啤酒厂化验室设计

1、广西工业职业技术学院设计说明书课题名称：啤酒厂微生物实验室设计姓名：廖国旭专业：食品药品监督管理班级：药监1031班起止日期：指导教师：韦丽、，、.刖百设计化验室目的在于对啤酒原辅料及成品进行检验，确保啤酒的质量与安全，全面控制和管理生产，保证和监督啤酒质量和卫生指标，提高质量安全和达到食品可接受水平，保证饮品质量，维护消费者权利，为企业提供有力销售保障，使企业强有力的立足于世界市场。化验室基本任务是对啤酒原辅料、半成品及成品进行检验，确保啤酒的质量与安全，全面控制和管理生产，保证和监督啤酒质量和卫生指标，提高质量安全和达到食品可接受水平，保证饮品质量。化验室功能是为啤酒的质量提供有效的保障，

2、让啤酒达到消费者可接受水平，保证啤酒质量，通过工作人员运用精密的检测仪器设备对啤酒进行检验与验证，以合格的身份进入销售市场，让消费者买的放心喝得开心。化验室主要由理化实验室、微生物室、值班室、办公室、仪器室、天平室、更衣室、洗涮室、缓冲间、无菌室、准备室。摘要对于啤酒生产来说，质量检验的重要性是不言而寓的。化验室应该摆脱仅仅进行化验的狭隘定义，而要为啤酒生产的各个工序提供指导，对啤酒质量进行有效的控制。为保证分析结果的准确性，就要从多个方面对化验室进行建造，建立合理完善的管理制度。本分析化验室主要担任本厂所有原料、半成品及成品的检测，起到控制和管理生产，保证和监督本厂生产的味精的质量和卫生指标

3、的作用，也为开发新产品、制定合理的工艺参数提供数据依据.本分析化验室主要包括：办公室、仪器室、试剂室、理化实验室、准备室、微生物检验室.啤酒厂分析化验室的主要任务是对原材料分析、半成品化验分析、成品化验分析起到控制和管理生产，保证和监督食品质量和卫生指标作用。在成品成厂时，必须对出厂的各规格啤酒，经过检验，各理化指标、技术质量均要符合卫生标准，以保证人民健康和商品信誉。本分析化验室的整体目标是完成对原料、辅料、半成品及成品的检测和质量控制，保证产品的质量。并对新产品、新工艺的开发目录1 .啤酒原料、半成品及成品的检测项目及标准41.2 原料的检测项目及标准41.3 半成品检测项目及标准41.4

4、 成品检测项目及标准52 .啤酒原料、半成品及成品的检测方法62.2 啤酒原料的检测方法62.3 啤酒半成品的检测方法72.4 啤酒成品的检测方法7-233 .试剂和仪器清单243.2 试剂清单253.3 玻璃仪器清单263.4 设备清单273.5 化验室的月试剂消耗量274 .化验室的平面布置图及设计说明284.2 化验室设置294.3 化验室的平面布置图304.4 设计说明（包括水、电、平面布置说1明）315 .化验室人员配制和组织管理326 .化验室的岗位责任制347 .参考文献368 .谢辞361 .啤酒原料、半成品及成品的检测项目及标准1.1 啤酒半成品检测项目及标准在舁厅P微生物检

5、验检测标准1致杭瑞、厌氧菌不得检出2乳酸困数>1X106cfu/mL1.2啤酒成品检测项目及标准在舁厅P微生物检测项目检测标准1菌落总数<502大肠菌群<33致病菌不得检出2 .啤酒半成品及成品的检测方法2.1 半成品2.1.1 酵母死活细胞（死亡率）的测定活的菌体，由于新陈代谢不停的进行着，细胞内氧化还原值（rH）较小，而还原力强。这时如有像美蓝那样的无毒染料进入活的细胞内，即被还原脱色：而死的细胞代谢停止，无还原力，即被染成蓝色。美蓝无毒，且能为活细胞还原成无色故多用于区别细胞的死活。但美蓝浓度、作用时间等都用影响，因此以制片后五分钟内计算的死细胞数为据。检查方法：取0.

