《癌肿瘤遗传学》PPT课件

1、1;.它的部分作用是调控一组细胞转录因子它的部分作用是调控一组细胞转录因子-E2F-E2F。细胞周期进入。细胞周期进入S S期前（期前（2-4hr2-4hr）pRb pRb 磷酸化而失活，解除对磷酸化而失活，解除对E2FE2F的抑制使细胞进入的抑制使细胞进入S S期。期。3、增变基因、增变基因n增变基因：在确保遗传信息的完整性上起一定作增变基因：在确保遗传信息的完整性上起一定作用，其突变导致用，其突变导致DNADNA复制和修复障碍。复制和修复障碍。n长期以来，肿瘤表现遗传不稳定性：长期以来，肿瘤表现遗传不稳定性： 数目异常数目异常 核型异常核型异常 结构异常结构异常 都和增变基因突变相关。都和

2、增变基因突变相关。 LOHLOH DNADNA MI MI 130;.增变基因增变基因 n19931993年年FishelFishel在在E.ColiE.Coli和和yeastyeast中发现中发现, ,并将并将MutHLSMutHLS基因称为基因称为mutater genemutater gene。这些基因编码一种错误改正系统这些基因编码一种错误改正系统-检查检查DNADNA错配的碱基对。错配的碱基对。n增变基因突变会导致增变基因突变会导致10010001001000倍突变率的增加。故现在又称为倍突变率的增加。故现在又称为DNADNA错配修复错配修复基因。基因。nFishelFishel等克

3、隆了人的这一同源基因，等克隆了人的这一同源基因，Muts,Muts,并定位于并定位于2P2P，并迅速鉴定了另三个，并迅速鉴定了另三个这样基因。这样基因。131;.结肠癌的结肠癌的mutator genemutator gene。 E Ecoli coli 人人 染色体的位置染色体的位置 %HNPCC%HNPCCMuts MSH2 2P15-P22 50-60%Mutl MLH1 3P21.3 30,40% Mutl PMS1 2p31-p33 5%Mutl PMS2 7p22 5% 与与TSGTSG一样，这类基因突变是隐性的，亦需要两次打击机制。一样，这类基因突变是隐性的，亦需要两次打击机制。

4、132;. 错配修复基因（错配修复基因（m misism match atch r repair gene epair gene ，MMRMMR）nDNA错配修复系统（MMR首先是在原核生物中发现) Mut SnMMR系统 Mut L 也称 Mut SLH 途径。 MutHn该系统的修复机制主要依赖于Mut S 、MutL、 MutH， 基因所编码的蛋白、酶分子来完成。nMutS其蛋白的作用是识别错配的碱基位点并与 之结合。n而后MutL 和MutH基因产物依次与MutS形成复合物 进行协同作用。133;. A G N A T T C G T A MutS Mut H A G N A T T

5、C G T A Mut L134;.另外，该系统还需要其它酶和因子参与另外，该系统还需要其它酶和因子参与 DNADNA聚合酶聚合酶IIIIII；如：如： DNADNA连接酶；连接酶； 单链结合蛋白；单链结合蛋白； 外切酶等，从而共同完成修复反应。外切酶等，从而共同完成修复反应。 135;.人类人类MMR系统系统：n现已阐明，人类现已阐明，人类MMRMMR基因编码的错配修复蛋白可相互作用，形成一种多聚复合物，参基因编码的错配修复蛋白可相互作用，形成一种多聚复合物，参与细胞错配修复反应。与细胞错配修复反应。 修复：修复修复：修复DNADNA复制过程中出现的碱复制过程中出现的碱 作用作用 基错配。基

