生物安全实验室操作技术规范ppt课件

1、:个人防护装备容器中的病原体走漏预防接种感染途径/感染剂量传播易感宿主规程/设备潜伏期医学监测规程/设备生物安全防护实验室生物安全防护实验室硬件：硬件：实验室的设计建造实验室的设计建造设备的配置设备的配置个人防护装备个人防护装备软件：软件：严格的管理规程严格的管理规程良好的操作规程良好的操作规程:分散相内含有微生物的气溶胶称之为生物气溶胶分散相内含有微生物的气溶胶称之为生物气溶胶:病原微生物实验室相关感染的途径病原微生物实验室相关感染的途径1 1）表表9-1 9-1 （p.78p.78）:病原微生物实验室相关感染的途径病原微生物实验室相关感染的途径3 3）:菌液瓶):一些在自然环境中可以繁殖的

2、微生物，一旦进入实验室一些在自然环境中可以繁殖的微生物，一旦进入实验室的空调或通风系统，污染空调冷却水，可形成更广泛的的空调或通风系统，污染空调冷却水，可形成更广泛的微生物气溶胶污染。微生物气溶胶污染。患有呼吸道传染病或皮毛上染有病原微生物的实验动物患有呼吸道传染病或皮毛上染有病原微生物的实验动物也可以产生微生物气溶胶。也可以产生微生物气溶胶。微生物气溶胶在一个实验室内产生后，还可以通过气流微生物气溶胶在一个实验室内产生后，还可以通过气流转移到同一建筑物的其他地方，甚至污染整个建筑物的转移到同一建筑物的其他地方，甚至污染整个建筑物的空气。空气。 : Laboratory Biosafety M

3、anual 3rd edition - lab commissioning and certification - lab biosecurity conceptsBiosafety:To promote the use of safe practices in the handling of pathogenic microorganisms in the laboratory during transportation in field investigations in manufacturing facilities in health-care facilitiesLaborator

4、y Biosafety Manual1st editionWHO Laboratory Biosafety Manual- translated into F, S, P, Ch, Ru- available on web, CD-Rom, hard copies 1983199320192019需结合国家法规、要求和我国具体情况需结合国家法规、要求和我国具体情况:办公室办公室:1. 严禁用口吸移液管、将实验材料置于口内、或舔标签；2. 所有的实验操作尽量减少气溶胶和微小液滴的形成；3. 应限制使用注射针头和注射器。除了进行肠道外注射或抽取实验动物体液外，注射针头和注射器不能用于移液或用作其他

5、用途；4.实验室应制订并执行处理溢出物的标准操作程序。- 出现溢出、事故以及明显或可能暴露于感染性物质时，处理后，必须向实验室负责人报告；- 实验室应如实记录有关暴露和处理情况，保存相关记录；:5. 污染的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染采用化学或物理学方法）。根据所处理的微生物因子的危险度评估结果准备专门的污水处理系统。6. 只有保证在实验室内没有受到污染的文件纸张才能带出实验室:1. 实验室应保持清洁整齐，严禁摆放和实验无关的物品。2. 每天工作结束后应清除工作台面的污染。若发生具有潜在危害性的材料溢出应立即清除污染。3.所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前，必须

6、先清除污染。4. 感染性材料的包装和运输应遵循国家和或国际相关规定。5. 如果窗户可以打开，则应安装防止节肢动物进入的纱窗。:（五生物安全管理的指导原则（五生物安全管理的指导原则:1. BSL-3的使用应符合的有关规定。2. 张贴在实验室入口门上的国际生物危害警告标志,应注明生物安全级别以及管理实验室出入的负责人姓名，并说明进入该区域的所有特殊条件，如免疫接种状况等。3. 实验室防护服应为长袖、背面开口的隔离衣或连体衣，应穿着鞋套或专用鞋。实验室防护服不能在实验室外穿着，且必须在清除污染后再清洗。最好使用一次性连体防护服。4. 开启各种潜在感染性物质的操作均必须在生物安全柜或其他类似的防护设施

