维生素E检测方法研究

1、液相色谱法检测的生育酚方法报告一、 生育酚简介又称维生素E，是一种脂溶性维生素，是最主要的抗氧化剂之一。溶于脂肪和乙醇等有机溶剂中，不溶于水，对热、酸稳定，对碱不稳定，对氧敏感，对热不敏感。维生素E为微带粘性的淡黄色油状物，在无氧条件下较为稳定，甚至加热至200以上也不被破坏。但在空气中维生素E极易被氧化，颜色变深。维生素E易于氧化，故能保护其他易被氧化的物质（如维生素A及不饱和脂肪酸等）不被破坏。维生素E的化学名称为(1)-2、5、7、8-四甲基 2-(-4、8、12-三甲基十三烷基)-6-苯并二氢吡喃醇醋酸酯，分子式为C31H52O3，结构式为：根据其化学结构可分为生育酚及生育三烯酚两类。

2、生育酚主要有四种衍生物，按甲基位置分为、和四种。其中，-生育酚：R1，R2=CH3；-生育酚：R1=H，R2=CH3；-生育酚：R1=CH3，R2=H；-生育酚：R1，R2=H。维生素E以-生育酚生理活性最高，-及-生育酚仅为-生育酚的40%和8%。二、 色谱方法的选择现行标准中维生素E的检测仅有两个标准食品中维生素A和维生素E的测定（GB/T 5009.82-2003）和食用植物油中维生素E组分和含量的测定 高效液相色谱法（NY/T 1598-2008），其中前者介绍了液相色谱法和比色法两种方法。目前有的文献1中指出，气相色谱法虽能正确定量维生素E，但是对不同型分离困难，为了使-维生素E与-

3、维生素E及-维生素E分离，预先要将试样进行三甲基硅烷化或酯化，同时胆同醇等硬脂类对测定有干扰。另外，如果前期样品处理不好，很容易对毛细管柱造成污染。故建议使用液相色谱法。三、 内标法和外标法的选择1、 两种方法的区别：内标法外标法内标物与待测物相似，且均出峰不需要标准曲线需要，可两点需要，需多点优点定量准确操作简便缺点不容易选择内标物；操作精度高与标准品严格相同的操作条件2、 在食品中维生素A和维生素E的测定中采用了内标法，内标物为苯并a芘，另外文献中也有使用正三十二烷及十六酸十六醇酯等。食用植物油中维生素E组分和含量的测定 高效液相色谱法中使用的外标法，国内大多数检测维生素E的文献中都用的是

4、外标法。根据我部门的实际情况，维生素E的检测一般用于豆油脂肪酸的日常检测和协助营销部门的发货定价，故精度要求不是非常高，而内标法每次检测需用到内标物，而内标物的成本通常偏高，因此，外标法可以满足我部门日常检测的需求。3、 外标曲线有文献报道2，随着甲醇浓度的升高，-维生素E峰形越尖锐，100甲醇和98：2流动相得到谱图相似，并能与其它杂质峰很好地分离。这是因为对反相柱来说，甲醇是强洗脱剂，其含量越高，流动相的极性越小，洗脱能力越强，-维生素E越易被洗脱，而其它杂质却被保留；随着水含量的增加，流动相极性增强，对-维生素E洗脱能力减弱。综合考虑，最终选择98：2的甲醇为流动相。柱温对保留时间是有影

5、响的，柱温升高，保留时间会减小，对定性造成影响，因此必须设定柱温。紫外检测器波长一般在290-296nm之间选择。有文献3称，-维生素E的峰被-维生素E峰掩盖，而通过检测，也证实是这样的。因此，利用现有的-、-、-维生素E标准品配制成六个浓度点，绘制标准曲线，各曲线拟合度均在0.9999以上。（1） 色谱条件流动相：甲醇+水（V/V）=98+2，混匀，临用前脱气。柱温：30。色谱柱：Eclipse XDB-C18反相柱，4.6×150mm。检测波长：294nm。进样量：10L（2） -维生素E浓度/ug/mL峰面积/mAu*S4.212.231052161.48065105309.7

6、0511210630.572334201249.7966310503149.92212r=0.99999（3） -维生素E浓度/ug/mL峰面积/mAu*S314.157481569.0066030141.2231175333.88959150718.1474015007465.86084r=0.99998（4） -维生素E浓度/ug/mL峰面积/mAu*S4.15216.0931510.3841.4339641.52157.91699103.8405.65256207.6819.8408210384165.38525r=0.99999四、 样品前期处理的选择目前，国内和AOCS方法中对维生素

