产黄青霉生长曲线的测定(精)

1、产黄青霉生长曲线的测定一、实验目的1、掌握测定生长繁殖的基本原理与几种方法。2、掌握微生物的典型生长曲线。二、实验原理测定微生物生长繁殖的方法主要可分为两大类。一）测生长量法，适用于一切微生物。 1、直接法：包括测体积法、称干重法等。 2、间接法：包括比浊法、生理指标法。二）计量繁殖数法，只适用于单细胞状态的微生物或丝状微生物所产生的孢子。 1、直接法：比例记数法、血球计数板法。2、间接法：液体稀释法、平板菌落计数法等。产黄青霉是工业上用于发酵生产青霉素的重要丝状真菌，其发酵产物在临床应用和医药工业中占有极其重要的地位。菌丝量是菌体细胞内部生长信息最直接的反映，是微生物发酵过程中重要的生化参数

2、。青霉素发酵过程中菌体量的测定，对于其动力学研究和建模控制都具有很重要的意义。根据菌丝量可以确定合适的补料量、供氧量和合适的生长环境，以及合适的提取时机，从而有利于大量生产抗生素。当少量纯种单细胞微生物接种到恒容积的液体培养基中后，在适宜的温度、通气等条件下，它们的群体就会有规律的生长起来。如果以细胞数目的对数值作纵坐标，以培养时间为横坐标，就可以画出一条有规律的曲线，这就是微生物的典型生长曲线根据微生物的生长速率常数，即每小时的分裂代数的不同哦，般可把典型生长曲线粗分为延滞期、指数期、稳定期和衰亡期等四个时期。三、实验材料1、菌种产黄青霉 (Pencillium chrysogenum)。2

3、、培养基发酵培养基各组分：乳糖22.5g,葡萄糖7.5g,醋酸铵3.0g,乳酸铵 5.0g，Na2SO4 0.5g，MgSO4?7H2O 0.25g，FeSO4?7H2O 0.1g，CuSO4?5H2O 0.005g， MnSO4?7H2O 0.02g， CaCl2?2H2O 0.05g，ZnSO4?7h2O 0.02g,苯乙酸 1.0g,蒸馏水 1000ml, pH 6.5, 121 C灭菌 20min。注意：微量元素配成母液,按需要加入,苯乙酸用乙醇溶解后再加入。3、器材超净台,培养箱,天平,干燥箱玻璃漏斗,定量滤纸等。四实验方法与步骤1. 离心法将待测培养液放入离心管中, 用清水离心洗涤

4、 1-5 次后(3000rpm,10min),进行干燥。干燥温度可采用100度，105度或红外线烘干,也可在较低温度下( 80 或 40 度)真空干燥。然后称重。2.过滤法丝状真菌可采用滤纸过滤，而细菌可采用醋酸纤维素膜等滤膜过滤。过滤后，细胞可用少量水洗涤，然后在40度下真空干燥，称量干重。五.实验内容1每个大组接种三个培养基，并设一个空白对照瓶。2.按照不同的培养时间，6h,12h,36h,72h,144h,168h从三角瓶中取样,六.实验结果60.04655120.05915360.1077720.08251440.10591680.12841系列1七.思考题次生代谢产物的大量积累发生在那个时期？根据微生物生长繁殖的 规律，采用哪些措施可使次生代谢产物积累更多？ 答：稳定期1. 补加前体类似物2. 加诱导物3. 防止碳代谢阻遏或抑制的发生4. 防