.EGFR血液检测- IFUM研究：血液检测阳性可以指导TKI用药p IVIFUM(易瑞沙后续评估)研究中，血液与配对组织不同EGFR突变状态患者ORR的一致，19外显子缺失患者PFS也一致

8、(10.3月 vs 9.6月)69.876.972.582.263.665020406080100所有突变19缺失L858R突变ORR(%)9.710.29.610.39.29.49.69.81010.210.4组织血液所有突变类型 19缺失 PFS (月)组织血液ctDNA检测EGFR突变阳性可用于指导EGFR-TKI治疗Jan YD, et al. 2014 ASCO Abstract 1868.EGFR血液检测-IFUM研究：血液检测阳性可以指导TKI用药p 血检特异性达到 97.2%97.2%p 血检敏感性为 49.6%49.6% 较之IFUM(65.7%)等临床研究数据低 可能是由于

9、肿瘤分期、血液标本的处理、EGFR检测方法等方面的差异所造成的 提示我们，对于EGFR血液检测阴性的患者我们应持谨慎的态度就现阶段而言EGFR 组织学及细胞学检测仍是金标准EGFR 血浆ctDNA 检测可以作为在无法取到组织或细胞学标本时的一个有效补充及替代方法EGFR血液检测- IGNITE研究非小细胞肺癌血液EGFR基因突变检测的中国专家共识p 建议使用如下两种方法之一采集10毫升全血并进一步分离血浆： 方法方法内容内容样本收集管方法1：含有游离DNA保护剂及防细胞裂解保护剂的专用常温采血管方法2：常规EDTA抗凝管（严禁使用肝素抗凝管）.样本保存方法1：轻摇混匀，常温（6-30）放置不超

10、过5-7天方法2：轻摇混匀，常温（6-30）放置不超过2小时血浆快速处理以足够的离心力将全血充分离心两次，从而分离出不含细胞成分的血浆，放置于-70度冻存直至DNA抽提，或直接进入DNA抽提步骤血液离体后血细胞立即溶解并释放gDNA, 快速处理可降低gDNA浓度.两步离心第一步低速离心10min(800-2000g)第二步高速(或低速(i)离心10min(2000-16000g)两次离心有利于去除血浆中所有的细胞碎片p 考虑到临床实践的方便性，建议尽量采用第一种方案采集10毫升全血。血浆分离过程中应注意避免吸入白细胞(i)第二步低速离心优于没有, 高速离心式最佳的但不是必须的EGFR血液检测样

11、本采集和处理p 在临床允许的情况下增加血浆用量，建议使用10毫升全血分离出的血浆（4-5毫升）p 外周血游离DNA的提取有很多方法，建议采用国家药监部门批准的、大容量血浆游离DNA分离试剂盒p 检测方法的选择受到技术人员和仪器两方面影响p 商业试剂盒快速、易操作、易质控、更适用于体外诊断EGFR血液检测外周血游离DNA提取EGFR血液检测检测方法(ARMS)p欧盟批准用于指导易瑞沙治疗的血液检测方法也是ARMS检测方法pARMS法特异性较好，灵敏度有限;p但ARMS是目前唯一获得CFDA批准的血液检测方法EGFR血液检测检测报告p患者及标本基本信息pDNA质量p检测方法p检测试剂及仪器p相关临

12、床意义p检测结果p对结果的诠释p在检测过程中出现的状况 及不确定结果和因素EGFR血液检测周期u所有专业化EGFR分子检测实验室，通过建立高效率的分子检测平台，优化流程u从接收标本到发出报告周期，建议不超过3-53-5个工作日，以及时满足临床的需求。EGFR血液检测检测流程图Plasma(ARMS)Tumor tissue(ARMS)Total+-+24024-125062Total365086ddPCR敏感性:83.3%特异性:94%一致率:89.5%Plasma(ddPCR)Tumor tissue(ARMS)Total+-+30333-64753Total365086ARMS敏感性:66

13、.7%特异性:100%一致率:86%Unpublished data (collaboration with Hospital of Academy of Military Medical Science) 2586位未经TKI治疗的NSCLC患者肿瘤组织与血液检测结果对比：血液血液EGFR基因突变检测发展与展望基因突变检测发展与展望ddPCR方法方法优点：数字PCR在血浆EGFR突变检测上具有较高的灵敏度和特异性局限性：该方法检测EGFR突变位点相对有限，仍处在摸索、累积经验阶段26Newman et al., Nat Med (2014)覆盖96%NSCLC病人平均4个突变/病人敏感性敏感

14、性特异性特异性Stage I (n=4)Stage I (n=4)50%50%96%96%StageStage II-IV (n=9) II-IV (n=9)100%100%96%96%All stage (n=13)All stage (n=13)85%85%96%96%(For mutant allele fractions 0.02%)血液血液EGFR基因突变检测发展与展望基因突变检测发展与展望：二代测序方法：二代测序方法优点：拓展了基因突变检测的深度和广度局限性：其临床转化应用需要更多的数据积累。慎重对待血液检测结果检测到突变未检测到突变根据突变类型指导用药可能假阴性，必要时要求临床重

15、新活检、脱落细胞血液检测报告u检测前慎重评估获得组织细胞材料的可能性u签署知情同意书总 结u当肿瘤组织难以获取时，血液是EGFR突变检测合适的替代生物材料，也是对可疑组织检测结果的补充u血液EGFR基因突变检测可用于对肺癌分子分型、疗效预测和疾病监测u目前成熟且最常用的血液EGFR基因突变检测方法是ARMS法u当肿瘤组织可以获取时，肿瘤组织仍应是优先选择的生物样本用于基因状态分析u随着检测技术的不断发展，期望在保证现有的检测特异性和预测准确性的基础上，不断提高血液EGFR检测的灵敏度，有助于整体上提高我国肺癌患者的EGFR基因受检率，造福于更多的NSCLC 患者接受精准靶向治疗。9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定。22.1.1322.1.13Thursday, January 13, 202210、低头要有勇气，抬头要有低气。23:29:0823:29:0823:291/13/2022 11:29:08 PM11、人总是珍惜为得到。22.1.1323:29:0823:29Jan-2213-Jan-2212、人乱于心，不宽余请。23:29:0823:29:0823:29Thursday, January 13, 202213、生气是拿别人做错的事来惩罚自己。22.1.1322.1.1323:29:0823:29:08January