单宁酸在不同pH缓冲液条件下的含量变化-最新文档

1、单宁酸在不同pH缓冲液条件下的含量变化单宁酸( Tannic acid )是一种存在于多种天然药用植物的 多元酚类化合物， 具有很强的生物和药理活性， 是具有重要开发 价值的天然产物1。分子式C76H52O46能溶于乙醇、水、丙 酮，几乎不溶于苯、乙醚、石油醚、氯仿等 2 。，是没食子酸 酯及其衍生物与葡萄糖或多酚通过酯键相连形成的化合物，遇 酸、碱、酶能够水解，水解时能生成双没食子酸酯，双没食子酸 酯能进一步水解成没食子酸和葡萄糖等小分子化合物 3-5 。单 宁酸存在于多种植物的树皮和果实中，如中国五子、塔拉果荚、 石坚石榴、漆树叶、黄护、金缕梅树、柿子、君迁子、葡萄、李 子、梨、山核桃、橘

2、子、桃子、山楂、茶叶等。单宁酸在医学上 能用于收敛、 止血、 抗菌消炎、 止泻、驱虫、 抗多种病原体感染， 对化学诱变的皮肤、肺、前胃肿瘤有很好的抑制作用，能与细胞 外或组织外的钙离子络合 . 可抵抗平滑肌钙诱导的收缩，发挥降 血压作用 6 ，能够阻碍鸟氨酸脱羧酶的诱导和过氧化物的产生， 提高老鼠体内的抗氧化和抗癌效果 7 ，对 HIV-RT 有一定抑制活 性8 ，还具有抗突变、抗脂质过氧化、改善肝肾功能、降脂等 作用 9 。食品领域中能作酒类和饮料的澄清剂、稳定剂以及食 品添加剂中的辅色、调味、赋形等 10-12 ，此外单宁酸在制革、 日化、冶金、染料、电子及轻工等领域中也应用广泛。没食子酸

3、( Gallic acid )也是一种多酚类弱酸性化合物 化学式为 C7H6O，5 化学命名为 3 ，4，5- 三羟基苯甲酸 13 。通 常以糖苷键或酯键的形式与多元醇结合成水解单宁存在于植物 体和果实中，能溶于热水、乙醇、乙醚、甘油和丙酮，难溶于冷 水，不溶于苯和氯仿。在碱性和中性条件下较不稳定，而对强酸（1mol/L ）、强光、高温较稳定，在pH为26的磷酸盐缓冲液 条件下能保持相对稳定 14 。没食子酸对肝脏、肾脏、心血管有 较强的亲和力，具有抗突变、抗炎、抗氧化、抑菌、降血糖、心 血管保护等生物学效应，其中对肿瘤、多种致癌、促癌物有突出 的抵抗作用 15-20 。单宁酸和没食子酸作为一

4、种在医药等领域都具有重要作用 的多酚类鞣质， 为合理地利用单宁酸等多酚类鞣质， 本实验根据 单宁酸的化学性质及没食子酸的稳定性，观察单宁酸在不同 pH 缓冲溶液中水解后含量及其产物没食子酸的含量变化情况。1 实验材料与仪器1.1 实验药品单宁酸样品（购自成都迈斯克公司）；单宁酸 对照品（购自云南省药检所）；没食子酸对照品（购于昆明中检 所）；1.2 仪器与试剂 Agilent1200 型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；分析天平；电子天平；精密 pH测定仪计（O.OIpH）; HH-S数显恒温水浴锅；移液管；烧杯；玻璃棒；容量瓶；0.45um微孔滤膜；1mL注射器；甲醇（色谱纯）；磷酸（分析纯

5、）；磷 酸氢二钠（分析纯）；丙酮（分析纯）；纯化水；2 实验方法2.1磷酸盐缓冲液的配制 A液：取磷酸16.6 mL,加纯化水 至1000 mL,摇匀。B液：称取磷酸氢二钠 71.63 g，加纯化水 使溶解成1000 mL。取上述 A液72.5 mL与B液27.5 mL混合配 制，摇匀，即得pH=2.00的缓冲液。以pH=2的缓冲液为基本底 液，再用纯化水将其稀释成 pH为2、3、4、5、6的缓冲液。2.2 对照品溶液的制备取没食子酸对照品适量,于分析天平 上精密称定，加50%甲醇溶解配制定容成每1 mL含25卩g的溶 液,即得；取单宁酸对照品适量,于分析天平上精密称定,用乙 醇：水：丙酮（6