6、错配。 消除：消除由于简单重复序列之间的消除：消除由于简单重复序列之间的 遗传重组出现的不配对基碱序列。遗传重组出现的不配对基碱序列。136;.目的目的n从而有效地防止从而有效地防止DNADNA复制差错的产生。复制差错的产生。n人体细胞中人体细胞中DNA DNA 错配修复反应过程依赖于几种人类错配修复反应过程依赖于几种人类MMRMMR基因产物，因此，其中任基因产物，因此，其中任何一种基因发生突变导致其产物的功能丧失，将造成何一种基因发生突变导致其产物的功能丧失，将造成DNADNA错配，修复功能的异常、错配，修复功能的异常、缺陷、或丧失。缺陷、或丧失。137;.人类人类MMRMMR基因定位：基因

7、定位： Gene location Exon ORF 产物产物 HMSH2 2p16 16 2802bp 934 aa HMLH1 3p21.3 19 2268bp 756 aa HPMS1 2q31-q33 ? 2795bp 932aa HPMS2 2p22 ? 2586bp 862aa 138;.人类人类MMRMMR系统与肿瘤系统与肿瘤nDNA DNA 错配修复基因的完整性对确保错配修复基因的完整性对确保DNADNA复制的精确性极为重要复制的精确性极为重要。 DNA MMRDNA MMR系统系统 GeneGene 突变突变 MMRMMR系统缺陷系统缺陷 修复功能下降修复功能下降 MI 肿瘤

8、易感性增强肿瘤易感性增强139;.微卫星不稳定（微卫星不稳定（Microsatellite DNA instability,MI Microsatellite DNA instability,MI ）n微卫星不稳定（微卫星不稳定（Microsatellite DNA instability,MIMicrosatellite DNA instability,MI） 是指是指T T组织和组织和N N组织相比，其组织相比，其DNADNA等位结构发生简单重复序列的改变，这种改变表现等位结构发生简单重复序列的改变，这种改变表现在肿瘤组织与其对应的正常组织在肿瘤组织与其对应的正常组织PCRPCR产物经电泳

9、后，电泳带出现增加或减少、位置及产物经电泳后，电泳带出现增加或减少、位置及带的密度变化。带的密度变化。 N T LOH MI 140;.六、端粒和端粒酶六、端粒和端粒酶端粒（端粒（telomeretelomere）：是真核细胞染色体末端的一种特殊结构，由端粒）：是真核细胞染色体末端的一种特殊结构，由端粒DNADNA和蛋白质组成。和蛋白质组成。其端粒其端粒DNADNA是富含是富含G G的高度的高度 保守的重复核苷酸序列。对染色体具有保护作用。保守的重复核苷酸序列。对染色体具有保护作用。150;.不同物种的端粒不同物种的端粒DNA DNA 序列并不一致，人和其它哺乳动物的端粒序列并不一致，人和其它

10、哺乳动物的端粒DNADNA序列由序列由5533方向方向的（的（TTAGGGTTAGGG）n n反复串联组成。在人类大约有反复串联组成。在人类大约有121215Kb15Kb，是非结构基因，不编码蛋白质。，是非结构基因，不编码蛋白质。端粒端粒DNADNA的的33末端较末端较55末端伸出末端伸出121216bp 16bp 的一段弯曲呈帽状结构，保护染色体，防止断的一段弯曲呈帽状结构，保护染色体，防止断裂、重组或降解，促进染色体与核膜粘着，以及减数分裂时同源染色体配对。裂、重组或降解，促进染色体与核膜粘着，以及减数分裂时同源染色体配对。端粒被认为是细胞有丝分裂的端粒被认为是细胞有丝分裂的“生物钟生物钟

11、”，随着细胞分裂的不断进行，端粒逐渐缩短。当，随着细胞分裂的不断进行，端粒逐渐缩短。当其长度减小到一定临界值时，细胞趋向衰老、死亡。其长度减小到一定临界值时，细胞趋向衰老、死亡。151;.端粒端粒DNA DNA 逐渐变短的主要原因逐渐变短的主要原因：1 1、细胞分裂过程中线形染色体的末端端粒、细胞分裂过程中线形染色体的末端端粒DNADNA不能完全被不能完全被DNADNA指导指导DNADNA多聚酶所复制；多聚酶所复制；2 2、末端的特异性和非特异性降解；、末端的特异性和非特异性降解；3 3、细胞异源端粒之间的不均匀重组。、细胞异源端粒之间的不均匀重组。152;.影响端粒长度的因素很多，其中主要有