6、1%美蓝一滴，置载玻片中央，然后去洒母液少许和入美蓝液中，搅拌均匀，加盖玻片，在显微镜下检查数已变蓝的细胞及未变蓝的细胞（可数56个视野的细胞数），计算死细胞占总细胞数的百分率。死亡率的计算：酵母死亡率一般用百分数表示，即死亡细胞占总细胞数的百分数，在显微镜下数一定的细胞数，并记录死活细胞数，按下式计算死亡率死亡率=b/a%2.2 成品2.2.1 志贺氏菌检验2.2.1.1 范围本标准规定了食品中志贺氏菌（Shigella）的检验方法。本标准适用于食品中志贺氏菌的检验。2.2.1.2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a恒温培养箱：36c±1C；b冰箱

7、：2C5C；c股过滤系统；d厌氧培养装置：41.51C；e电子天平：感量0.1g;f显微镜：10X100X;g均质器；h振荡器；i无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头；j无菌均质杯或无菌均质袋：容量500mL;k无菌培养皿：直径90mvmlpH计或pH比色管或精密pH试纸；m全自动微生物生化鉴定系统2.2.1.3 培养基和试剂a志贺氏菌增菌肉汤-新生霉素。b麦康凯（MAC琼脂。c木糖赖氨酸脱氧胆酸盐（XLD琼脂。d志贺氏菌显色培养基。e三糖铁（TSI）琼脂。f营养琼脂斜面。g半固体琼脂。h葡萄糖钱培养基。i尿素琼脂。jB-半乳糖甘酶培养基。k氨

8、基酸脱竣酶试验培养基。l糖发酵管。m西蒙氏柠檬酸盐培养基。n粘液酸盐培养基。o蛋白陈水、靛基质试剂。p志贺氏菌属诊断血清。q生化鉴定试剂盒。2.2.1.4 操作步骤2.2.1.5 增菌以无菌操作取检样25g（ml）,加入装有灭菌225mL志贺氏菌增菌肉汤的均质杯，用旋转刀片式均质器以8000r/min10000r/min均质；或加入装有225mL志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中，用拍击式均质器连续均质1min2min,液体样品振荡混匀即可。于41.5C±1C,厌氧培养16h20h02.2.1.6分离取增菌后的志贺氏增菌液分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC®脂平板或志贺氏菌显色培

9、养基平板上，于36'C1C培养20h24h,观察各个平板上生长的菌落形态。宋内氏志贺氏菌的单个菌落直径大于其他志贺氏菌。若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至48h再进行观察。志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征见表1。表1志贺氏菌在不同选择性琼脂平板上的菌落特征选择性琼脂平板志贽氏菌的菌落特征MAC®脂无色至浅粉红色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐XLD琼脂粉红色至无色，半透明、光滑、湿润、圆形、边缘整齐或不齐志贺氏菌显色培养基按照显色培养基的说明进行判定2.2.1.7 初步生化试验2.2.1.8 自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，

10、分别接种TSI、半固体和营养琼脂斜面各一管，置36,C1C培养20h24h,分别观察结果。2.2.1.9凡是三糖铁琼脂中斜面产碱、底层产酸（发酵葡萄糖，不发酵乳糖，蔗糖）、不产气（福氏志贺氏菌6型可产生少量气体）、不产硫化氢、半固体管中无动力的菌株，挑取其2.2.1.6中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验和血清学分型。2.2.1.10 生化试验及附加生化试验2.2.1.11 生化试验用2.2.1.8中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验，即B-半乳糖甘酶、尿素、赖氨酸脱竣酶、鸟氨酸脱竣酶以及水杨甘和七叶甘的分解试验。除宋内氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌13型的鸟氨酸阳性；宋内氏

11、菌和痢疾志贺氏菌1型，鲍氏志贺氏菌13型的B-半乳糖甘酶为阳性以外，其余生化试验志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。另外由于福氏志贺氏菌6型的生化特性和痢疾志贺氏菌或鲍氏志贺氏菌相似，必要时还需加做靛基质、甘露醇、棉子糖、甘油试验，也可做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属。志贺氏菌属生化特性见表2。表2志贺氏菌属四个群的生化特征生化反应A群：痢疾B群：福氏C群：鲍氏D群：宋内志贽氏菌志贽氏菌志贽氏菌氏志贽氏菌?-半乳糖甘酶a-a+尿素一一一一赖氨酸脱竣酶一一一一鸟氨酸脱竣酶一一一b+水杨甘一

