临床血液学检验操作规程G

1、临床血液学检验标准操作规程文件编号编制部门检验科发布日期2004 年 9 月 28 日实施日期2004 年 10 月 8 日版本2.0页数共 X 页编制张淑芳审核梁勇批准朱才义文件受控号文件修订稿修 订 记 录修订 版次修订 日期页码对应 条款修订内容批准淄博万杰肿瘤医院检验科1. 血液一般检验1.1适用范围适用于检验科血液常规检验操作1.2基本操作规程1.2.1血液标本采集1.2.1.1末稍血标本采集：(1)采血部位：成人以左手无名指为宜，婴幼儿通常自拇指或足跟两侧采血。(2)轻轻按摩采血部位，使其自然充血。用 75%酒精棉球消毒局部皮肤，待干。(3)紧捏刺血部位，用一次性无菌刺血针穿刺取血

2、。动作应迅速，深度约 23 ，稍加挤压，以血液能流出为宜。(4)用干棉球擦去第一滴血，按需要依次采血。(5)采血完毕，用消毒干棉球压住伤口止血片刻。 参考：叶应妩等主编 .全国临床检验操作规程 (第二版) .第 1 页 .1997.1.2.1.1静脉血标本采集： 静脉血标本采集主要由申请检验科室的护士完成(参见相应操作规程) 。 真空(负压)采血技术已经成为欧美国家血液采集技术标准，中华医学会检验 医学分会鼓励在全国推广真空(负压)采血技术。1.2.2血液常规检验(1)标本接收和标本采集1)血常规检验采用2抗凝的静脉血或末梢血标本。2)血常规检验应尽量采用静脉血标本；对特殊患者(如新生儿、必须

3、为治疗 保留静脉血管的肿瘤患者等) ，可以采用末梢血标本。3)检验人员在接收临床血常规检验标本时，应对送检标本和检验申请单进行 认真核查，并对不合格标本和不合格检验申请单作相应处理。(2)基本操作步骤1)对检验申请单和标本管作对应编号；2)将血标本充分混匀；3)按照血细胞分析仪操作规程上机检测、打印结果。(3)结果分析和报告1)检验人员应参照血常规检验参考值指标和临床诊断审核检验结果。如发现 与临床诊断不符的检验结果，或有以下异常结果，应对标本进行复查：A. 血红蛋白低于 100 或高于 180B. 白细胞低于 3.0X109或高于 20X109(新生儿例外)C. 血小板低于 80X109或高

4、于 450X109D. 白细胞分类比例异常，且与临床诊断不符2)急诊血常规检验应在标本送达后半小时内发出检验报告。123 手工法血细胞分析123.1 白细胞计数 取小试管一支，加白细胞稀释液 0.38。用微量吸管准确吸取末稍血 20，擦去管尖外部余血，将吸管插入试管中稀释 液底部，轻轻将血放出，并吸取上层清液反复嗽洗吸管二次，最后用手摇动试 管混合。 充池，静置 23，待白细胞下沉后，用低倍镜计数四角4 个大方格内的白细胞数。 计算 白细胞=4 个大方格内的白细胞总数X50X106参考值：成人4X109 10X109儿童5X109 12X109新生儿15X109 20X109参考：叶应妩等主编

5、.全国临床检验操作规程（第二版）.第 45 页.1997.1.2.3.2 白细胞分类计数（1）采血后推制厚薄适宜的血膜片，血膜应呈舌状，头、体、尾清晰可分。 推好的血膜在空气中待干，天气寒冷或潮湿时，应于 37r保温促干，以免细胞 变形缩小。染色1） 瑞氏-姬姆萨法：平置血膜片于染色架上，滴加染液 35 滴，使其迅速盖满 血膜约 1后，滴加缓冲液 510 滴，轻轻摇动玻片或对准血片吹气，与染 液充分混合，510后用水冲去染液待干。2） 选择涂片的体尾交界处染色良好的区域，在油镜下计数 100 个白细胞，按 其形态特征进行分类计数，求出各类细胞所占比值（百分率）。参考值细胞类别成人中性粒细胞 杆

