染色体步移技术研究进展_图文

1、 年 第 期 梁 成 真 等 ： 色 体 步 移 技 术 研 究 进 展 染 特 异 引 物 简 并引 物 ： 兰 利用 和为引物 进 行 的第一 次 反应 次高 特异 性循 环 次低特 异 性循 环 次较 低特 异 性循 环 次较低 特 异性 循环 次 循 环（ 超级 循环 ） 高特异 性 循环 次 特 异性 产 物（ ） 一 一一一一 卜 非 特异 性产 物（ ） 非特 异性 产物 （ ） 亡 一 二 高 否 ； 释 稀 倍 利 用 引物 进 行第 次 反应（ 次超级 循 环） 一 堑 生 亡二 墨 主 一 丝 高 （ 以检测 到） 可 很低 （ 能检测 到） 不 释 稀 倍 利 用 引物

2、 进行 第 和 次 反应（ 超级 循 环或普 通 反应 ） 异性 产物 （ 二 一 特 ） 一 一 高 （ 以检 测 到） 可 琼脂 糖凝 胶 分析 直 接测 序或 用 作探针 图 原 理 示 意 图 讨 论 和 展 望 以上介 绍 的几种 方法 基本 上代 表 了现有 的染 色 体 步移 技术 ， 根据 其特 点及 试验 材 料 的要 求 ， 选择 恰 当的方法 是 必须 考虑 的 ， 此对 以上 几 种 方 法 进 行 因 综合 比较 （ 。 表 ） 结合基 因组文库 的染 色体 步移 技术 是在 技 术发 明以前分离侧翼 序列 的惟 一方 法 ， 目前 仍然 为广 于需要 构建基 因组

3、文库 ， 过程 繁琐 ， 工程浩 大 ， 时费 费 力， 且成本 较高 ， 因此 对 于近距 离 单 基 因 的染 色体 步 移， 人们更 倾 向于利 用 的方法 。 基于 的染 色 体 步 行 技 术 最 主 要 的 问题 在 于如 何从 序列 信息 未知 的条 件下 设计 两个 特异 性引 物 来 扩 增 未 知 区 域 。 连 接 成 环 、 源 接 头 介 导 外 以及半 随机 引物 代 表 了 种 不 同 的解 决 策略 。 是 最 早 应 用 于 染 色 体 步 移 的一 种 方 大科研工 作者所采用 ， 其最突 出的优 点在 于步移 距离 较长 、 速度 较快 ， 进 行连 续

4、步移 弄 清跨 度 为 数百 个 可 法 ， 作 简单 ， 操 一次 反应 能 同时分 离 到 目的片段 两侧 的序列 ， 但对 于模板 的质 量和 数量 要求 严格 ， 如果 存 在 合适 的酶 切 位 点 ， 优化 自连 体 系 ， 片 段 相 在 对 较 小 时 仍 然 是 理 想 的 选 择 。外 源 接 头 介 导 的 策 略近年 来应 用 比较 多 ， 其在 侧 翼 序 尤 千碱基 （ 的连接 片段 ； ） 同时 ， 以一 次性 获 得数 个 可 包 括 启 动 区 ， 控 区等 在 内 的完 整 的基 因 的 核 苷 酸 序 调 列信息 ， 适用 于遗传背景 不是很清 楚 的情况

5、 下通过 分 子标记克 隆未知新 基 因以及 具有 高 度重 复 序列 或 具 有复 杂结 构 的核苷 酸 片段 的染 色体 步 移 等 。但 是 由 列 分析 方面 ， 但是 该方 法操 作过 程 相对 复杂 ， 有时 还 生 物 技 术 通 报 年 第 期 物 理 剪 切 法 构 建 亚 不 需 要 克 隆 文 库 是 需 要 大 量 连 接 效 率 费 时 费 力 不 存 在 限 制 性 内 切 酶 法 构 建 亚 克隆 文 库 需 要 是 需要 大 量 连接 效 率 合适 酶 切 位 点 不 存 在 需 要 需 要 是 是 自身连 接 效 率 连接 效 率 形 成 环 状 的 条 件

6、连 接 条 件 费 时 费 力 方 向和 分 布 特 殊 的 重 复序 列 引 物设 计 需要 种 引 物 分 子 间连 接 低 低 来 自 特 异 性 的 单 引 物 扩增 来 自 特 异 性 的 单 引 物 扩增 来 自 间 的 扩 增 中等 中等 需 要 是 中等 中 等 新 不需 要 无 高 中等 不 需 要 无 来 自 引 物 的 单 引 物 扩增 来 自随机 引物 的 单 引 物 扩 增 高 高 不 需 要 无 复 性 温 度 随机 引 物 设 计 高 高 需 要末端 加尾 、 磷酸 化或磷 酸化 等处理 ， 去 并且 扩增 长度 较短 ， 非特异 扩增 的风 险较大 ， 不适合

