DNA纯度的判断

1、5/ 5RNA。低于此范围表明蛋白质含量超标，高于此范围表明样品中含有一般机器给出的比值是分子分母同时减 OD320所得，你可以自己算一下 OD260/OD280如果在要求的范围内，说明你的OD320偏高,即可能有有机物污染 比如酒精未充分挥发我要纠正一下，纯 DNA 的 A260/A280 应大于1.8,纯的RNA应达到2.0，样品中如果含有蛋白质及苯酚， A260/A280 比值会明显下降。对于纯 的样品，只要读出260nm的A值即可以算出含量。通常以 A值为1相当于50 微克/ml双螺旋DNA,或者40微克/ml单链DNA（ RNA），或者20微克/ml寡 核苷酸计算。OD260/ OD

2、2801.92.0 RNA居多纯度已经很高了纯 DNA：OD260/OD28g1.8（1.9，表明有RNA污染；V1.6，表明有蛋白质、酚等污染）纯 RNA：1.7V OD260/OD280V2.0（V1.7 时表明有蛋白质或酚污染；2.0时表明可能有异硫氰酸残存） 0D是optical density （光密度）的缩写， OD= log （1/trans）,其中trans为检测物的透光值。吸光度,absorba nee是指 光线通过溶液或某一物质前的入射光强度与该光线通过溶液或物质后的透射光 强度比值的对数,影响它的因素有溶剂、浓度、温度等等吸光系数与入射光的 波长以及被光通过的物质有关。只

3、要光的波长被固定下来,同一种物质,吸光 系数就不变。当一束光通过一个吸光物质（通常为溶液）时,溶质吸收了光 能,光的强度减弱。吸光度就是用来衡量光被吸收程度的一个物理量。吸光度用A表示，A= abc,其中a为吸光系数，单位L/（g?cm）,b为液层厚 度（通常为比色皿的厚度），单位 cm , c为溶液浓度，单位g/L影响吸光度的 因数是b和c。a是与溶质有关的一个常量，温度通过影响 c,而影响A。一般来说OD260代表核酸的吸光度，OD280代表蛋白质的吸光度，OD230代 表其他杂质 （多糖等 ）的吸光度。A260/A280与OD260/OD280的意思是一样的。A代表吸光值，而 0D是光

4、密度值,一个意思。比值一度成为判断核酸纯度的唯一通用标准，纯的DNA 一般在1.8-2.0之间；后来发现在抽提过程中使用的许多试剂影响A260和A280读数；同时,对同一样品 10倍数量级稀释后测定吸光值发现,分光光度计的吸光值仅 在一定的区域是线性的。结论是：当 A260 读数处在0.1-0.5之间，A200到A320之间的数值构成一条光滑的曲线时，少量苯酚（30ul/ml）残留使A230, A260, A280均变大（差不多增加一倍），但 A260/A280和A260/A230均在2左右。少量异硫氰酸胍（132 uM）残留使A230变 大,但 A260, A280 几乎不变,所以 A260

5、/A280 仍在 2 左右,而 A260/A230 大 大低于 2。大量异硫氰酸胍 （2.4M）残留使A230, A260, A280均变大，根本就没有办法测定了。 PEG （6.25%）残留使A230, A260, A280均变大，但对A230, A260影响更大，所 以 A260/A280 比 2 大不少，而 A260/A230 仍在 2 左右。核酸抽提中常用的试剂，如 Phenol， Guanidine Isothiocyanate， PEG 都能使A260和A280的值变大，但是却可能使二者的比值与高纯度核酸的比值一致。 因为A260值几乎是峰值，所以有必要在其两边各取一个：A280和

6、A230。干净的核酸 A260/A230应该在2左右。如果有在 230nm处 的强吸收提示污染有酚盐离子等有机化合物1. 蛋白质污染：确保不要吸入中间层及有机相。减少起始样品量，确保裂解完全、彻底。 加入氯仿后首先要充分混匀，并且离心分层的离心力和时间要足够。如果所得 RNA的OD260/OD280比值偏低，则用氯仿重新抽提一次，再沉淀，溶解。2. 苯酚残留：确保不要吸入中间层及有机相。加入氯仿后首先要充分混匀，并且离心分 层的离心力和时间要足够。3. 多糖或多酚的残留：一些特殊的组织和植物中，多糖、多酚含量较多，这些残留也会导致 OD260/OD280比值偏低。因此，从这类材料中提取 RNA

7、时，需要注意多糖、多 酚杂质的去除。4. 设备限制：测定OD260及OD280数值时，要使 OD260读数在0.1-0.5之间。此范围线性最好。用水稀释样品：测 OD 值时，对照及样品稀释液请使用 10mM Tris， pH7.5。用水作为稀释液将导致比值偏低比值低可能有蛋白污染，高了可能有 DNA污染，建议你抽提的RNA分三 管，两管保存，另一管用来跑胶和测定 0D,跑胶是最直观的，1%的胶就可以, 抽提后马上跑，一般不会降解很多，所以设备材料不需要去酶处理尊敬的老师 们，同学们下午好：我是来自 10 级经济学（2）班的学习委，我叫张盼盼，很荣幸有这次机会和大家一起交流担任学 习委员这一职务

8、的经验。转眼间大学生活已经过了一年多，在这一年多的时间里，我一直担任着学 习委员这一职务。回望这一年多，自己走过的路，留下的或深或浅的足迹，不 仅充满了欢愉，也充满了淡淡的苦涩。一年多的工作，让我学到了很多，下面 将自己的工作经验和大家一起分享。学习委员是班上的一个重要职位，在我当初当上它的时候，我就在想一定 不要辜负老师及同学们我的信任和支持，一定要把工作做好。要认真负责，态 度踏实，要有一定的组织，领导，执行能力，并且做事情要公平，公正，公 开，积极落实学校学院的具体工作。作为一名合格的学习委员，要收集学生对 老师的意见和老师的教学动态。在很多情况下，老师无法和那么多学生直接打 交道，很多老师也无暇顾及那么多的学生，特别是大家刚进入大学，很多人一 时还不适应老师的教学模式。学习委员是老师与学生之间沟通的一个桥梁，学 习委员要及时地向老师提出同学们的建议和疑问，熟悉老师对学生的基本要 求。再次，学习委员在学习上要做好模范带头作用，要有优异的成绩，当同学 们向我提出问题时，基本上给同学一个正确的回复。总之，在一学年的工作之中，我懂得如何落实各项工作，如何和班委有效 地分工合作，如何和同学沟通交流并且提高大家的学习积极性。当然，我的工 作还存在着很多不足之处。比日：有的时候得不到同学们的响应，同学们不积极主动支持我的工作；在收集 同学们对自己工作意见方面做得不够，有些事情做错