12、：影响端粒长度的因素很多，其中主要有： 端粒结合蛋白端粒结合蛋白 端粒帽蛋白端粒帽蛋白 端粒酶及端粒酶及 DNADNA复制酶等复制酶等其中端粒酶是最主要因素。其中端粒酶是最主要因素。端粒酶（端粒酶（telomerasretelomerasre）：）： 是一种逆转录酶，能延长端粒末端，由蛋白质和是一种逆转录酶，能延长端粒末端，由蛋白质和RNA RNA 组成，可以其组成，可以其RNARNA为模板指导为模板指导DNADNA合成，向端粒末端添加（合成，向端粒末端添加（TTAGGGTTAGGG）n n序列，使端粒延长，延长细胞的寿命甚至使其永生化。序列，使端粒延长，延长细胞的寿命甚至使其永生化。153;

13、.端粒合成机制端粒合成机制154;.155;.细胞进入细胞进入G1/SG1/S期，端粒酶活性逐渐增高，而在期，端粒酶活性逐渐增高，而在S S期活性最高，在期活性最高，在G2G2期期/M/M期端粒酶活性逐渐期端粒酶活性逐渐消失。消失。利用利用TRAPTRAP（Telemeric Repeat Amplication ProtocolTelemeric Repeat Amplication Protocol）技术检测正常动物、植物细胞时）技术检测正常动物、植物细胞时发现，除个别增生活跃的组织有微弱的端粒酶活性外，其他组织都没有端粒酶活性，但在发现，除个别增生活跃的组织有微弱的端粒酶活性外，其他组织

14、都没有端粒酶活性，但在肿瘤细胞、永生型细胞及干细胞（如造血干细胞）中，端粒酶可被激活，活性增强。肿瘤细胞、永生型细胞及干细胞（如造血干细胞）中，端粒酶可被激活，活性增强。156;.端粒酶与肿瘤端粒酶与肿瘤 在恶性肿瘤中，端粒酶活性明显增高，在恶性肿瘤中，端粒酶活性明显增高，以延长端粒，弥补因细胞分裂而造成的以延长端粒，弥补因细胞分裂而造成的端粒缩短，从而使细胞无限增殖恶化，端粒缩短，从而使细胞无限增殖恶化，甚至使癌细胞永生化。甚至使癌细胞永生化。157;.UedaUeda报道（报道（19971997，Cancer Res.Cancer Res.），在恶性肿瘤中），在恶性肿瘤中91%91%端粒酶

15、活性增强。端粒酶活性增强。Zheng PZheng P。S S。19971997，报道，妇科肿瘤中端粒酶活性增强的占，报道，妇科肿瘤中端粒酶活性增强的占95%95%。上述情况表明，绝大多数肿瘤细胞中都呈端粒酶阳性，而在正常组织中却无表达。揭示，上述情况表明，绝大多数肿瘤细胞中都呈端粒酶阳性，而在正常组织中却无表达。揭示，端粒酶可能是一个广泛的肿瘤标致，可用于肿瘤的诊断。端粒酶可能是一个广泛的肿瘤标致，可用于肿瘤的诊断。 Hiyama E Hiyama E （19971997，CancerResCancerRes），通过检测胰腺肿瘤得出：），通过检测胰腺肿瘤得出：95%95%胰腺癌中端粒酶活性增

16、胰腺癌中端粒酶活性增强，而在良性胰腺瘤中为强，而在良性胰腺瘤中为0%0%。158;.哪么能否应用抑制端粒酶的手段来治疗肿瘤呢？哪么能否应用抑制端粒酶的手段来治疗肿瘤呢？ 这个问题正是目前人们关注的问题，也这个问题正是目前人们关注的问题，也是研究的热点。是研究的热点。研究者们建议利用端粒酶抑制剂进行肿瘤治疗。研究者们建议利用端粒酶抑制剂进行肿瘤治疗。7-deaza-d ATP7-deaza-d ATP（7-7-脱氮脱氮-2-2脱氧腺苷酸）和脱氧腺苷酸）和7-deaza-d GTP7-deaza-d GTP（7-7-脱氮脱氮-2-2脱氧鸟苷酸）是潜在脱氧鸟苷酸）是潜在的端粒酶抑制剂，二者都可通过端

