巯甲丙脯酸和倍他乐克对高血压大鼠左心室MHC基因表达的影响

1、    巯甲丙脯酸和倍他乐克对高血压大鼠左心室MHC基因表达的影响            关键词：高血压；肌球蛋白；卡托普利    中国病理生理杂志000803    摘 要 目的和方法:采用核酸斑点杂交技术，测定双肾双夹(2K2C)肾性高血压大鼠早期左心室肌球蛋白重链(MHC)基因表达的变化，及血管紧张素转换酶抑制剂巯甲丙脯酸和-受体阻断剂倍他乐克对该变化

2、的影响。结果:2K2C组大鼠术后24 h，左心室-MHC mRNA水平即有所降低， 72h时明显降低，为对照组的0.48倍(P<0.05)；与此相反，2K2C组-MHC mRNA水平，在术后24h已略有升高，72 h时明显增加，为对照组的2.7倍(P<0.05)。巯甲丙脯酸可抑制2K2C引起的MHC基因表达的改变，而倍他乐克不能阻止该变化。结论:肾性高血压早期,MHC基因表达发生改变，肾素血管紧张素系统可能起重要作用。    中分类号 R544.1+4 文献标识码 A    文章编号 1000-4718

3、(2000)08-0681-04    Effect of captopril and betaloc on the changes in    expression of MHC of left ventricle in hypertensive rats    RUAN Hong-mei    (Department of Physiology，Guangzhou Medical College, Guangzhou 510182,

4、 China)    PAN Jing-yun    (Department of Physiology, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510089, China)    Abstract AIM：To investigate myosin heavy chain(MHC)gene expression and the effects of captopril and betaloc at an

5、early stage of hypertension. METHODS：Model of hypertension was made by partly narrowing two bilateral renal arteries(2K2C). The rats were divided into four groups at random. (1) control group; (2)2K2C group；(3)captopril group;(4)betaloc group.Levels of -MHC and -MHC mRNA were determined by dot-blot.

6、 RESULTS：-MHC mRNA expression were gradual1y reduced in 2K2C group，while -MHC mRNA expression were increased，and the marked changes were observed at 72h postoperation. Captopril could inhibit the changes in MHC gene expression; but betaloc could not. CONCLUSION: The expression of MHC gene has change

7、d at an early stage of renal hypertensive rat，and renin-angiotensin system may play an important role in this change.    MeSH Hypertension; Myosin; Captopril    肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)基因表型的变化是心肌肥大的重要表现之一。在哺乳动物心室肌中存在两种MHC基因，即-MHC 基因和-MHC基因，其表达产物形成3种同型异构体

8、，其中V1型含两条相同的-MHC链，V3型含两条相同的链。    正常成年大鼠以V1型占绝对优势，V3型为胚胎期的主要形式。主动脉缩窄压力超负荷大鼠心室肌由V1型向V3型迁移1，进而引起心肌细胞功能改变，其机制尚不清楚。本工作用核酸杂交技术，研究双肾双夹(two-kidney two-clip, 2K2C)早期高血压大鼠，左心室MHC基因转录的变化，以及巯甲丙脯酸和倍他乐克的作用，探讨心肌肥大的可能机制。    材 料 和 方 法    一、实验分组  &

9、#160; 雄性SD大鼠体重80100 g(购自广东省实验动物中心)随机分4组。(一)2K2C组 经戊巴比妥钠麻醉(50 mg/kg，ip),无菌条件下切开腹腔，将银夹(内径0.3 mm)安置于双侧肾动脉起始部，造成双侧肾动脉部分狭窄。(二)巯甲丙脯酸组 手术同2K2C组，术前3 d至实验结束服用巯甲丙脯酸，剂量为100 mg.kg-1.d-1，加至水中饮用，每日新鲜配制。(三)倍他乐克组 手术同2K2C组，术前3 d至实验结束服用倍他乐克，剂量为200 mg.kg-1.d-1，加至水中饮用。(四)对照组 除不上银夹外，其余手术同2K2C组。   

10、60;二、平均动脉血压(MAP)和左心室重量测定    术后24 h、36 h、48 h、72 h，麻醉，称体重，由右颈总动脉插管经压力换能器四导生理记录仪(RM-6000，日本光电厂)测血压。开胸取出心脏，留取左心室(含室间隔)并称重，测定左心室重量/体重比值。    三、左心室总RNA提取及-MHC和-MHC mRNA水平的测定    用硫氰酸胍-酚-氯仿一步法2提取左心室总RNA,-MHC和-MHC探针各含20个核苷酸3(上海细胞生物学研究所合成)，用T4噬菌体多核苷酸

11、酶(Pharmacia Co.产品)在其5端标记-32P(购自北京福瑞生物工程公司)，依方法4在液体闪烁计数仪检测counts.min-1，探针比活度达3×l08 counts.min-1.g-1，探针标记率为40%。各样品取8.0 g总RNA，采用Dot一blot进行杂交分析3，放射自显影后，剪下杂交纤维膜上各斑点放入5 mL液闪剂中，作液体闪烁计数。    四、统计分析    每组实验重复3次，数据以±s表示，t检验和方差分析。    结 果 

12、;   一、 平均动脉血压(MAP)和左心室重量/体重比(LVW/BW)    表1 各实验组术后不同时间MAP的水平    Tab 1 Characteristics of 2K2C ,captopril and betaloc on MAP after 2K2C(±s,n=6)    24h    36h    48h   

13、 72h    Control    14.28±0.50    14.17±1.17    12.75±1.16    13.11±1.46    2K2C    15.42±0.97    16.31±0.