6、9.9%: 29.8%: 0.3%）溶解定容成每1 mL含30 卩g的溶液，即得。2.3 供试品溶液的制备取单宁酸样品适量,精密称定样品0.00500 g ,以乙醇：水：丙酮（ 69.9%： 29.8%： 0.3%）溶解, 配制定容成每1 mL含20卩g的溶液25 mL。取移液管分别吸取 制备好的单宁酸样品溶液 1 mL,放入固定体积的不同pH的磷酸 盐缓冲液中, 超声使其溶解和混匀, 以恒温水浴锅控制水浴环境 温度在25±0.5 C,让单宁酸样品溶液在恒温条件下充分水解 1 h,对水解后的样品液用微孔滤膜（0.45 um）进行过滤后，即得 供试品溶液。2.4 色谱条件2.4.1单宁

7、酸色谱条件色谱柱 ZoRBAX SB-C18±（ 4.6 X 250 mm 5 um）;流动相：甲醇-水（80： 20）;柱温：室温；检测波长：275 nm；流速：0.5 mL/min ;进样量：2 uL21。242没食子酸色谱条件色谱柱 ZoRBA>SB-C18柱（4.6 X 250 mm 5 um ;流动相：甲醇和 0.2%磷酸（5: 95）;柱温：25C； 检测波长：273 nm；流速：1 mL/min ;进样量：10 uL。2.5 标准曲线的绘制2.5.1 单宁酸标准曲线的绘制于分析天平上精密称定定量的 单宁酸对照品，以乙醇：水：丙酮（ 69.9%： 29.8%： 0.

8、3%）溶解 定容配制成每1 mL含31卩g的溶液，按上述单宁酸色谱条件分 别取 1、3、5、7、9ul 不同体积进样，以单宁酸的峰面积（Y）对标准品的质量（X）进行线性回归，得回归方程Y=5261.5X-24.993 , R2=0.9987，结果表明：单宁酸峰面积值与 质量有良好的线性关系，线性范围为 0.132-0.396 ug 。2.5.2 没食子酸标准曲线的绘制取没食子酸对照品适量，于分析 天平上精密称定，加50%甲醇溶解配制定容成每1 mL含33卩g 的溶液，按上述色谱条件分别进样4、6、& 10、12卩L,以没食子酸的峰面积（Y）对标准品质量（X）进线性回归，得方程Y=174

9、0.2x-68.001 , R2=0.9964，结果表明：没食子酸峰面积值 与质量有良好的线性关系，线性范围为 0.062-0.31 ug 。2.6 单宁酸和没食子酸的含量测定分别取 2.3 项下方法制备 的供试品溶液， 按 2.4 色谱条件分别测定单宁酸、 没食子酸在不 同pH的磷酸盐缓冲液条件下的含量，用外标法进行计算。3 实验结果与分析3.1从图中可以看出，在pH26的范围内，随着pH值的增 大，单宁酸含量逐渐减少 （见图 3），没食子酸含量逐渐增加 （见 图 4）。据此表明单宁在接近中性环境中更易水解产生没食子酸。3.2 从表 1 中的数据中可以看出，当 pH 2 4 的范围内，单 宁酸含量下降速度快， pH 5 6 时单宁酸含量下降速度慢，而没 食子酸含量在 pH24 范围内上升慢， 在 pH5 6 时含量上升快， 说明在 pH2 4 范围极大部分的单宁并未转化为没食子酸，其有可能产生1, 2, 3, 4, 6-五-O-没食子酰-B -D-匍萄糖（B -PGG、 双没食子酸酯、双没食子酸等其它的多酚化合物。说明 pH2 4 在不利于单宁酸酯键断裂产生没食子酸。3.3 通过实验数据分析单宁酸和没食子酸的含量变化，可以 初步认为在温和的pH条件下更有利于单宁的酯键或苷键断裂产 生没食子酸。4 结论单宁酸和没食子酸存在于多种药用植物中，