唐山师范学院综合性、设计性实验项目申报表

1、 唐山师范学院综合性、设计性实验项目申报表申报单位名称：生命科学系 2007年3月1日实验项目名称园艺植物组织培养实验项目性质综合性所属课程园艺植物组织培养开设学期第5学期综合实验学时数18实验室名称植物细胞工程实验室地点5410每组人数1-2人项目负责人王桂兰联系电话8973710经费预算（元）2000元详细说明该实验涉及哪些知识点1、植物组织培养实验室设置及内部设备。2、植物离体培养的培养基种类。3、培养基配方选择。4、植物离体培养的培养基配制与灭菌。5、无菌操作技术。6、植物细胞全能性的表达过程。7、培养条件下通过愈伤组织的诱导完成组织细胞脱分化过程。8、培养条件下通过植株再生完成组织细

2、胞的再分化过程。9、植物的离体器官发生与形态建成。10、影响植物器官分化的因素。11、植物的离体快速繁殖技术，包括丛生芽增殖型和器官发生型繁殖方式等。参加实验指导人员乔永旭、陈超实验项目建设进度安排2006-2007第一学期已进行了初步建设；2007-2008第一学期将进一步完善。主要仪器设备电子天平、显微镜、超净工作台、连续变倍体视显微镜、高压灭菌锅、PH计。实验内容及拟达到的培养目标实验内容：1、MS培养基贮备液的配制及不同外植体诱导培养基配制。2、不同植物外植体离体再生植株的培养。3、红掌再生团块的继代培养与试管苗的生根培养。4、试管苗移栽养护技术与植物离体快繁试验论文写作。5、试验结果

3、分析总结。培养目标：、能独立设计试验具有开展离体培养快速繁殖工作的能力；2、能区分外植体污染菌的类型并能找出原因加以解决以提高试验成功率和效率；3、具有进行试管苗移栽养护的能力。4、具有综合分析试验结果的能力。系论证意见系主任签名： （盖章）年 月 日主管部门意见（盖章）年 月 日综合性实验课程指导书园艺植物组织培养王桂兰 编 写适用专业： _园艺技术唐山师范学院生命科学系2007年3月实验学时： 18 学时实验类型： 综合性实验每组人数： 1-2 人组一、实验目的通过“园艺植物组织培养”大实验的4次连续的学习，使学生能系统地掌握植物离体培养的外植体选择、愈伤组织诱导、器官发生调控等基本技术。

4、使学生具备多项技能：1、培养基配方选择。2培养基配制。3、激素的溶解与配制。4、植物材料灭菌和培养基灭菌。5、无菌操作技术。6、以植物一块组织为材料的离体快速繁殖。7、以植物芽为材料的离体快速繁殖。8、组培苗移栽技术。9、查阅资料和设计试验的能力。12、能合理地设计植物组织培养实验室。13、熟练掌握超净工作台、高压灭菌锅、PH计、实体显微镜等仪器的使用。最终达到掌握植物组织培养的基本实验技能的目的。二、实验原理 根据植物细胞全能性理论，植物的器官、组织、细胞和原生质体在适宜的条件下均能表达其全能性并发育为完整植株。利用之一生物学特性，可为科学研究和生产服务。本实验涉植物组织培养多个知识点：1、

5、植物组织培养实验室设置及内部设备。2、植物离体培养的培养基种类。3、培养基配方选择。4、植物离体培养的培养基配制与灭菌。5、无菌操作技术。6、植物细胞全能性的表达过程。7、培养条件下通过愈伤组织的诱导完成组织细胞脱分化过程。8、培养条件下通过植株再生完成组织细胞的再分化过程。9、植物的离体器官发生与形态建成。10、影响植物器官分化的因素。11、植物的离体快速繁殖技术，包括丛生芽增殖型和器官发生型繁殖方式。三、实验方案教师给定试验范围，学生根据所学知识查阅资料，练习试验方案设计，教师根据学生上交的试验方案进行总结提出一套可行的试验方案在课堂上实施。（一）培养基各贮备液的配制试验内容：以小组为单位