14、19.    19.46±4.71. .    23.77±1.93. .    2K2C+captopril    11.91±1.68    10.09±1.47    12.84±1.14    11.06±0.63   &

15、#160;2K2C+betaloc    12.56±2.2    11.43±1.37    12.17±0.94    13.02±2.50    .P<0.05,. .P<0.01, vs control    双肾双夹36 h，大鼠动脉血压明显高于假手术组，并持续72 h。巯甲丙脯酸组、倍他乐克组血

16、压术后36 h开始，明显低于2K2C组；在各对应时点，与对照组无显著差异。观察期间(表2)，各实验组在不同时点，各实验组LVW/BW比值均接近，无显著差异(P>0.05)。在2K2C组术后24h,36h,48h和72h时，LVW/BW比值与对照组比无明显差异(P>0.05)。    表2 各实验组术后不同时间LVW/BW的水平    Tab 2 Characteristics of 2K2C,captopril and betaloc on LVW/BW (×10-3)after 2K2C (

17、±s,n=6)    24h    36h    48h    72h    Control    3.37±0.18    2.92±0.27    2.89±0.09    3.37±0

18、.16    2K2C    3.68±0.03    3.44±0.14    4.05±0.40    4.22±0.20    2K2C+captopril    3.34±0.09    2.88±0.02

19、60;   3.34±0.11    3.43±0.33    2K2C+betaloc    3.24±0.21    4.03±0.07    4.11±0.19    3.92±0.27    二、 左心室-MHC和-MHC

20、 mRNA水平的变化    (一)-MHC和-MHC 基因表达的时间过程 在整个实验期间，对照组-MHC和-MHC mRNA水平无明显差异(P>0.05)(结果未显示)。2K2C组大鼠在术后24 h，-MHC表达低于对照组。36 h后，随肾动脉缩窄时间延长,-MHC mRNA含量逐渐减少，72 h时左心室-MHC表达水平仅有(243±34.5) counts.min-1，明显低于对照组-MHC mRNA水平(497.0±23.6) counts.min-1(P<0.05)。与-MHC 变化相反，2K2C组大鼠左心室-MHC

21、 mRNA水平在术后24h高于对照组，并随肾动脉缩窄时间延长,表达亦越来越强。72 h时，-MHC 表达水平为(381.7±93.6) counts.min-1，明显高于对照组(141.0±10.4) counts.min-1(P<0.05)(1)。    (二)血管紧张素转换酶抑制剂巯甲丙脯酸(captopril)的作用 2K2C组术后72 h时，左心室-MHC显著少于对照组。在对应时点，巯甲丙脯酸组左心室-MHC mRNA水平均高于2K2C组，72 h时有显著差异，为2K2C组的1.45倍(P<0.05)；与对照组间无

22、明显差异(P>0.05)。2K2C组大鼠，术后48 h、72 h时，左心室-MHC表达明显高于对照组，分别达到(257.67±6.7) counts.min-1和(381.7±33.6) counts.min-1。巯甲丙脯酸组大鼠，术后36 h、48 h、72 h, -MHC表达均少于2K2C组，72 h时为(152.3±7) counts.min-1，有显著差异(P<0.05)；与对应时点对照组的-MHC含量(134.3±17.3) counts.min-1接近(P>0.05)。结果表明，巯甲丙脯酸能够逆转2K2C肾性高血压早期左心室

23、MHC基因表达的改变(2)。    Fig 1 Dot-blot analysis of MHC mRNA levels in 2K2C hypertension rats    1 斑点杂交分析2K2C高血压大鼠左心室MHC基因表达    Fig 2 Dot-blot analysis of effect of captopril on MHC gene expression in 2K2C hypertension rats at 72h post-operation&#

24、160;   2 斑点杂交分析captopril对2K2C术后72h大鼠左心室MHC基因表达的影响    (三)-肾上腺素能受体阻断剂倍他乐克(betaloc)的作用 为进一步探讨2K2C引起MHC基因表型转换的作用机制，大鼠预先服用等效降压作用的降压药倍他乐克，再接受2K2C手术。术后72 h，倍他乐克组-MHC 表达量为(289.7±31.4) counts.min-1，与2K2C组(257±48.3) counts.min-1水平接近(P>0.05)；仍明显低于对照组(406.0±23.5) counts.min-1(P<0.05)。2K2C组术后72 h，-MHC表达已明显高于对照组(1)；倍他乐克组血压虽然正常，左心室-MHC mRNA含量