6、状核 分叶核1% 5%50% 70%嗜酸性粒细胞0.5% 5%嗜碱性粒细胞0% 1%淋巴细胞20% 40%单核细胞3% 8%（参考全国临床检验操作规程（第二版）.第 56 页.1997.）1.2.3.3 血小板计数（1）取清洁试管，加入血小板（草酸铵法）稀释液 0.38。准确吸取毛细管血 20，擦去管尖附着血液，置于血小板稀释液内，立即充分 混匀，待完全溶血后，再次混匀 1。 取上述均匀的血小板悬液 1 滴，注入血球计数板的计数池内。 静置 1015，使血小板下沉。 用高倍镜计数中央 1 个大方格（400 个小格）内血小板，乘以 0.2X109即为每 升血液内血小板数。（在相差显微镜或暗视野显

7、微镜下进行血小板计数，效果 更佳）（6）参考值：100300X109（参考全国临床检验操作规程（第二版）.第 22 页.1997.）123.4 嗜酸性粒细胞直接计数（1）操作1） 小试管中加液或乙醇-伊红稀释液 0.38。2） 常法取末稍 20，加入管内混匀，待红细胞溶解后两侧充池。3） 静置 35，用低倍镜（必要时用高倍镜）镜下计数10 个大方格内嗜酸性粒细胞数。计算与报告10 个大方格内嗜酸性粒细胞数X20X106=嗜酸性粒细胞参考值：50300X10（50300）（参考全国临床检验操作规程（第二版）.第 11 页.1997.）1.2.3.5 网织红细胞计数（1）基本操作1） 于小管中滴加

8、 1 滴 1%的煌焦油蓝生理盐水溶液。2） 加入末稍血 2 滴于上述试管中混匀。3） 静置 1520 后，取用 1 滴制成薄血片。4）油镜下检查 1000 个红细胞中网积红细胞数，以百分率或绝对值报- 参考值：成人0.51.5%新生儿3.06.0%（参考全国临床检验操作规程（第二版）.第 1415 页.1997.）1.2.3.6 嗜碱性点彩红细胞计数（1）基本操作1） 按常法制成薄血片，自然干燥后，用甲醇固定 3。2） 碱性亚甲基蓝染液 12，水洗、待干。3） 油镜下检查 1000 个红细胞中嗜碱性点彩红细胞数，以百分率报告。（2）参考值：V0.01%（V100/ 106红细胞）（参考全国临床

9、检验操作规程（第二版）.第 16 页.1997.）1.2.3.7 异常红细胞检查（1）大小异常正常红细胞大小一致，直径为 69，在各种贫血时，红细胞可出现大小不一，凡直径10者称大细胞，15 者称巨红细胞，常见于巨幼细胞性贫血、肝脏 疾病等；直径V6 者称小细胞，多见于缺铁性贫血病。（2）形态异常1）球形红细胞红细胞直径通常V6，厚度增加，通常2.6，因而红细胞呈小圆球形， 细胞中心区血红蛋白含量较正常红细胞多，常见于下列疾病：A.遗传性球形红细胞增多症；B.自身免疫性溶血性贫血；C.异常血红蛋白病(及病等)2)椭圆形红细胞 红细胞呈椭圆形，横径缩短，长径增大，有时可呈畸形。正常人血液中也可见