6、配制试验设计所需的各种试剂：大量元素贮备液；微量元素贮备液；铁盐贮备液；除蔗糖之外的有机物质贮备液；所需的各种植物生长调节物质贮备液。（二）培养基的配制简要过程：按试验设计的培养基配方要求取上次实验配制的各种贮备液、定容至所需体积、用pH计调整pH值、煮培养基使琼脂溶化、分装入三角瓶、封口并将培养基进行高压灭菌。为下个实验做准备：实验用具灭菌，培养皿、消毒杯、无菌水和消毒液等。（三）不同外植体的灭菌与接种1、胡萝卜肉质根不同部位愈伤组织的诱导2、烟草叶片愈伤组织的诱导3、烟草顶芽和腋芽（茎段）丛生芽的诱导简要过程：超净工作台紫外消毒20min；取材：胡萝卜肉质根、烟草叶片和芽；流水冲洗1520

7、min；在超净工作台上进行无菌操作；不同植物外植体用不同的灭菌与接种方法；放在培养室内培养。（四）将胡萝卜诱导的愈伤组织和烟草芽分别接种在继代培养基上进行芽诱导和芽增殖。（五）红掌再生团块的继代培养与试管苗的生根培养简要过程：配制再生团块分化培养基和生根培养基；按照无菌操作规程，在无菌条件下将生长至约3cm的红掌组培苗切下接种在生根培养基上，每瓶接种约20株，注意排布均匀；。将切除组培苗后的再生团块根据大小切成23块，接种于再生团块诱导分化培养基上，每瓶接种5块；放在培养室内培养。掌握红掌再生快繁体系建立过程。（六）试管苗移栽技术简要过程：基质准备；取试管苗，仔细洗去琼脂；将试管苗仔细栽入穴盘

8、或培养槽；配杀菌剂，用杀菌剂定苗；栽后管理（慢慢降湿）；移栽后观察小苗的生长势并统计移栽成活率；课下查阅资料完成论文写作。（七）试验总结：1、将本组的实验培养结果放在一起。2、以小组为单位先进行讨论。3、选出代表汇报本组的试验结果并分析，本组其他同学可以补充。4、教师对每组的结果与分析做出评价并总结。四、主要仪器及试剂 电子天平、超净工作台、连续变倍体视显微镜、高压灭菌锅、PH计、培养架、镊子、灭菌器、解剖刀、柄解剖刀片、解剖镊、培养皿、三角瓶、封口膜、酒精灯、容量瓶、试剂瓶、量筒等。五、实验要求要求学生复习所学的植物组织培养、植物生理学和细胞生物学等相关知识，查阅文献资料，按教师要求写出相关

9、实验方案。六、思考题 1、不同植物材料（田间、温室和试管植物；根、茎、叶；生殖器官）如何消毒接种？ 2、植物离体分化过程的类型有哪些？简述其过程。3、分析红掌品种“亚丽桑那”的离体分化过程类型？简述其过程。4、不同材料（如愈伤组织、丛生芽、带节苗、再生团块、原球茎）如何继代培养？5、以叶片为例简述植物离体培养快繁的步骤？6、以顶芽或腋芽为例简述植物离体培养快繁的步骤？7、如何提高组培苗的移栽成活率？如何统计移栽成活率？8、分析培养基不凝固的原因？9、现有20×大量元素母液；100×微量元素母液；50×铁盐母液；50×有机物母液；2mg/ml6-BA、1m

10、g/mlNAA激素母液。配制下列配方的培养基所加母液量各是多少?MS+6-BA1.0+NAA1.0+30g蔗糖+6g琼脂MS+6-BA4.0+NAA3.0+30g蔗糖+6g琼脂1/2MS+6-BA4.0+NAA2.0+30g蔗糖+6g琼脂1/2MS+6-BA0.5+NAA0.2+30g蔗糖+6g琼脂1/4MS+6-BA2.0+NAA0.2+30g蔗糖+6g琼脂10、现从日本引进一个苹果新品种，欲利用离体培养法大量繁殖尽快应用于生产，你如何设计试验完成此项工作？七、实验报告主要内容包括，对实验步骤，实验数据、实验中的特殊现象、实验操作的成败、实验的关键点等内容进行整理、解释、分析总结，回答思考题，提出实验结论或提出自己的看