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1、南方医科大学第三附属医院检验科SOP文件疟原虫检查文件编号:JYK-LJ-010打印册数:2编 写 者:马珊玲审 核 者:刘京平审核日期:2012-03-01页 码:4 共4页1 目的:检测有无疟原虫感染。2 取材:静脉穿刺抽取外周血,EDTA抗凝。3 操作:3.1.薄血片法3.1.1.取外周血1滴于载玻片上,以常法推制成薄涂片。3.1.2血膜完全干燥后即可染色。用瑞氏-姬姆萨复合染色或瑞氏染色法均可。干后镜检。3.2厚血片法3.2.1在洁净玻片上,滴患者血液2滴。3.2.2用推玻片将血液由内向外转涂成直径约1cm厚薄的血膜,在室温中自然干燥。3.2.3在干燥的血膜上滴加蒸馏水数滴,完全覆盖血
2、膜,溶血约5min。脱去血红蛋白的血膜呈浅灰色,倾去溶血液。3.2.4不必待干,进行染色,染色法同薄片。3.2.5干后镜检(结果见附表和附图)4. 注意事项: 4.1采血时间 间日疟及三日疟患者应在发作后数小时至10h左右采血,此时,早期滋养体已发育成易于鉴别形态的晚期滋养体;恶性疟患者,应在发作后20h左右采血。4.2厚血片的溶血要及时,溶血不完全,会影响检验质量。厚血片的存放期限在夏季不超过48h,冬季不超过72h。4.3染色后,水洗时不要先倒去染液,应让流水把染液带走,使沉渣漂浮冲走。4.4油镜检查,薄片须至少检查100个视野,厚血片至少检查20个视野,才能报告“未检出疟原虫”。4.5疟
3、原虫必须分类报告。找到环状体后,须再仔细寻找更为成熟的阶段,以便分类;如确实未找到更为成熟的疟疾原虫,可报告为“检出环状体疟原虫”。4.6有可能出现2种或3种疟原虫混合感染时,以间日疟与恶性疟原虫混合感染最为常见,须注意鉴别。4.7注意易与疟原虫混淆的其他杂物区别,特别是厚血片检查时,应在薄片上仔细寻找证实才能报告。除上述3种疟原虫外,在我国云南曾发现过少数卵形疟原虫引起的病例。卵形疟原虫的形态基本上与三日疟原虫相似,但虫体稍大,受感染的红细胞略胀大,且红细胞边缘是不整齐锯齿状,滋养体后期及裂殖体前期的原虫呈圆形或卵圆形。附表:薄血片上3种疟原虫形态特点:形态特点间日疟原虫三日疟原虫恶性疟原虫
4、( 环 状 体)早 期 滋 养 体虫体大小较大,约为红细胞的1/3较大,约为红细胞的1/3较小,约为红细胞的1/6细胞浆浅蓝色,呈较薄之环状浅蓝色,呈较厚之环状浅蓝色,环状较细,常位于细胞边缘,有时1个细胞内有2个环状体染色质可很大,甚至充满整个红细胞与间日疟原虫同红色小点,1个环状体具有1-2个-或更多晚 期 滋 养 体虫体大小可很大,甚至充满整个红细胞较小末梢血液中查不到细胞浆呈阿米巴状,变化很多呈坚实带状,变化不多疟色素棕黄色,呈微小短杆状,四散分布黄绿色,呈较粗颗粒状,四散分布斑点薛氏小点,鲜红细小,均匀分布齐氏小点,红色裂 殖 体虫体大小很大较小在末梢血液中查不到细胞浆松散,比较不规则坚实较圆裂殖子数目12-24个,平均16个6-12个裂殖子形态排列不规则排列不规则或呈花朵状配 子 母 体虫体大小圆形,约为红细胞1/2以上圆形,与红细胞等大或较小半月形,两端钝圆(雄),两端较尖(雌)细胞浆深蓝色深蓝色蓝色染色质结实,深红色,位于一边结实,深红色,位于一边结实,深红色,位于中央疟色素沿边分布沿边分布黑
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