10、到，但最多不超过 15%。这种红细胞增多见于：A.遗传性椭圆形红细胞增多症，一般要高于 25%50%才有诊断价值。B.大细胞性贫血，可达到 25%。C.其他各类贫血都可有不同程度的增多。3)靶形红细胞比正常红细胞扁薄， 中心有少许血红蛋白， 部分可与周围的血红蛋白连接， 边缘部染色深，故呈靶状。主要见于：A.地中海贫血；B.严重缺铁性贫血；C.一些血红蛋白病(血红蛋白 C、D、E、S 病)；D.肝病、脾切除后阻塞性黄疸等。4)镰形红细胞 细胞狭长似镰刀，也可呈麦粒状或冬青叶样。主要见于遗传性镰形红细胞 增多症。5)口形红细胞红细胞淡染区呈裂口状狭孔。正常V4%。增高见于：A.口形红细胞增多症；

11、B.急性乙醇中毒。6)棘形红细胞 棘形红细胞是一种带刺状的红细胞，刺呈针刺状或尖刺状，见于：A.棘红细胞增多症(遗传性血浆B-脂蛋白缺乏症)，可高达 70%80%B.严厉重肝病或制片不当。7)皱缩红细胞 红细胞表面有圆形棘样突起，可见于干燥太慢的血片，也可见一于急性铅 中毒，尿中毒症等病人的血片上。8)锯齿细胞 也称刺毛细胞，形态和皱缩细胞相似。主要见于尿毒症、微血管病性溶血 性贫血、丙酮酸激酶缺乏症、阵发性睡眠性血红蛋白尿症等。9)裂片细胞 指红细胞碎片，包括盔形红细胞等，多见于、微血管病性溶血性贫血和心 原溶血性贫血等红细胞破碎综合征。其他也见于化学中毒、肾功能不全、血栓性血小板减少性紫癜

12、等。(3)染色异常1)着色过浅 红细胞中心淡染区扩大，多见于缺铁性贫血、地中海贫血及其他血红蛋白 病。2)着色过深中心淡染区不见，着色过深，多见于先天性溶血性贫血及大细胞性贫血患 者。3)嗜多色性红细胞 红细胞染成灰蓝色、灰红色、淡灰色，较正常红细胞稍大。这是一种尚未 完全成熟的红细胞，多染性物质是核糖体，随着细胞的成熟而逐渐消失，主要见增生性贫血。(4)结构异常1)嗜碱性点彩红细胞 用亚甲基蓝染色，成熟红细胞胞浆内有散在的深蓝色嗜碱性颗粒，外周血 中有点彩红细胞增多，表示贫血时骨髓再生旺盛或有紊乱现象。某些重金 属中毒时，可大量出现。2)卡波环成熟红细胞浆内有染成紫红色的细线状环，呈圆形或

13、8 字形，可能是残留 核模所致，见于恶性贫血、溶血性贫血、铅中毒等。3)豪-周小体的核碎块 成熟红细胞中含有紫红色圆形小体，大小不等，数量不一，可能是残留的 核染色质微粒。见于增生性贫血、脾切除后、巨幼细胞性贫血、恶性贫血 等。4)有核红细胞 正常人血片中不见， 溶血性贫血、 急慢性白细胞病、 红白血病、 髓外造血 及严厉重缺氧等常见到。(参考全国临床检验操作规程 (第二版). 第 1718 页. 1997. )1.2.3.8 异常白细胞形态检查在外周血象中， 除了各类白血病幼稚细胞外， 通常能见到一些细胞形态上的异常 变化。(1)中性粒细胞1)核象变化：反映中性粒细胞的成熟程度，正常血象中有

14、少量杆状核细胞出 现，它与分叶核细胞之间的比值约占 1:13。A. 核左移：是指杆状核细胞增多，常见于感染 .如晚幼粒、中幼粒等细胞 增多为核左移，多见于类白细胞病反应或白血病。 再生性左移伴白细胞总数增高的核左移，常见于急性化脓性感染，如大叶性肺炎等。退行性左移白细胞总数不增高或减低的核左移，常见于严重感染， 机体低抗力低下时，如伤寒伴感染中毒性休克的败血症等。B. 核右移：是指不仅分叶核粒细胞增多，且分叶过多、常见 4 叶、5 叶(正 常时多分 3叶)，这是造血功能衰退或造血物质缺乏的表现。常见于 营养性巨幼细胞性贫血和使用抗代谢药物后。此外，疾病进行时突然 出现核象右移，表示预后不良。2