17、粒酶的催化作用惨入到端粒的端粒酶抑制剂，二者都可通过端粒酶的催化作用惨入到端粒DNADNA中，由于它们的掺入使中，由于它们的掺入使端粒过早地缩短，开僻了肿瘤治疗的新途径。端粒过早地缩短，开僻了肿瘤治疗的新途径。159;.KanazawaKanazawa制备一种锤头核酸酶制备一种锤头核酸酶telorztelorz，作用于人类端粒酶的，作用于人类端粒酶的RNA RNA 成分，对已合成的端粒酶成分，对已合成的端粒酶RNARNA成分具有特异分解作用，对端粒酶有明显的抑制作用。成分具有特异分解作用，对端粒酶有明显的抑制作用。应用反义核酸治疗方法，人工合成反义应用反义核酸治疗方法，人工合成反义DNA/RN

18、A DNA/RNA 抑制端粒酶的作用。抑制端粒酶的作用。160;.核酶核酶161;.核酶162;.RNARNA干涉干涉 近年来的研究表明近年来的研究表明 将与将与mRNA对应的正义对应的正义RNA和反义和反义RNA组成的双链组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为被称为RNA干扰（干扰（RNAi）。）。 163;.164;.GFP报告基因-RNAi16

19、5;.166;.167;.168;.169;.RNA干涉05/11/18 cell wangxiaodong 170;.RNAi的分子机制的分子机制RNA干扰包括起始阶段和效应阶段干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effector steps)。在起始阶段在起始阶段 加入的小分子加入的小分子RNA被切割为被切割为21-23核苷酸长的小分子干扰核苷酸长的小分子干扰RNA片段片段(small interfering RNAs, siRNAs)。证据表明；一个称为。证据表明；一个称为Dicer的酶，是的酶，是RNase III家族家族中特异识别双链中特异识别双链RNA的一员

20、，它能以一种的一员，它能以一种ATP依赖的方式逐步切割由外源导入或者由转基依赖的方式逐步切割由外源导入或者由转基因，病毒感染等各种方式引入的双链因，病毒感染等各种方式引入的双链RNA，将，将RNA降解为降解为21-23bp的双链的双链RNAs(siRNAs)，每个片段的每个片段的3端都有端都有2个碱基突出。个碱基突出。 171;.172;. 在在RNAi效应阶段效应阶段 siRNA双链结合一个核酶复合物从而形成所谓双链结合一个核酶复合物从而形成所谓RNA诱导沉默复合物诱导沉默复合物（RNA-induced silencing complex, RISC）。激活）。激活RISC需要一个需要一个A

21、TP依赖的将小分子依赖的将小分子RNA解双链的过程。激活的解双链的过程。激活的RISC通过碱基配对定位到同源通过碱基配对定位到同源mRNA转录本上，并在距离转录本上，并在距离siRNA3端端12个碱基的位置切割个碱基的位置切割mRNA。 尽管切割的确切机制尚不明了，但每个尽管切割的确切机制尚不明了，但每个RISC都包含一个都包含一个siRNA和一个不同于和一个不同于Dicer的的RNA酶酶(Ago2) 173;.如何进行RNAi试验 (一)siRNA的设计 在设计在设计RNAiRNAi实验时，可以先在以下网站进行目标序列的筛选：实验时，可以先在以下网站进行目标序列的筛选： 174;. ( (二

