安捷伦1260型高效液相色谱仪操作规程

1、一、开机1、开机前准备：流动相使用前必须过0.45um的滤膜（有机相的流动相必须为色 谱纯；水相必须用新鲜注射用水，不能使用超过 3天的注射用水，以防止长菌或 长藻类）；把流动相放入溶剂瓶中。 A 瓶：为水相 B 瓶：为有机相。2、打开电脑，选 Win 2000，进入 Win 2000 界面。3、双击 CAG Boodp server图标，放大 CAG Boodp server小图标，出现窗口，5min 内打开液相各部件电源开关，等待 1100广播信息后，表示通讯成功连接，关闭 CAG Boodp serve 窗口。4、双击 online 图标，仪器自检，进入工作站。 该页面主要由以下几部分组

2、成：最上方为命令栏，依次为 File, Run Control, Instrumen 等；命令栏下方为快捷操作图标，如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、 调用文件保存文件等；中部为工作站各部件的工作流程示意图；依次为进样器 -输液泵-柱温箱-检测 器-数据处理 -报告；中下部为动态监测信号； 右下部为色谱工作参数：进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱 温、检测波长等。4、从“View菜单中选择“ Method and contro画面；二、编辑参数及方法1、开始编辑完整方法：从“Method菜单中选择“ New method”出现DEF-LC.M，从“Method菜单中选 择“

3、Edit entire method,选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和 运行时间表等各项，单击 0K，进入下一画面。2、方法信息：在“Method Comments”加入方法的信息，如方法的用途等。单击0K，进入下 一画面。3、泵参数设定：进入 “Setup pump画面，在 “Flow”处输入流量，如 1ml/min ；在 “Solvent E处” 输入有机相的比例如 70.0，（A=100-B ），也可在Insert 一行“Timetable,”编辑 梯度；输入保留时间；在 “ Pressure Limits Max处输入柱子的最大耐高压，以保 护柱子。单击OK，进入下一画

4、面。4、DAD 检测器参数设定：进入“ DAD signals画面，输入样品波长及其带宽、参比波长及其带宽（参比波长带宽默认值为100nm）； 选择Stoptime： as Pupm在“Spectrum中输入采集光谱方式“store选All ;如只进行正常检测，则可选None； 范围Range：可选范围为190950nm； 步长Step可选2.0nm； 阀值：选择需要的灯；Peak width （Response time即响应值应尽可能接近要测的窄峰峰宽，可选“2s”或 4s；Slit-:狭窄缝，光谱分辨率高；宽时，噪音低。可选4nm单击 OK ，进入下一画面。5、进入“Signal Det

5、ails画面，单击 OK，进入下一画面。6 进入“Edit Integration Events（编辑积分结果）画面，单击 OK，进入下一画 面。7、 进入“Specify report （积分参数）画面，单击 OK，进入下一画面。8、进入“Instrument curve画面，单击 OK，进入下一画面。9、进入 “ Run Time checklist （运行时间表）画面，选择 “ Date Acquistition和 ” “Standard Date Analsis单击OK，完成参数设定，回到工作站画面。10、单击“Method菜单，选中“Save method as输入文件名，单击OK。

6、（路径： eHPCHEM1methods* ）注：如果调用一个方法，则在 “ Method菜单，选中“Load method/'选方法名， 单击 OK。11、从菜单“View中选择“Online signal,选中 Window 1，然后单击Change钮， 将所要绘图的信号移到右边的框中，点OK。（如同时检测二个信号，则重复11， 选中 Window 2 ）。三、运行样品1、单击泵（Pump）图标下面的小瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，并且 选停泵体积。单击 OK。2、手动打开Purge阀：逆时针转23圈。3、 单击泵（Pump）图标，出现参数设定菜单，单击 Setup pump

7、选项，进入泵 编辑画面。设 Flow： 5ml/min ，单击 OK。4、开泵：直接点Pump图标下面的泵开关小图标，或单击 Pump图标，出现参 数设定菜单，单击 Pump contrlo选项，选中On，单击OK。5、系统开始排液（Purge），直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，切换通道继续排液，直到所有通道无气泡为止。（每个管线内液体约20ml，在5ml/min 的流速下，均需 45min 才能排完）6单击泵（Pump）图标，出现参数设定菜单，单击 Setup pump选项，进入泵编辑画面。把Flow改为0.51.0ml/min，单击OK。7、等待流速降下来后，关闭排液阀。8、 待

8、压力稳定后，从 “Instrumen菜单中选择“System on或单击GUI图标的On 图标启动系统。开始走基线，并可选择观察信号。注：仪器运行过程， 画面颜色由灰色转变成黄色或绿色， 当各部件都达到所设参 数时，画面均变为绿色，左上角红色的“not ready变为绿色“ready,”表明可以进行分析。（此时如果要终止仪器的运行，可单击流程图右下角的“ off，再单击“ Yes， 关闭输液泵和检测器氘灯）。9、单击最大化按钮，将online Plot窗口放大。待基线平稳后，点信号窗口的“ Banlance '调至零点。10、等仪器 Ready，从 “ Run co ntro 菜单中选