12、一一一七叶甘一一一一靛基质/+（十）/+一甘露醇一+c十+棉子糖一十一十甘油（十）一（十）d注：+表示阳性；-表示阴性；-/+表示多数阴性；+/-表示多数阳性；（十）表示迟缓阳性；d表示有不同生化型。a痢疾志贺1型和鲍氏13型为阳性。b鲍氏13型为鸟氨酸阳性。c福氏4型和6型常见甘露醇阴性变种。2.2.1.12 附加生化实验由于某些不活泼的大肠埃希氏菌（anaerogenicE.coli）、A-D（Alkalescens-Disparbiotypes碱性-异型）菌的部分生化特征与志贺氏菌相似，并能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集；因此前面生化实验符合志贺氏菌属生化特性的培养物还需另加葡萄糖胺、西

13、蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐试验（36C培养24h48h）。志贺氏菌属和不活泼大肠埃希氏菌、A-D菌的生化特性区别见表3。表3志贺氏菌属和不活泼大肠埃希氏菌、A-D菌的生化特性区别生化反A群：痢B群：福C群:鲍D群：宋大肠埃A-D菌应疾志贺氏志贽氏志贽内氏志希氏菌氏菌氏菌氏菌贺氏菌葡稳糖俊一一一一十十四蒙氏柠檬酸盐一一一一dd粘液酸盐一一一d十d注1:+表示阳性；-表示阴性；d表示有不同生化型。注2:在葡萄糖俊、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐试验三项反应中志贺氏菌一般为阴性，而不活泼的大肠埃希氏菌、A-D（碱性-异型）菌至少有一项反应为阳性。2.2.1.13 如选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统

14、，可根据表3的初步判断结果，用4.3.1中已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。2.2.1.14 结果报告综合以上生化试验的结果，报告25g（mD样品中检出或未检出志贺氏菌。2.2.3沙门氏菌检验2.2.3.1范围本标准规定了食品中沙门氏菌（Salmonella）的检验方法。本标准适用于食品中沙门氏菌的检验。2.2.3.2设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：1）冰箱：2C5o2）恒温培养箱：36c±1C,42C±1C。3）均质器。4）振荡器。5）电子天平：感量0.1g。6）无菌锥形瓶：容量500

15、mL,250mL。7）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。8）无菌培养皿：直径90mm。9）无菌试管：3mnK50mm、10mnK75mm10）无菌毛细管。11）pH计或pH比色管或精密pH试纸。12）全自动微生物生化鉴定系统。2.2.3.3培养基和试剂1）缓冲蛋白陈水（BPW。2）四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液。3）亚硒酸盐胱氨酸（SQ增菌液。4）亚硫酸钿（BS）琼脂。5）HE琼脂。6）木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD琼脂。7）沙门氏菌属显色培养基。8）三糖铁（TSI）琼脂。9）蛋白陈水、靛基质试剂。10）尿素琼脂（pH7.2）。11）氟化钾（K

16、CN培养基。12）赖氨酸脱竣酶试验培养基。13）糖发酵管。14）邻硝基酚B-D半乳糖甘（ON10培养基。15）半固体琼脂。16）丙二酸钠培养基。17）沙门氏菌O和H诊断血清。18）生化鉴定试剂盒。2.3.3.4操作步骤2.3.3.4.1 前增菌称取25g（mD样品放入盛有225mLBPW的无菌均质杯中，以8000r/min10000r/min均质1min2min,或置于盛有225mLBPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min2min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需测定pH值，用1mol/mL无菌NaOH或HCl调pH至6.8±0.2。无菌操作将样品转至500mL锥形瓶

17、中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36C士1C培养8h18h。如为冷冻产品，应在45C以下不超过15min,或2C5C不超过18h解冻。2.3.3.4.2 增菌轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL转种于10mLTTB内，于42C±1C培养18h24h。同时，另取1mL,转种于10mLSC内，于36C±1C培养18h24h。2.3.3.4.3 分离分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。于36C±1C分别培养18h24h（XLD®脂平板、HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板