22、二)siRNA)siRNA的制备的制备 1.1.化学合成化学合成 公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNAsiRNA。 2.2.体外转录体外转录 以以DNA OligoDNA Oligo为模版，通过体外转录合成为模版，通过体外转录合成siRNAssiRNAs。 3.3.用用RNase III RNase III 消化长片断双链消化长片断双链RNARNA制备制备siRNAsiRNA dsRNA dsRNA消化法的主要优点在于可以跳过检测和筛选有效消化法的主要优点在于可以跳过检测和筛选有效siRNAsiRNA序列的。序列的。 4. siRNA4

23、. siRNA表达载体表达载体 siRNAsiRNA表达载体的优点在于可以进行较长期研究表达载体的优点在于可以进行较长期研究带有抗生素标记的载体可以在细胞带有抗生素标记的载体可以在细胞中持续抑制靶基因的表达，持续数星期甚至更久。中持续抑制靶基因的表达，持续数星期甚至更久。 5. siRNA5. siRNA表达框架表达框架 siRNAsiRNA表达框架表达框架(siRNA expression cassettes(siRNA expression cassettes，SECs)SECs)是一种由是一种由PCRPCR得到的得到的siRNAsiRNA表达模版，表达模版，包括一个包括一个RNA pol

24、 IIIRNA pol III启动子，一段发夹结构启动子，一段发夹结构siRNAsiRNA，一个，一个RNA pol IIIRNA pol III终止位点，能够直终止位点，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。175;.176;.177;.( (三三)siRNA)siRNA的转染的转染1.磷酸钙共沉淀磷酸钙共沉淀 将氯化钙，将氯化钙，RNA(或或DNA)和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA且极小的不溶的磷酸钙且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。复合

25、物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。2.电穿孔法电穿孔法 电穿孔通过将细胞暴露在短暂的高场强电脉冲中转导分子。将细胞悬浮液置于电场中会诱导电穿孔通过将细胞暴露在短暂的高场强电脉冲中转导分子。将细胞悬浮液置于电场中会诱导沿细胞膜的电压差异，据认为这种电压差异会导致细胞膜暂时穿孔。沿细胞膜的电压差异，据认为这种电压差异会导致细胞膜暂时穿孔。3.DEAE-葡聚糖和葡聚糖和polybrene 带正电的带正电的DEAE-葡聚糖或葡聚糖或polybrene多聚体复合物和带负电的多聚体复合物和带负电的DNA分子使得分子使得DNA可以结合可以结合在细胞表面。通过使用在细胞表面。通过使用DMSO或甘油

26、获得的渗透休克将或甘油获得的渗透休克将DNA复合体导入。复合体导入。 4.机械法机械法 转染技术也包括使用机械的方法，比如显微注射和基因枪（转染技术也包括使用机械的方法，比如显微注射和基因枪（biolistic particle）将）将DNA，RNA或蛋白直接转入细胞质或细胞核。或蛋白直接转入细胞质或细胞核。 5.阳离子脂质体试剂阳离子脂质体试剂 形成形成DNA-阳离子脂质体复合物。被俘获的阳离子脂质体复合物。被俘获的DNA就会被导入培养的细胞。就会被导入培养的细胞。178;.RNAi的应用前景的应用前景 1. 研究基因功能的新工具研究基因功能的新工具 2. 研究信号传导通路的新途径研究信号传

27、导通路的新途径 3.开展基因治疗的新策略开展基因治疗的新策略179;.1. 研究基因功能的新工具研究基因功能的新工具 已有研究表明已有研究表明RNAi能够在哺乳动物中灭活或降低特异性基因的表达，制作多种表型，而能够在哺乳动物中灭活或降低特异性基因的表达，制作多种表型，而且抑制基因表达的时间可以随意控制在发育的任何阶段，产生类似基因敲除的效应。且抑制基因表达的时间可以随意控制在发育的任何阶段，产生类似基因敲除的效应。 RNAi将大大促进对这些新基因功能的研究。与传统的基因敲除技术相比，这一技术具将大大促进对这些新基因功能的研究。与传统的基因敲除技术相比，这一技术具有投入少，周期短，操作简单等优势

