牛肉膏蛋白胨培养基配方资料_第1页
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文档简介

1、精品文档牛肉膏蛋白胨培养基配方:牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养 基。它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCI。其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源,磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源,而NaCI提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下 96 C时溶化,一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化, 以免琼脂烧焦。琼脂在 40 C时凝固,通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量 根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。由于这种培养基多用于 培养细菌(荤食),因此,要用稀酸或稀碱将其 pH调至中性或微 碱性,以利于细菌的生长繁殖。

2、牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下:牛肉膏 3g、蛋白胨 10g、NaCI 5g、琼脂 15 20g、水 1000ml、pH 7. 4 7. 6 (7.0 8.0)三、器材牛肉膏,蛋白胨,NaCI,琼脂;1mol/L NaOH , 1mol/L HCI ;试管,三角烧瓶,烧杯,量筒,玻棒,培养基分装器,扭力天平,牛角匙,高压蒸汽灭菌锅,pH试纸(pH 5 . 59 . 0),棉花,牛皮纸,记号笔,麻绳,纱布等。四、操作步骤1 .称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCI放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取,放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上,称量后直接 放入水

3、中,这时如稍微加热,牛肉膏便会与称量纸分离,然后立即取出纸片。蛋白胨很易吸潮,在称取时动作要迅速。另外,称药品时严防药品混杂,一把牛角匙用于一种药品,或称 取一种药品后,洗净、擦干,再称取另一药品,瓶盖也不要盖错。2 .溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量,用玻棒搅匀,然后,在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后,补充水分到所需的总体积。 如果配制固体培养基, 将称好的琼脂放入已 溶化的药品中,再加热溶化,在琼脂溶化的过程中, 需不断搅拌,以防琼脂糊底使烧杯破裂。 最后补足所失的水分。3 .调 pH在未调pH前,先用精密pH试纸测量培养基的原始 pH值,如果pH偏酸,用滴管向培养 基中逐

4、滴加入1moI/L NaOH ,边加边搅拌,并随时用pH试纸测其pH值,直至pH达7 . 6。 反之,则用1moI/L HCI进行调节。注意 pH值不要调过头,以避免回调,否则,将会影响 培养基内各离子的浓度。对于有些要求pH值较精确的微生物,其 pH的调节可用酸度计进行(使用方法,可参考有 关说明书)。4 .过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤,以利结果的观察。 一般无特殊要求的情况下,这一步可以省去(本实验无需过滤)。5 .分装按实验要求,可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装装置见图V-1。分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。(1) 液体分装分装高度以试管

5、高度的1/4左右为宜。精品文档(2)固体分装分装试管,其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面,如图V -2。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。(3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。6 .加塞培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染,并保证有良好的通气性能(棉塞制作方法附本实验后面)。7 .包扎加塞后,将全部试管用麻绳捆扎好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶加塞后,夕卜包牛皮纸,用麻绳以活结形式扎好, 使用时容易解开,同样

6、用记号笔注明培养基名称、组别、日期。&灭菌将上述培养基以1 . 05kg/cm2 (15磅/英寸2), 121 . 3 C, 20分钟高压蒸汽灭菌。如因 特殊情况不能及时灭菌,则应放入冰箱内暂存。9 搁置斜面将灭菌的试管培养基冷至 50 C左右,将试管棉塞端搁在玻棒上,搁置的斜面长度以不超过 试管总长的一半为宜。10 .无菌检查将灭菌的培养基放入 37 C的温室中培养24 48小时,以检查灭菌是否彻底。PDA培养基配方:特点及用途PDA培养基是人们对马铃署葡萄糖琼脂培养基的简称,即Potato Dextrose Agar|(Medium),依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。一种常用的培养基,

7、宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌(素食)。酵母菌PH( 3.86.0 ),霉菌(4.05.8 )等。按物理性状划分:固体培养基,按培养基成分划分:半合成培养基配方马铃薯200克葡萄糖20克琼脂1520克自来水1000毫升自然PH配制步骤其做法是称取 200g马铃薯,洗净去皮切成小块,加水煮烂(煮沸2030分钟,能被玻璃棒戳破即可),用四层纱布过滤,再据实际实验需要加葡萄糖和琼脂,继续加热搅拌混匀,稍冷却后再补足水分至1000毫升,分装试管,加塞、包扎,(121 C )灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用。精品文档其他事项1. 培养基经火菌后,必须放在37C温箱培养24h,无菌生长者方

8、可使用。2. PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节 pH的培养基,一般用pH试纸测定其 pH。如果培养基偏酸或偏碱时,可用Imol / LNaOH或Imol / LHCL溶液进行调节。调节时应逐滴加入 NaOH或HCI溶液,防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。3. 培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基,用于菌类的震荡培养。4. 培养基也可以加入氯霉素或土霉素,加入量为O.1g/L培养基,主要是为了抑制细菌 的生长,减少干扰性高氏1号培养及配方:培养放线菌用,改良的高氏可溶性淀粉 2g , KNO30.1g , K2HPO4 0.05g, MgSO4? 7H2O 0.05g , NaCl 0.05g,FeSO4? 7H2O 0.001g (母液),琼脂 2g ,自来水 100mL, pH 7.2 7.4 ,灭菌1.05kg/cm2 , 20min配制时,先用少量冷水,将淀粉调成糊状,倒入少于所需水量的沸水中,在火上加热,边搅拌边依次逐一溶化其他成分,溶化后,补足水分到 100ml,调pH, 121C灭菌 20min。高温灭菌后,倒平皿前加入10%酚2滴至100ml培养基中混匀,将培养基倒入平皿内约15ml/皿。高氏1号:可溶性淀粉 (20g ) , KNO( 1g) , K2HPO4(0.5g ) ,

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