18、）或40h48h（BS琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落，各个平板上的菌落特征见表1。表1沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征选择性琼脂平板沙门氏菌BS琼脂菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变。HE琼脂蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色。XLD琼脂菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心。沙门氏菌属显色A口加工按照显色培养基的说明进行判定。2.3.3.4.4 生化试验自选择性琼脂平板上分

19、别挑取2个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌，直接接种赖氨酸脱竣酶试验培养基和营养琼脂平板，于36c±1C培养18h24h,必要时可延长至48h。在三糖铁琼脂和赖氨酸脱竣酶试验培养基内，沙门氏菌属的反应结果见表2.3.3.4.5 0表2沙门氏菌属在三糖铁琼脂和赖氨酸脱竣酶试验培养基内的反应结果三糖铁琼脂赖氨酸脱竣酶试验培养基初步判断斜面底层产气硫化氢KA十（一）十（一）十可疑沙门氏菌属KA十（一）十（一）一可疑沙门氏菌属AA十（一）十（一）十可疑沙门氏菌属AA+/一+/一一非沙门氏菌KK+/一+/一+/一非沙门氏菌注：K:产碱，A:产酸；+

20、:阳性，一：阴性；+（-）:多数阳性，少数阴性;+/-:阳性或阴性。接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱竣酶试验培养基的同时，可直接接种蛋白陈水（供做靛基质试验）、尿素琼脂（pH7.2）、氟化钾（KCN培养基，也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于36c±1C培养18h24h,必要时可延长至48h，按表3判定结果。将已挑菌落的平板储存于2C5C或室温至少保留24h,以备必要时复查。表3沙门氏菌属生化反应初步鉴别表反应序号硫化氢（H2S靛基质pH7.2尿素氟化钾（KCN赖氨酸脱竣酶A1十一一一十A2十十一一十A3一一一一+/一注：+阳性；一阴性；+/阳性或阴性。反应序号A1:典型

21、反应判定为沙门氏菌属。如尿素、KCNffi赖氨酸脱竣酶3项中有1项异常，按表4可判定为沙门氏菌。如有2项异常为非沙门氏菌。表4沙门氏菌属生化反应初步鉴别表pH7.2尿素氟化钾（KCN赖氨酸脱陵酶判定结果一一一甲型副伤寒沙门氏菌（要求血清学鉴定结果）一十十沙门氏菌IV或V（要求符合本群生化特性）十一十沙门氏菌个别变体（要求血清学鉴定结果）注：+表示阳性；+表示阴性。反应序号A2:补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进行判定。反应序号A3:补做ONIG。ONIG阴性为沙门氏菌，同时赖氨酸脱竣酶阳性，甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱竣酶阴性。必要时

22、按表5进行沙门氏菌生化群的鉴别表5沙门氏菌属各生化群的鉴别项目IRmIVVVI卫矛醇十十一一十一山梨醇十十十十十一水杨甘一一一十一一ONIG一一十一十一丙二酸盐一十十一一一KCN一一一十十一注：+表示阳性；一表示阴性。如选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统,可根据5.4.1的初步判断结果，从营养琼脂平板上挑取可疑菌落，用生理盐水制备成浊度适当的菌悬液，使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进行鉴定。2.3.3.5结果与报告综合以上生化试验的结果，报告25g（mD样品中检出或未检出沙门氏菌。2.2.4金黄色葡萄球菌检验2.2.4.1 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其

23、他设备和材料如下：恒温培养箱：36C±1C。、冰箱：2C5C、恒温水浴箱：37C65C、天平：感量0.1g、均质器、振荡器。无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。无菌锥形瓶：容量100mL、500mL。无菌培养皿：直径90mmo注射器：0.5mLopH计或pH比色管或精密pH试纸。2.2.4.2 培养基和试剂10%氯化钠胰酪陈大豆肉汤。7.5%氯化钠肉汤。血琼脂平板。Baird-Parker琼脂平板脑心浸出液肉汤（BHI）。兔血浆。稀释液：磷酸盐缓冲液。营养琼脂小斜面。革兰氏染色液。无菌生理盐水2.2.4.3操作步骤2.2.4.3.1