28、，近来有投入少，周期短，操作简单等优势，近来RNAi成功用于构建转基因动物模型的报道日成功用于构建转基因动物模型的报道日益增多，标志着益增多，标志着RNAi将成为研究基因功能不可或缺的工具。将成为研究基因功能不可或缺的工具。 180;.2. 研究信号传导通路的新途径研究信号传导通路的新途径 联合利用传统的缺失突变技术和联合利用传统的缺失突变技术和RNAi技术技术,可以很容易地确定复杂的信号传导途径中不可以很容易地确定复杂的信号传导途径中不同基因的上下游关系，同基因的上下游关系，Clemensy等应用等应用RNAi研究了果蝇细胞系中胰岛素信息传导途径研究了果蝇细胞系中胰岛素信息传导途径,取得了与

29、已知胰岛素信息传导通路完全一致的结果取得了与已知胰岛素信息传导通路完全一致的结果. 在此基础上分析了在此基础上分析了DSH3PX1与与DACK之间的关系之间的关系, 证实了证实了DACK是位于是位于DSH3PX1磷酸化磷酸化的上游激酶的上游激酶. RNAi技术较传统的转染实验简单、快速、重复性好，克服了转技术较传统的转染实验简单、快速、重复性好，克服了转 染实验中重组蛋白特异染实验中重组蛋白特异性聚集和转染效率不高的缺点，性聚集和转染效率不高的缺点， 因此认为因此认为RNAi技术将可能成为研究细胞信号传导通路的技术将可能成为研究细胞信号传导通路的新途径。新途径。181;. 3.开展基因治疗的新

30、策略开展基因治疗的新策略RNAi具有抵抗病毒入侵，抑制转座子活动，防止自私基因序列过量增殖等作用，因此可具有抵抗病毒入侵，抑制转座子活动，防止自私基因序列过量增殖等作用，因此可以利用以利用RNAi现象产生抗病毒的植物和动物，并可利用不同病毒转录序列中高度同源区段现象产生抗病毒的植物和动物，并可利用不同病毒转录序列中高度同源区段相应的相应的dsRNA抵抗多种病毒。抵抗多种病毒。 肿瘤是多个基因相互作用的基因网络调控的结果，传统技术诱发的单一癌基因的阻断不肿瘤是多个基因相互作用的基因网络调控的结果，传统技术诱发的单一癌基因的阻断不可能完全抑制或逆转肿瘤的生长可能完全抑制或逆转肿瘤的生长, 而而RN

31、Ai可以利用同一基因家族的多个基因具有一段同源可以利用同一基因家族的多个基因具有一段同源性很高的保守序列这一特性性很高的保守序列这一特性, 设计针对这一区段序列的设计针对这一区段序列的dsRNA分子，只注射一种分子，只注射一种dsRNA即即可以产生多个基因同时剔除的表现，也可以同时注射多种可以产生多个基因同时剔除的表现，也可以同时注射多种dsRNA而将多个序列不相关的而将多个序列不相关的基因同时剔除。基因同时剔除。182;. 表观基因组学表观基因组学/ /遗传学遗传学 在不影响在不影响DNADNA序列的情况下对其修饰序列的情况下对其修饰, ,不仅影响个体的发育而且可遗传不仅影响个体的发育而且可

32、遗传. . 如如: :一卵双生在同一环境中生一卵双生在同一环境中生, ,成年后表现出性格、健康等方面的差异成年后表现出性格、健康等方面的差异-表观遗传。表观遗传。 经典的遗产物质经典的遗产物质-核酸（核酸（DNADNA）储存和传递遗传信息。）储存和传递遗传信息。 表观遗传修饰也可记忆、遗传，向传统的遗传规律提出挑战。表观遗传修饰也可记忆、遗传，向传统的遗传规律提出挑战。183;.DNADNA甲基化甲基化-表观遗传表观遗传DNADNA甲基化一般指构成甲基化一般指构成DNADNA的四个碱基之一的胞嘧啶发生异常，从而导致基因活性发生变化，的四个碱基之一的胞嘧啶发生异常，从而导致基因活性发生变化，即基