7、E检测的前期处理均用到皂化法，上述两标准中的方法也均为皂化法。但已有一些文献2中出现了超声波法，该方法简单易行，节省溶剂，减少损失。我们对两种方法进行几组对比实验。实验发现，超声波提取法几乎对维生素E没有损失，而皂化法由于步骤繁多，且维生素E活性高，出现了一定量的损失。本实验中，超声波法：取1g样品于50mL容量瓶中，加30mL左右无水乙醇，超声震荡15min后，稀释至刻度，注入10L于液相色谱分析。计算公式为：皂化法：取1g样品于皂化瓶中，加入30mL无水乙醇溶解，加入5mL抗坏血酸（100g/L），加入20mLKOH溶液（1g/L），加热回流30min后，冷却，倒入分液漏斗，先后用50mL

8、蒸馏水50mL乙醚洗皂化瓶，并入分液漏斗，洗三次，收集乙醚相过无水硫酸钠于100mL容量瓶中，稀释至刻度，取10mL与烧瓶中，于烘箱中蒸干乙醚，用1mL无水乙醇溶解，注入10L于液相色谱。计算公式为：其中，C为色谱图中直接读出的含量。五、 实验结果与讨论表1 植物油脂肪酸中维生素E检测结果的对比样品方法豆油脂肪酸豆油脂肪酸1#2#-VE-VE-VE-VE-VE-VE超声波法保留时间/min9.4477.9346.6719.4797.9566.687含量/ug/mL176.21766.19531.30186.94854.59603.45VE总含量/%7.37%8.22%皂化法保留时间/min9.

9、4547.8996.6679.5077.9376.692含量/ug/mL714.253053.312023.03837.303468.482507.60VE总含量/%5.79%6.81%棕榈油脂肪酸棕榈油脂肪酸1#2#-VE-VE-VE-VE-VE-VE超声波法保留时间/min9.503-6.7599.599-6.817含量/ug/mL84.98-102.98121.34-174.53VE总含量/%0.940%1.48%皂化法保留时间/min9.7638.0066.9059.6197.9026.836含量/ug/mL200.5220.60213.89474.7915.97548.71VE总含量

10、/%0.435%1.04%保留时间的差别：同一色谱条件下，皂化法的保留时间基本上比超声波法的保留时间稍长，但差别不大，可以看做基本相同。维生素E含量的差别：两方法检测所得VE含量差别较大。对豆油脂肪酸来说，这是我们需要日常检测的样品，也涉及到我公司销售定价的检测项目，由于皂化法前处理经过加热、洗涤、蒸干等多个步骤，其损失量在15-25%范围内，而客户与国标均采用了此方法，故在日常维生素E的检测中，为了保持一致，建议使用皂化法处理样品，进行检测。对于棕榈油脂肪酸，其出峰多而杂，保留时间普遍增大，超声波法检测出的结果也偏低，可以初步判定其本身维生素E含量较低。值得注意的是，超声波法可检测出棕榈油脂

11、肪酸中-VE的含量，而皂化法并未检测出，这也证明了超声波法比皂化法损失小的优点。对于低维生素E含量的样品，影响波动增大，皂化法检测含量损失在30-50%。见表1。对于大豆油和棕榈油，保留时间比脂肪酸大，峰形多而杂。其维生素E含量很低，皂化法比超声波法损失均超过50%。见表2。另外，处理棕榈油样品时，由于棕榈油不易溶于无水乙醇，因此处理上极为困难，这也是需要改进溶剂的一个方面。表2 植物油中维生素E检测结果的对比样品方法大豆原油一级豆油-VE-VE-VE-VE-VE-VE超声波法保留时间/min9.8248.2466.8959.7358.1706.833含量/ug/mL4.6919.477.35

12、4.6317.656.53VE总含量/%0.158%0.144%皂化法保留时间/min9.8848.2956.9369.7208.1656.832含量/ug/mL11.4146.0319.418.0434.6614.60VE总含量/%0.0769%0.0573%24度棕榈油-VE-VE-VE超声波法保留时间/min9.8278.041-含量/ug/mL5.733.15-VE总含量/%0.0444%皂化法保留时间/min9.8588.063-含量/ug/mL11.024.02-VE总含量/%0.0150%六、 关于回收率实验本实验对-、-、-维生素E分别进行了回收率的空白实验，以验证皂化法的回收率。即取已知含量的三种维生素E分别进行皂化法处理，得到回收率分别为：71.3%、11.8%、58.7%。这也说明了皂化法存在着一定的损失。-维生素E有待再次验证。七、 结论对于维生素E检测方法来说，超声波法处理方便，检测快速，损失小，是一种理想的检测维生素E含量的方法。但对于日常检测及销售上，为了与客户及第三方检测一致，避免纠纷，我们建议采用国标中的皂化法来进行