24、 样品的处理称取25g样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪陈大豆肉汤的无菌均质杯内，8000r/min10000r/min均质1min2min,或放入盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪陈大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min2min。若样品为液态，吸取25mL样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪陈大豆肉汤的无菌锥形瓶（瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠）中，振荡混匀。224.3.2增菌和分离培养将上述样品匀液于36C±1C培养18h24h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%氯化钠胰酪陈大豆

25、肉汤内呈混浊生长。将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板，血平板36C±1C培养18h24h。Baird-Parker平板36C±1C培养18h24h或45h48h。金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上，菌落直径为2mm3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），

26、菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。2.2.4.3.3鉴定染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5m-1m。血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker平板或血平板上可疑菌落1个或以上，分别接种到5mLBHI和营养琼脂小斜面，36c±1C培养18h24h。取新鲜配置兔血浆0.5mL,放入小试管中，再加入BHI培养物0.2mL0.3mL振荡摇匀，置36C±1C温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察6h,如呈现凝固(即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块)或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结

27、果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5mLBHI,36c±1C培养18h48h,重复试验。葡萄球菌肠毒素的检验：未检出金黄色可疑食物中毒样品或产生葡萄球菌肠毒素的金黄色葡萄球菌菌株的鉴定，应按附录B检测葡萄球菌肠毒素。224.3.4 结果与报告结果判定：符合5.2.3、5.3,可判定为金黄色葡萄球菌。结果报告：在25g(mL)样品中检出或葡萄球菌。224.3.5 总数224.3.5.1 的稀释固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水

28、的无菌均质杯内，8000r/min10000r/min均质1min2min,或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min2min,制成1:10的样品匀液。液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。224.3.5.2 检样25g(mL)样品+225mL稀释液，均质10倍系列稀释选才?2个3个适宜稀释度的样品匀液，各取1mL分别加入无菌培养皿内培养计数各平板菌落数计算菌落总数每皿中加入15mL20mL平板计数琼脂培养基，混匀报告用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1

29、:10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。按上述操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。根据对样品污染状况的估计，选择2个3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。224.3.5.3 培养琼脂凝固后，将平板翻转，36±1CC培养48h±2h。水产品30&#

30、177;1C培养72h±3h。如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mD,凝固后翻转平板，按6.2.1条件进行培养。224.3.5.4 计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits,CFU）表示。选取菌落数在30CFU-300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应

31、以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。224.3.5.5 与报告若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mD样品中菌落总数结果。计算：/（%+口2儿（1）式中：N样品中菌落数；EC平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1 第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2 第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；d稀释因子（第一稀释度）。若所有稀释度的平板

32、上菌落数均大于300CFU则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU300CFU之间，其中一部分小于30CFU或大于300CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。224.3.5.6 总数的报告菌落数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。7.2.2菌落数大于或等于100CFU时，第3位数

33、字采用“四舍五入”原则修约后,取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。224.3.6 菌群测定224.3.6.1 范围木标准规定了食品中大肠菌群的测定方法。本标准适用于各类食品中大肠菌群的测定。224.3.6.2 和试剂冰箱:0C-4C0恒温培养箱：36C±10恒温水浴锅:46C±1c.显微镜：10X100X。均质器或灭菌乳钵。架盘药物天平:0g-500

34、g,精确至0.5g.灭菌吸管1mL（具0.01mL刻度）,10mL（具0.1mL刻度）。灭菌锥形瓶：500mL.灭苗玻璃珠：直径约5mm.灭菌培养皿：直径90mm.灭苗试管:16mmx160mm.灭菌刀.剪子、摄子等。224.3.6.3 基和试剂乳糖胆盐发酵管。伊红美蓝琼脂平板。乳糖发酵管。EC肉汤。磷酸盐缓冲液.0.85%灭菌生理盐水.革兰氏染色液。224.3.6.4 步骤224.3.6.4.1 检样稀释以无菌操作将检样25g(mL)放于含有225ml,灭菌生理盐水或其他稀释液的灭茵玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体检样最好用均质