7、大规模 的 样 品分析 ， 是对 于 同一 样 品 进行 连 续 步 移或 者 多 但 点 同时 步 移 时 ， 技 术 就 成 为 了 理想 的 选 择 。 以 新 法 、 和 法法 为代表 的半 随机引 物 策 略 ， 试验 步骤 简单 ， 自动化程 度 高 ， 步行 距 离 长 ， 而且 扩 增 特异 性 高， 因此非 常适合 大规模 的分 离侧 翼序列 ， 尤其 在大 规模 分析 突变体 插入位 点方 面具有 绝对 的优势 。但 是 ， 随机 引物 也有 不尽 人意 之处 ， 半 比如 新 扩增 区域 包 含有 较 短 的 重 复序 列 时 ， 往往 得 不 到 目的 产 物 ， 和

8、生 中重要性 的不断提高 ， 利用染色 体步移技 术克隆重 要功能 的新 基因也将越来越普遍 ， 信随着众 多科研 相 工作 者 的不懈 努 力 ， 色体 步 移新 技 术 将会 不 断涌 染 现， 染色体步移也将会更 加简单 、 快速 。 参 考 文 献 王 闵 霞 ， 欣 荣 ， 天 山 ， 应 用 与 环 境 生 物 学 报 ， 马 王 等 ， （ ） ： ， ， ， ， ： ， ， ， ， ，： ， ， ， ， ， 。 ： 随机简并 引物存 在 有 限 的结 合 位点 ， 于高 度重 复 对 的序列 ， 即使使用 不 同的 简并 引 物 也难 以扩增 获 得 阳性 结果 。因此 ， 在

9、实 际操作 中研 究者往往将上述方 王 文 明 ， 光怀 ， 世 全 ， 传 学报 ， （ ： 江 王 等 遗 ， ） 王 省 芬 ， 拥 民 ， 桂 寅 ， 花学 报 ， （ ） 郑 张 等 棉 ， ： 法 中的两个或两个 以上的技术联合使 用 ， 尤其是 结合 基因组文库 的染色体 步移技 术与结合 的染 色体 步移技术在试验 中的联合 使用 ， 二者 优 势互 补 ， 现 实 了长距离快速染 色体 步移 。随着 生命科 学 在 国计 民 张 俊 成 ， 秀 英 ， 佳 洁 ， 类 作 物 学 报 ， ： 孔 吴 等 麦 ， （ ） 洪 杨 ， 虹 物 化学 与生 物 物 理 进 展 ，

10、（ ） 雷 生 ， ： ， ， ， ： （ 下转 第 页） 加 年 第 期 黄 新 等 ： 物 传 感 器 在 转 基 因产 品 检 测 中 的研 究 进 展 生 ， ， ， ： ， ， ， ， ， ： ， ） ， （ ： ， ， ： ， ， ， ， ， ， ， ， （ ）： ， ， ， ， ， ， ， ， ， ，（ ）： ， ， ， ， （ ）： ， ， ， （ ） ： ， ， ， ， ， （ ） ： ， ， ， （ ， ）： （ ， ， ）： ， （ ） ， ， ： ， ， ： ， （ ） ， ， ， ： ， ， ， ： ， ， ， （ ： ， ， ） ， ， ， 。 ， ： ， ， ，

11、， ， ： ， ： ： 卯 ， ， ， 粥 ， ， ， ： ， ， ： ， ， ， ： ， ， ， ， ： ， ， ， ： ， ， ， ， ： （ ）： ， ， ： ， ， ， ， ， ， （ ， ， ）： ， ，（ ） ： ， （ 上接 第 页） ， ， ， ， ： ， ， ， ： ， ， ， ， ， ： ， ， ， ： ， ， ： ， ， ， ， ： ， 洪宇植 ， 肖亚 中 ， 伟 ， 光 生 物 学 报 ， ， ： 房 等 激 （ ） ， ， ， ： ， （ ） ， ， ： ， （ ） ， ， ， ： ， ， （ ） ， ， ， ： （ ） ， ， ， ： ， ， ， ： ， （ ） ， ， ： （ ： ， ， ， ） 洪 登 峰 ， 丽 丽 ， 光 圣 子 植 物 育 种 ， ： 万 杨 分 ， （ ） ， （ ， ， ）： （ ： ， ， ， ） ， ， ， ） （ ： ， ， ，