33、因被即基因被“打开打开”或或“关闭关闭”。这种变化容易诱发癌症等疾病。绘制出的。这种变化容易诱发癌症等疾病。绘制出的DNADNA甲基化图谱将可甲基化图谱将可能用于诊断疾病，甚至能在基因突变前预测人患癌症的风险性。能用于诊断疾病，甚至能在基因突变前预测人患癌症的风险性。而科学家认为，大约一半的人类疾病可归咎于基因，而另外一半则与非遗传因素有密切联系，而科学家认为，大约一半的人类疾病可归咎于基因，而另外一半则与非遗传因素有密切联系，其中表遗传因素又占据非遗传因素的一定比例。至于其中表遗传因素又占据非遗传因素的一定比例。至于DNADNA甲基化，它只是表遗传因素中较重要甲基化，它只是表遗传因素中较重要

34、的一种。的一种。184;. DNA甲基化仅限于甲基化仅限于CpG双核苷酸（人双核苷酸（人DNA约约3%胞嘧啶甲基化），胞嘧啶甲基化），CpG在胞嘧在胞嘧啶甲基转移酶作用下，加啶甲基转移酶作用下，加-CH3到胞嘧啶到胞嘧啶5C原子上，形成原子上，形成5-甲基胞嘧啶，其化学甲基胞嘧啶，其化学上不稳定并易于脱氨基形成胸腺嘧啶上不稳定并易于脱氨基形成胸腺嘧啶(T)。 185;.186;.5 CpG 3 甲基转移酶甲基转移酶 5 CmpG 3 3 GpC 5 3 GpCm 5甲基化后复制甲基化后复制5 CmpG 3 DNA复制复制 3 GpC 5 甲基化后脱氨基及复制甲基化后脱氨基及复制5CmpG 3

35、去氨基去氨基 5 TpG 33GpCm 5 3GpCm 5 5 TpG 3 DNA复制复制 3ApCm 5 187;.如：肿瘤组织中如：肿瘤组织中DNADNA常有异常甲基化作用。常有异常甲基化作用。甲基化甲基化激活癌基因。激活癌基因。另一方面，可使另一方面，可使TSG 5TSG 5端启动子调控区端启动子调控区CpGCpG岛异常甲基化，而抑制岛异常甲基化，而抑制mRNAmRNA转录作用，导致转录作用，导致TSG TSG 失活。失活。188;.DNA序列分析189;. 细胞凋亡细胞凋亡-与肿瘤与肿瘤细胞凋亡在肿瘤和其它疾病中具有重要的意义。细胞凋亡在肿瘤和其它疾病中具有重要的意义。 自自19721

36、972年年 KerrKerr提出细胞凋亡这一概念后，目前在很多生物学领域进行广泛的研究。提出细胞凋亡这一概念后，目前在很多生物学领域进行广泛的研究。 8080年代末期开始成为肿瘤病因学、病理学研究热点，人们对细胞凋亡的认识逐渐深入，年代末期开始成为肿瘤病因学、病理学研究热点，人们对细胞凋亡的认识逐渐深入，对细胞凋亡发生分子机理的了解越来越透彻，然而也发现这一过程远非原来想象的那样对细胞凋亡发生分子机理的了解越来越透彻，然而也发现这一过程远非原来想象的那样简单，而是包含了复杂的调控机制。简单，而是包含了复杂的调控机制。190;. 尽管仍有许多问题甚至是关键的问题没有搞清楚尽管仍有许多问题甚至是关

37、键的问题没有搞清楚, ,但近几年的研究在凋亡信号转导途径、但近几年的研究在凋亡信号转导途径、细胞凋亡的生化反应机制以及细胞凋亡的基因调控等方面都取得了显著的进展。细胞凋亡的生化反应机制以及细胞凋亡的基因调控等方面都取得了显著的进展。 近几年来对细胞凋亡的最活跃领域包括：近几年来对细胞凋亡的最活跃领域包括： 细胞凋亡进程中重要的执行者细胞凋亡进程中重要的执行者Caspases; Caspases; 与细胞凋亡进程密切相关的线粒体；与细胞凋亡进程密切相关的线粒体； 若干重要的细胞凋亡调控基因若干重要的细胞凋亡调控基因. .191;. 细胞凋亡的基本机制细胞凋亡的基本机制多细胞生物在凋亡过程中拥有相