35、器，以8000r/min10000r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注人含有9ML灭菌内，振摇试管混匀，做成1:100的稀释液。另取1mL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递一次，换用1支1ml灭菌吸管。根据食品卫生标准要求或对检样污染情汉的估计，选择三个稀释度，每个稀释度，接种三管。225.4.2 乳糖发酵试验将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1mL以及1mL以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种三管，置36c士1C温箱内，培养24h士2h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产

36、气，则可报告为人肠菌群阴性，如有产气省，则按下列程序进行。225.4.3 分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36c士1C温箱内，培养18h-24h,然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。225.4.4 证实试验在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1个2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36c士1C培养箱内培养24h士2h,观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。225.4.5 .5报告根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN佥索表，报告每100mL（g）大肠菌群的MPNS.225.4.6粪大肠菌群（Faecalcoli

37、form）用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物（见4.2）转种于EC肉汤管内，置44.5C士0.2C水浴箱内（水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面），培养24h士2h,经培养后，如所有EC肉汤管均不产气，则可报告为阴性；如有产气者，则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上，置培养18h-24h,凡平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌群阳性。2.2.5.5结果报告根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查MPN佥索表，报告每100ml-（g）粪大肠菌群的MPNfi（见表1）。表1大肠菌群最可能数（MPN检索表阳性管数MPN10095函信限1mL(g)x30.1mL(g)x30.01mL(g)

38、x3mL(g)下限上限000<30<59000130002600039001030<5130011600129001312002060021900221200231600309003113003216003319010040<5200101701021010211010315011070102301111103036011215011319012011030360121150122200123240130160131200132240133190200901036020114030370202200203260220210404702212801001500222350

39、2234202302902313602324402335303002304012003013907013003026401503800303950320430702100321750140230032212003003800323160032093015038003211500300440032221003504700323290033024003601300033146007102400033211000150048000333>24000注1：本表采用3个稀释度1mL(g)、0.1mL(g)和0.01mL(g),每稀释度三管。注2:表内所列检样量如改用10mL(g)、1mL(g)和0

40、.1mL(g)时，表内数字应相应降低10倍;如改用0.1mL0.01mL(g)和0.001mL(g)时,其余可类推。3.试剂和仪器清单3.1 试剂清单试剂名称规格数量500g2葡稳糖500g2果糖25g2乳糖500g2淀粉酶250g2胰蛋白酶250g2琼脂粉100g2牛肉膏500ml2500ml2大豆蛋白陈500ml2蛋白陈500ml2胰蛋白陈500ml2胰酪陈500g2植物蛋白陈500g2多陈500g2氢氧化钠500g2品红25g4异戊醇500ml2乙醇500ml2/-tN、d心力25g3乙醴500ml2浓硫酸500ml2甲基红25g4硫酸铜、500g4硫酸钾500g4硼酸250ml4澳甲酚

41、绿25ml2酚吹25ml3盐酸500ml3磷酸500ml23.2玻璃仪器清单仪器名称规格（ml）需要量（个）烧杯100104004锥形瓶250105005漏斗2分液漏斗2银子4吸管110210510105205255玻璃棒5火菌刀或剪子5橡胶管5试管18*18010烧瓶5003酸、碱式滴定管50各3量筒102502100525055002温度计100c5酒精灯5表面皿中号5平皿90cm100容量瓶10450510010250550023.3 设备清单仪器名称型号数量双数显振荡培养箱BS-1E型3烘箱SX2-2.5-10型5局压蒸汽灭菌锅MLS-3750型3干热火菌器MOV-112S90L/AT

42、型5自动菌落计数仪迅数AS1型5微生物米样器JWL-I型5卧式超低温保存箱MDF-293®5冰箱西门子KG23E6710°C-40C生化培养箱SPX-250B型205L4014±1°C,25C60°C生物显微镜XS2-3G401600X2004140143干燥消毒箱GRX202PH计33.4 化验室的月试剂消耗量例：以金黄色葡萄球菌检验中的10%氯化钠胰酪豚大豆肉汤使用量计算，每次实验所消耗的10%化钠胰酪豚大豆肉汤使用量为225ml,每周做一次检测项目的10%氯化钠胰酪豚大豆肉汤使用量为225ml,则每月使用的10%氯化钠胰酪陈大豆肉汤使用量