7、中进行。:5. 有些实验室操作，或在进行感染了某些病原微生物的动物操作时，必须配备呼吸防护装备。6. 实行双人工作制，严禁任何人单独在实验室内工作。7. 实验记录未经可靠消毒不得带出实验室。通常使用传真进行原始记录的传输。8. 工作人员应开展健康监测。应收集并妥善保存工作人员的基线血清分装、保管）、并定期体检和采集血清。9. 每天早、晚测体温，有相应的体征或身体不适者不宜进入实验室工作BSL-2以上实验室的实验人员：身体状况良好以上实验室的实验人员：身体状况良好不应进入者：发热、妊娠、其他因素造成的抵抗力低下不应进入者：发热、妊娠、其他因素造成的抵抗力低下 已在实验室控制区连续工作已在实验室控

8、制区连续工作4h以上以上 其他原因造成的疲劳状态其他原因造成的疲劳状态:1. 每次使用前检查2. 不打开观察窗3. 列出工作所需物品的清单，以减少双臂进入破坏气流4. 打开风机5-10min5. 窗式报警器、气流报警器6. 任何造成安全柜内气流紊乱的不良操作都会危及操作者的安全一一. 操作准备操作准备:二二. 物品摆放与污染措施物品摆放与污染措施尽量少放仪器和物品尽量少放仪器和物品不要阻塞气口的空气流通不要阻塞气口的空气流通废物容器废物容器/袋置安全柜内袋置安全柜内 密封密封 消毒消毒安全柜内洁净物品安全柜内洁净物品/污染物品分开放置消毒巾的垫置）污染物品分开放置消毒巾的垫置）操作尽量工作台中

9、央，注意动作对定向气流的影响操作尽量工作台中央，注意动作对定向气流的影响工作用纸不允许放在生物安全柜内工作用纸不允许放在生物安全柜内尽量减少操作者背后人员的走动、快速开关实验室的门尽量减少操作者背后人员的走动、快速开关实验室的门（进入时，敲门提醒正在操作的人员）（进入时，敲门提醒正在操作的人员）8. 禁止使用本生灯禁止使用本生灯/酒精灯，紫外灯不是必需的酒精灯，紫外灯不是必需的:洁净物与污染物分开放置: 在实验结束时，包括仪器在内的生物安全柜里的所有物品应清除表面污染后，才能移出安全柜； 在每次使用前后清除生物安全柜内表面的污染，工作台面和内壁要用消毒剂进行擦拭杀灭任何微生物），但不包括送风滤

10、器的扩散板； 在每天实验结束时，应擦拭生物安全柜的工作台面、四周以及玻璃的内外侧等部位以清除表面的污染。 在对目标生物体有效时，可以采用漂白剂溶液或70%酒精来消毒。在使用如漂白剂等腐蚀性消毒剂后，还必须用无菌水再次进行擦拭。:研究试剂溢漏或泼洒后，立即清除污染物及污染的表面在更换HEPA过滤器或内部维修之前，必须对已用于感染性材料工作的生物安全柜进行消毒在生物安全柜维护、更换过滤器、以及性能测试或重新安置之前，必需消毒最普通的气体消毒方法：甲醛熏蒸推荐将安全柜一直维持运行状态。如果要关闭的话，则应在关机前运行5min以净化内部的气体。:禁用非必需工作台面和内壁要用消毒工作台面和内壁要用消毒剂

11、进行擦拭剂进行擦拭不要擦拭送风滤器的扩散不要擦拭送风滤器的扩散板！板！:干燥器干燥器爆裂、瓶子碎片和感染性物质飞出爆裂、瓶子碎片和感染性物质飞出培养物搅拌器，混合器，搅拌器培养物搅拌器，混合器，搅拌器产生气溶胶、喷溅和溢出产生气溶胶、喷溅和溢出皮下注射针头皮下注射针头意外接种意外接种产生气溶胶或感染性物质溢出产生气溶胶或感染性物质溢出离心机离心机产生气溶胶、溅出和管子破裂产生气溶胶、溅出和管子破裂超速离心机超速离心机管子破裂管子破裂高速搅拌器，组织匀浆器高速搅拌器，组织匀浆器飞沫、渗漏和容器破裂飞沫、渗漏和容器破裂超声波破碎机、超声波清洁器超声波破碎机、超声波清洁器产生气溶胶、听力受损、皮炎产

