实验一还原糖和总糖含量的测定

1、实验一述原糖和总糖含量的测定创作：欧阳术时间：2021.02.02（3,5 二萌基水杨酸比色法）一目的1掌握还原糖定量測定的基本原理;2. 学习比色定糖法的基本操作；3. 熟悉分光光度廿的使用方法。二. 原理在破性的条件下，还原糖与3,5-Zi基水杨酸共热,3,5-Zi 基水杨酸被述原为3 氨基5 硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖 的量与棕红色物质顾色深浅的程度成一定的比例关系，在 540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并廿 算,便可分别样品中还原糖和总糖的含量。三. 仪器.试剂和林料1仪器：（1 ） 25ml刻度试管（2 ）玻璃漏斗（3 ）三角® （ 4 ） 100m

2、l容量瓶3个（5 ）刻度吸管（lml,2ml,3ml） （ 6 ）恒温水 浴（7）沸水浴（8）电子天平（9）分光光度廿2. 试剂；（1 ） lmg/ml葡萄糖标准液（2）3,5-Zffi基水杨酸试剂（3）碘碘化即溶液（4）酚臥指示剂（5）6ml/L HCI （6）6ml/L NaOH3. 林料：食用面粉0.操作步骤1制作葡萄糖标准曲线：取7支25ml g试管，编号，按如下 操作。操作项目管号0123456葡萄糖标准液(ml)00.20.40.60.81.01.2蒸憾水(ml)21.81.61.41.210.83,5-二硝基水杨酸(ml)1.51.51.51.51.51.51.5吸光度(A54O

3、)0.0000.081 0.2170.331 0.4670.575 0.648将各管摇匀，在沸水中JJII热5min,取出后立即放人盛有冷水 的烧杯中冷却至室温，再以蒸憎水定容至25min，用试管塞塞 住试管口，顾倒混匀。在540nm波长下，用0号试管调零，分 别读取16号管的吸光度。以吸光度为纵坐标，葡萄样毫克数 为横坐标，绘制标准曲线。2.样品中还原糖和总糖含量的滇定(1 )样品中还原糖的提取：准确称取3g使用面粉，放在 100ml E角败中，先以少量蒸憎水调成糊状,然后加50ml蒸憎 水，搅匀，置于501恒温水中保温20min，使还原糖浸出。过 滤，用20ml蒸锚水定容至刻度，混匀，作为

4、还原糖待測液。(2)样品中总糖的水解和提取：准确称取lg使用面粉。® 在100ml的三角珈中,加人10ml 6mol/L HCI M 15ml蒸锚水, 置于水浴中加热水解30mino待三角以中水解液冷却后，加入1 滴sm指示剂。以6mol/LNaOH中和至傲红色,过滤，再用少 量蒸锚水冲洗三角松及滤纸，将滤圾全部收集砸100ml的容量 瓶中，用蒸锚水定容至刻度，混匀。精确吸取10ml定容过的水 解液，移人另一 100ml的容量姒中，以水稀释定容，混匀，作 为总糖待测液。（3）显色和比色，取4支25ml刻度试管，编号，按下表的 量操作。操作项目还原糖测建管号总糖测定管号©aI

5、II还原糖待测液（ml）1100总糖待测液（ml）0011蒸憾水（ml）00113,5-二硝基水杨酸（ml）1.51.51.51.5吸光度（A540）0.3030.2980.4100.414吸光度（A540）平均值0.3010.421五、注意事顶：标准曲线制作与样品含糖量測定应同时进行， 一起显色和比色。穴、结果处理（1 ）由管、吸光度平均值在葡萄糖标准曲线査岀相应的还原糖毫克数为:0.167mg由管丨、II吸光度平均值在葡萄糖标准曲线查岀相应的还原糖毫克数为：0.235mg（2）if算样品中还原糖和总糖的百分含量如下：还原糖二0.557% 总糖二0235%七、问题讨论1 面粉中主要含有何种糖?答:淀粉2.糖含量定量测定的方法还有哪些？答：高效液相色谱