15、)毒性变化：严重感染、恶性肿瘤、各种重金属或药物中毒、大面积烧伤等 症时，中性粒细胞可出现形态变异。A. 细胞大小不均：为骨髓内幼稚粒细胞发生不规则和分裂增殖所致。B.毒性颗粒：胞浆中部分或全部颗粒变粗，着色深，颗粒的分布及大小 不等，可能为中性颗粒成熟过程中发生变性所致。C.空泡：可在胞浆或核中出现，常为多个。被认为是细胞脂肪变性后末 能着色所致。D.体：胞浆内出现嗜碱性点、线、梨形或云雾状物质，可能为核浆发育 不平衡所致，为细胞严重毒性变的表现。E.核棘突：胞核有各种形态的芽状突出，临床意义尚不明确，可能中毒、 癌转移、严重的放射损伤等有关。3）退行性变：表现为胞体肿大，结构模糊，边缘不清

16、。胞核可呈固缩、肿胀、 破碎、溶解等变化，退行变可以细胞衰老死亡的表现。淋巴细胞淋巴细胞形态变异在多种疾病，如各病毒感染，传染性单核细胞增多症最为常 见，此外疟疾、过敏性疾病、淋巴结炎等亦可见，统称为异型淋巴细胞。传染 性单核细胞增多症患者血液中常可出现 3 种异型淋巴细胞，即空泡型、不规则 型和幼稚型。（参考全国临床检验操作规程（第二版）.第 67 页.1997.） 123.9 机器检测见 1.2.4 红细胞沉降率（血沉）试验（1）基本操作1） 血沉检验采用 3.8%枸橼酸钠 1:4 抗凝静脉血（如：抗凝剂 0.4 +静脉血 1.6，或抗凝剂 0.6 +静脉血 2.4 ）。2） 对检验申请单

17、和标本管作对应编号后，将标本充分混匀。3） 用血沉管将血液吸取到“ 0”刻度处，将管直立于血沉架上，室温中静置1小时，观察并记录结果。参考值男：V15 60女：V20 60（参考全国临床检验操作规程（第二版）.第 14 页.1997.）3.出凝血检验3.1 检验科目前开展的出凝血检验项目包括：（1）血小板检查（血小板计数和平均血小板体积测定）；（2）二聚体测定；3P 试验（血浆硫酸鱼精蛋白副凝固时间试验）（凝血酶原时间）（部分活化凝血活酶时间）（纤维蛋白原）（7）（国际标准比值）（以上第（4）（7）项合称“出凝血四项”检验）3.2标本要求3.2.1血小板检查采用2抗凝的静脉血或末梢血标本；其他

18、出凝血检验采用 3.2% （109 ）枸橼酸钠按 1: 9 比例抗凝的静脉血标本（0.2 3.2%枸橼酸钠 + 1.8 静 脉血）。3.2.2标本应在采血后半小时内送检（条件许可时应尽量在实验室采集） ，采血时应 一针见血，应避免止血带压迫时间太长引起血浆成份改变，标本运送过程应减 少机械振动，以免引起溶血（应鼓励全院临床科室采用真空采血管和配套使用 一次性采血针）。3.2.3部分治疗药物可能会导致出凝血试验结果异常，对于正接收药物治疗（如肝素 溶栓治疗）的患者，临床医师在申请检验时应在检验申请单上注明临床诊断及 治疗现状。3.2.4溶血的标本（抽血不顺利等原因造成）、血球压积明显异常的标本（如从患者 输液管抽取的血标本等）、血浆成份发生明显改变的标本（如血透患者的血标 本、乳糜血标本等）以及标本量太少或抽血后放置时间太长（如超过2 小时）的血液标本，不适合作出凝血检验