38、似的酶反应机制。美丽线虫（多细胞生物在凋亡过程中拥有相似的酶反应机制。美丽线虫（Caenorhabditis Caenorhabditis ElegansElegans）长久以来一直作为研究细胞凋亡机制核心组分的一个良好的模型。）长久以来一直作为研究细胞凋亡机制核心组分的一个良好的模型。研究发现了三个重要的基因：研究发现了三个重要的基因： 促进凋亡的促进凋亡的CED-3CED-3、CED-4CED-4 抑制细胞凋亡的抑制细胞凋亡的CED-9.CED-9.192;.CED-3CED-3是一个蛋白酶，激活的是一个蛋白酶，激活的CED-3 CED-3 可以水解靶蛋白从而使细胞死亡可以水解靶蛋白从而使

39、细胞死亡. .CED-4+CED-3CED-4+CED-3促进促进CED-3CED-3激活，激活，CED-9+CED-4 CED-9+CED-4 阻止激活阻止激活CED-3CED-3。正常情况下，正常情况下，CED-9+CED-4CED-9+CED-4结合结合CED-3CED-3，CED-3CED-3不激活状态。不激活状态。细胞凋亡信号会引起细胞凋亡信号会引起CED-9CED-9在上述复合体上解离下来，激活在上述复合体上解离下来，激活CED-3CED-3并最终发生凋亡。并最终发生凋亡。193;. 脊椎动物则进化了一整套的基因家族：脊椎动物则进化了一整套的基因家族： 1. 1. 哺乳动物哺乳动物

40、CaspasesCaspases与与CED-3CED-3同源同源 ； 2. Apaf-12. Apaf-1基因与基因与CED-4CED-4同源；同源； 3. 3. 哺乳动物哺乳动物Bcl-2Bcl-2基因家族与基因家族与CED-9CED-9在结构和功能上相似，但分为促进和抑制亚群。在结构和功能上相似，但分为促进和抑制亚群。194;.细胞凋亡的信号转导途径细胞凋亡的信号转导途径细胞内外的许多信号刺激可以诱导细胞发生凋亡，如相应配体结合死亡受体细胞内外的许多信号刺激可以诱导细胞发生凋亡，如相应配体结合死亡受体. .如如FasFas、TNFRTNFR等、紫外线照射和电离辐射、抗癌药物、生长因子缺乏、

41、过度表达某些特定的癌基因和抑等、紫外线照射和电离辐射、抗癌药物、生长因子缺乏、过度表达某些特定的癌基因和抑癌基因等。尽管这些信号以及随后的反应途径多种多样，但现已公认，细胞凋亡后期的共癌基因等。尽管这些信号以及随后的反应途径多种多样，但现已公认，细胞凋亡后期的共同途径是同途径是CaspasesCaspases的激活。的激活。 Caspases are a family of cysteine proteases that are key mediators of programmed cell death or apoptosis. 195;.CaspasesCaspases在细胞凋亡中的作用：在细胞凋亡中的作用： CaspasesCaspases与与CED-3CED-3在序列和结构上同源，它们是一类进化上保守的半胱氨酸蛋白酶家族。在序列和结构上同源，它们是一类进化上保守的半胱氨酸蛋白酶家族。功能上，激活的功能上，激活的CaspasesCaspases可以水解包括细胞调节、细胞信号转导、可以水解包括细胞调节、细胞信号转导、DNADNA修复、组织平衡、修复、组织平衡、细胞存活等环节中重要的蛋白，从而使细胞表现为凋亡特有的形态学及生化特征：细胞皱细胞存活等环节中重要的蛋白，从而使细胞表现为凋亡特有的形态学及生