43、为量为900ml,规格为1000ml瓶，折合得使用10%氯化钠胰酪豚大豆肉汤为0.9瓶.4.化验室的平面布置图及设计说明4.1 化验室设置设计的化验室包括：微生物化验室、办公室、缓冲间、无菌室、天平室、设备室、更衣室。4.2 化验室平面图27£水槽0 0微生物化验室IM室F3346：o o一 "R操作台225:54,9?一r1一一4.3 设计说明4.3.1 微生物化验室布局微生物化当室是按2:1的比例尺来进行设计的。整个微生物化验室总面积为（长3000cmK宽2000cm）,化验室操作台坐落在微生物化验室的西南角，操作台（长1234crnK宽276cm）,操作台两边各设2个

44、水槽，操作台上配有均质器、水浴锅、通风橱（长334cmK宽276cmj）,有毒或刺激性药物的取用在通风橱内操作，操作台旁电源开关一组，电插座2个。整个化验室的所有门都是防火防腐蚀的，门统一规格为141cm,向内推开式，化验室内各功能室采用隔板做墙隔开，以减小占地面积，隔板也为防火防腐蚀的，采用耐火或不易燃材料建筑；电路电线埋入墙体内，以免遭氧化及腐蚀。4.3.1.1 操作区4.3.1.1.1 整洁：微生物操作区是各种病原菌相对集中的地方，为了减少粉尘流动，防止交叉污染，操作区应与外界分开。操作区地面用专用拖把每天拖1次，每周用消毒剂擦洗一次。每天早上工作前，用紫外线照射30min,或每天工作后

45、，用紫外线照射60min,对整个操作区进行消毒，下午工作结束后用消毒液消毒工作台面，以保证工作环境的安全清洁。4.3.1.1.2 光线：细菌培养的细小菌落及血清试验凝聚颗粒的观察，都需要有充足的光线。操作区除设置常规照明灯外，还必须安装操作台灯，以保证试验结果的正确判断。4.3.1.1.3 温度和湿度：由于无菌操作的要求，实验过程中经常使用酒精灯，因此，微生物学实验室不能安装吊扇。为了达到实验所需的适宜温度，尤其是满足某些仪器对温度湿度的要求，实验室应安装空调。4.3.1.1.4 污染物处理：操作区备有消毒缸，用于处理沾有活菌的玻片等污染物品。检验剩余的标本及使用过的带菌平板、试管均须集中地点

46、安全防止，经消毒灭菌处理后再洗涤或丢弃。4.3.1.2 无菌室布局无菌室面积为（长782cmx宽925cn）,无菌室温度控制在17c25C；温度波动小于0.5C/h；湿度5075%,无菌室完全封闭，进出无菌室至少要经两道门，中间隔有缓冲间，无菌室与外间设置一个可开的窗口，用于传递器具。第一缓冲间面积为（长782cmx宽545cm）,第二缓冲间面积为（长782cmx宽230cn）,最后才进到无菌操作室，无菌操作室内还设有无菌操作台（长782cmx宽275cmi,位于室中间，台面材料为具有耐酸，耐碱以及刚度好的塑料材料，地板为防滑地被砖、洁净、干燥，室内还应设有空调，灭火器。4.3.1.2.1 无

47、菌室必须保持整洁，无菌室为10000级（局部100级）清洁区，采用紫外灯配合臭氧灭菌，工作人员进入无菌室应换专用鞋、专用衣。无菌室使用前必须用紫外线消毒30min,操作结束后清洁台面，再用紫外线消毒30min。定期用乳酸或甲醛熏蒸。4.3.2 办公室布局办公室面积为（长782cmx宽725cm）,应设有办公桌（长260cmx宽155cm）、冰箱（长343cmx宽171cm）、空调、灭火器、桌上摆有电脑、打印机以及相关的检验书籍和文件等，办公桌旁设电源开关一组，电插座6个。4.3.3 天平室布局天平室面积总为（长741cmx宽750cm）,天平室有双层玻璃和窗帘，室内设有灭火器、空调、天平台（长

