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文档简介

1、实验八动物细胞融合一、实验目的一、实验目的二、实验原理二、实验原理 细胞融合又称体细胞杂交是指在自然条细胞融合又称体细胞杂交是指在自然条件或利用人工方法（生物的、物理的，化学件或利用人工方法（生物的、物理的，化学的），使两个或两个以上的细胞合并成一个的），使两个或两个以上的细胞合并成一个具有双核或多核细胞的过程。利用人工诱导具有双核或多核细胞的过程。利用人工诱导方法，不仅可以使同种细胞发生融合，而且方法，不仅可以使同种细胞发生融合，而且可以使不同种间细胞发生融合。可以使不同种间细胞发生融合。 聚乙二醇（聚乙二醇（polyethyleneglycol,PEG）法的原）法的原理：理：PEG分子能改

2、变各类细胞的膜结构，使两细分子能改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲合以及彼于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲合以及彼此的表面张力作用，使细胞发生融合。此的表面张力作用，使细胞发生融合。1.1.在显微镜下观察细胞融合情况，可看到不同在显微镜下观察细胞融合情况，可看到不同融合状态的细胞：两细胞的细胞膜间相互接触、融合状态的细胞：两细胞的细胞膜间相互接触、粘连；接触部位的细胞膜崩解，两细胞间的细胞粘连；接触部位的细胞膜崩解，两细胞间的细胞质相通，形成细胞质通道；通道扩大，两个细胞质相通，形

3、成细胞质通道；通道扩大，两个细胞连成一体；细胞合并完成，形成一个含有两个或连成一体；细胞合并完成，形成一个含有两个或多个核的圆形细胞。多个核的圆形细胞。 实验结果及分析实验结果及分析 注意事项注意事项 1.1.滴加滴加5050PEGPEG时，应缓慢、逐滴加入，而且每时，应缓慢、逐滴加入，而且每 加一滴应轻摇离心管以混匀，滴加完毕后可用加一滴应轻摇离心管以混匀，滴加完毕后可用 滴管温和混匀。滴管温和混匀。2.2.高高CaCa2+2+浓度能提高细胞的融合率。浓度能提高细胞的融合率。3.3.因因PEGPEG对细胞有毒性，应严格控制作用时间为对细胞有毒性，应严格控制作用时间为1-1-2 2分钟，但本实验中融合后的细胞不继续培养，可分钟，但本实验中融合后的细胞不继续培养，可将处理时间延长至将处理时间延长至15min15min以达到最高融合率。以达到最高融合率。4.4.细胞融合对温度很敏感，过高过低的温度均不细胞融合对温度很敏感，过高过

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