9、择 F5 或 “ Run method”11 、编辑样品信息：从“Run contro菜单中选择“Sample intc选项，选择“Sample Info,.即打开了 样品信息页面，输入操作者（Operator Name）、数据存贮通道（Subdirectory） 样品名(Sample Name、进样瓶号(Vial)、浓缩因子(Multipli ne )、稀释因 子(Dilution )、，“Data file中选择 “Prefix,在Prefix框中输入批号或日期等， 在Counter框中输入计算器的起始位，仪器会自动命名。(样品量(Sample Amount)、 内标量(ISID Amou

10、nt)可不选，Location只对自动进样器有用，不填则走空白， 检查干扰峰的来源。)单击 OK。12、进样分析：进样阀扳到Load位置，插入注射器，注样品，进样后扳动阀至Inject位置。13、进样分析结束，点Close键退出样品分析。(注意：检测完尽量要关 DAD 的灯，以保持灯的寿命。单击 DAD 图标，出现 参数设定菜单，单击 control ，选择关灯。) 四、数据分析方法编辑(可在 offline 下操作)1、从“View”菜单中选“ Date analysi进入数据分析画面。该页面最上方为命令 栏，依次为File ，Graphics， Integration 等。命令栏下为快捷操

11、作图标，如 积分、校正、色谱图、单一色谱图调用、多色谱图调用、调用方法、保存等。2、 从“File菜单中选“Load signal,或单击快捷操作的单一色谱图调用”图标， 选择色谱图文件名，单击 &K”，画面中即出现所调用的色谱图。3、 做图谱优化，从“Graphic菜'单中选择“Signal option选项”从Ranges中选 择Auao scale及合适的显示时间，单击 0K，或选择“Use Range调整。反复进 行，直到图的比例合适为止。4、积分(1) 先调用所要分析的色谱图，从“Integration中选择“Auto integrate,从“Integration中

12、选择“Integration Results此时仪器将内置的积分参数给出积分结 果。如积分结果不理想，再从“ In tegration菜单中选择“ In tegration Eve nts选项；或单击快捷操作的“编辑/设定积分表”图标，此时，在屏幕下方左侧出现积分参 数表，右侧为积分结果，在积分参数表中按实际的要求输入修改的参数， 如斜率(Slope sen sitivity)、峰宽(Peak width)、最小峰面积(Area reject)、最低峰 高(Height reject) 等。(2) 从“Integration中选择“Integrate选项或单击快捷操作的 对现有色谱图积分” 图

13、标，仪器即按照新设定的积分参数重新积分。(3) 若积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。(4) 完成后，单击左边的“图标，将积分参数存入方法。5、打印报告：(1) 从“Report?”单中选择“Specify report选项，或单击最右侧快捷操作的定 义报告及打印格式”(右下角带叉的报告画面)图标，进入打印画面。(2) 根据实际要求选择报告的格式和输出形式等。可在“ Calculate右W的黑三 角中选“Percenf面积百分比)，其它项不变。(如“Destination项下选择“Scree；'“Based Oi选 “Area； “Sorted By选” “Signal

14、; ” “Repirt Style选 “'Short；选择 “Add chromatogram Output打印色谱图)”；选择 “With Calibrated Peaks选择” “Portrait; 可根据需要选择“ Size)”。(3) 单击 OK。(4) 选择快捷操作的 报告预览”图标，可预览报告的全貌。从 “Report菜单中， 选择“ Print Report,则报告打印到屏幕上，如想输出到打字机上，贝U单击“ Print,” 即可进行报告的打印。最后，单击 “ close退出此操作页面。6、定量分析如果需要进行标准曲线制备，可按此项进行操作。( 1)一级校正表的建立：在“

15、Data Analysis界面下，调用最低浓度的色谱图，在 栏“Calibration下：选择N ew Calibration Table，选择 “Automatic Setup Leve，并设校正级数为 “ 1,单击Qk”在画下方左侧出现校正表，右侧为校正图。在画面左下侧的校正表中选 择所要的色谱峰，输入校正级数、化学物名称及浓度，如果采用内标法，需对内 标峰进行标记。单击OK，工作站提示是否删除 0浓度行，单击Yes。( 2)二级校正表的建立：调用第二个色谱图，在命令栏 “Calibration下，选择“Add Level,”设为“2，单击“Qk ”，在画面左下侧的校正表中输入校正级数、化学物名称及样品浓度。 (如 需对校正表中的某些数据进行重新修正， 可调用新的图谱， 在命令栏 “Calibration 下，选择“Recalibration,并在校正表中输入校正级数，样品浓度。)此时，校 正表右侧自动绘制各组分的标准曲线， 并进行线性回归。 单击校正表中的 “Print， 可进行打印。五、关机1、关机前，用过缓冲盐溶液必须先用 100%的水冲洗系统(打开排液阀，调流 速为5m