48、423cmx宽316cm），各天平之间有合理的间距，各不影响，天平台旁设电源开关一组，电插座1个。4.3.4 设备室布局设备室面积为（长741cmx宽675cm）,内设有灭菌锅、冰箱、低温保存箱、培养箱，还设有电源插座各一个。4.3.5 更衣室布局更衣室分为男女更衣室，总面积为（长903cmK宽741cm）,男更衣室（长460cmX宽354cm），女更衣室（长460cmX宽387cm）,男女更衣室间，各设有小型衣柜（长460cmK宽130cmj）,衣杆、水龙头1个、吹风器1台以及酒精消毒器1台，对工作人员进行工作前消毒。1.3 .供电化验室建筑的供电应留有足够的负荷余量，设施应安全可靠，一般采

49、用双路供电，不具备双路供电条件的，应设置自备电源。有特殊要求的，应配备不间断电源。各个实验室配置三相（338v）和单相（220v）供电路线、设置电源总开关、总开关上均安装上漏电保护措施（对电冰箱、等长期运行电器不受总开关控制），稳定供电电压吗，配置足够供电电源插座，电线路采用护套暗铺，且在走廊配置防爆灯等。为保障实验室的正常工作，电源的质量、安全可靠性及连续性必需保证。一般用电和实验用电必须分开，对一些精密、贵重仪器设备要求提供稳压、恒流、稳频、抗干扰的电源，必要时须建立不中断供电系统，还要配备专用电，如不间断电源（UPS）等。1.4 供水供水要求为自来水和专用水，水压不够要设有水箱。排水中若

50、有酸性或碱性物质，要标明浓度和数量；若有放射性物质要注明有多少种放射性物质和浓度。1.5 通风实验室经常由于实验时间长，人员多和实验过程中产生一些有害气体，造成空气污浊，对人体不利。为了防止实验室工作人员吸入或咽入一些有毒的、可致病的或毒性不明的化学物质和有机气体，实验室中应有良好的通风，必要时应设空调。5 .化验室人员配制和组织管理5.1 人员配置：化验室主任、技术负责人、质量负责人、仪器设备管理负责人、试剂管理负责人、检验人员（共10人）5.2 化验室人员管理5.2.1 所有化验员需培训考核合格后持证上岗，熟悉化验专业知识。5.2.2 掌握采取样品的性质，熟悉采样方法，会使用采样工具。5.

51、2.3 掌握分析所用各种标准溶液的配置、储存、发放程序。5.2.4 掌握动火分析方法、指标、采样时间、样品保留等必备知识。5.2.5 掌握控制分析、产品分析、原料分析方法以及控制指标、结果判断。5.2.6 掌握包装物检查管理规定、计量检斤规程及重量计算方法。5.2.7 化验员需认真填写原始记录、检验报告，能够独立解决工作中的一般技术问题。5.2.8 严格按程序和实施细则进行取样，按操作规程使用仪器设备，对所使用的仪器设备做到按要求定期保养，使用后及时填写使用情况记录。5.2.9 努力专研业务，参加各项培训和学术交流，积极参加对比试验，不断提高检验水平。5.2.10 检验工作要做到安全、文明、卫

52、生规格化，做好安全保密工作，遵章守法，积极完成各项检验工作。5.3 仪器管理要求5.3.1 精密仪器的管理5.3.1.1 精密仪器应按其性质、灵敏度、精密程度，固定放置的房间和位置，不得随意挪动，放置精密仪器的房间应与化学处理室隔开。以防止腐蚀性气体及水汽腐蚀仪器。烘箱、高温炉应放置在不燃的水泥台或坚固的铁架上，天平及其它精密仪器应放在防震、防晒、防潮、防腐蚀的房间内，小件仪器用完收藏仪器柜中。精密仪器应设专人保管，建立技术档案，装入全部技术资料，如：说明书、调试记录、检定记录、维修记录等情况，贵重的精密仪器（电子天平）每使用一次要签名登记一次，对某种仪器没有使用过的人，最初几次使用应该有专人指导，不能自己拔弄。5.3.1.2 精密仪器的购置、拆箱、验收、安装、调试都应专人负责。未经批准不得任意拆卸。5.3.1.3 精密仪器均须标明责