12、生气溶胶、听力受损、皮炎冻干机冷冻干燥机）冻干机冷冻干燥机）产生气溶胶、直接接触污染产生气溶胶、直接接触污染水浴水浴微生物生长，叠氮化钠和一些金属形成爆微生物生长，叠氮化钠和一些金属形成爆炸复合物炸复合物:1. 为防止感染，严禁用嘴吸液。应使用机械移液装置。2. 所有的吸管都应该有棉塞以减少对移液器或吸球的污染。建议使用带有滤芯的吸头。在BSL-2及以上级别实验室中，最好避免使用玻璃吸管。3. 对于感染性材料不能用吸管吹打来达到混匀的目的，操作时吸管应放入操作液面下的三分之二处，以防止产生气泡和气溶胶。从吸管吹出液体时也不要太用力，吸管内的液体应自动流出，不要强制性排出预留液。4. 污染的吸管

13、应立即浸没在含有适宜的消毒剂的防破碎的容器里。在处理之前，应浸泡足够长的时间。盛装废弃吸管的容器不锈钢盒子应放在生物安全柜里5. 严禁用带有注射针头的注射器吸液6. 为防止从吸管滴落的感染性物质发生扩散，工作台表面应放一块具有吸收性能的材料，使用后应按感染性废弃物予以处理。:离心分类离心分类 转头转速（转头转速（rpm） 微速离心微速离心 15 ,00 0 低低/高速离心高速离心 2,00020,000 超速离心超速离心 120 ,000 :- 离心机机械故障离心机机械故障- 实验器材故障，如离心管等实验器材故障，如离心管等- 产生气溶胶；产生气溶胶；- 操作者失误。操作者失误。:1. 所有离

14、心机应处于正常工作状态/合格机械性能，根据厂家说明书进行操作。2. 离心机位于适宜位置和高度，工作人员能看见离心桶，便于进行各项操作。3. 离心管和标本容器根据厂家要求选用，最好使用塑料制品，使用前应检查有无破损。必须在安全柜内打开盖子。4. 使用转头时应注意转头盖与转头型号是否匹配。离心桶的装载、平衡、密封和打开必须在生物安全柜内进行。空离心桶配平时应该用蒸馏水或70乙醇、异丙醇，不应使用盐水和次氯酸盐溶液。离心管内液面水平距管口应留出一定空隙，以确保离心过程中液体不会溢出，尤其是使用角转头时更要注意。（密封的离心桶/安全杯）5. 应该每天检查在特定的转速下，离心杯的内表面有无污物。离心转头

15、和离心桶应每天检查有无腐蚀点以及极细的裂缝，以确保安全。离心桶、转头和离心机腔每次用后都应该消毒。每次用后，应该把离心桶倒放，以排净离心配平的液体。:对于高致病性病原微生物，必须要高度警惕离心过程中产生的气溶胶风险。大型离心机上应加装负压罩，以及时吸出离心机排出的气体，并排至实验室的过滤通风系统，在BSL-3及以上级别实验室尤其要注意。所有的离心管必须带盖密封，其开启应在安全柜内进行。微型离心机则可放在安全柜内离心，但要注意其对安全柜气流的影响。如果不能在安全柜内离心也无负压罩，则必须将密封的转头在安全柜内打开。:表表9-3 9-3 可能产生危害的微生物操作相关仪器设备可能产生危害的微生物操作相关仪器设备和消除和消除/ /降低危险的办法降低危险的办法:影响使用。影响使用。:不要用注射器代替移液管不要重新给针头盖帽或夹针头。使用针头锁定型注射器，以防针头和注射器分离，或者使用一体的一次性注射器。运用正确的实验室技术，如： 吸液时要小心，尽量减少