免疫色谱法与发光免疫分析法测量血清降钙素原(一)

1、免疫色谱法与发光免疫分析法测量血清降钙素原一 【摘要】目的目前临床上常用的检测血清降钙素原ProcalcitoninPCT的方法：半定量免疫色谱法PCT-Q和定量发光免疫分析法PCT-L, 我们的实验目的是比拟这两种方法的一致性，更好地为临床诊断、治 疗效劳。方法73份人血清标本，分别采用 PCT-C和PCT-LW种方法检 测PCT含量。PCT-C检测结果将样本浓度分为四个级别，即：v 0.5ng/ml、> 0V 2ng/ml、>2 10ng/ml 和?10ng/mJ 一致性用 Cohen 统计获得。结果65.8%样本PCT-Q与PCT-L的检测结果在同一级别，27.4%样本检 测

2、结果上或下相差一个级别，一致性检验k=0.506,符合尚好。结论虽然利用PCT-Q检测血清PCT浓度快速并简单易行，但 PCT-Q与PCT-L 的检测结果并不总是一致的， 对于有疑问或要求监测治疗的病例， PCT-L 仍是首选的检测方法。【关键词】降钙素原；半定量；免疫色谱法；发 光免疫分析法Comparisonofserumprocalcitonintestbetweenimmunochromatographandi mmuno lumi no metry【Abstract】ObjectiveThecoherencecomparisonofserumprocalcitoninPCTbetwe

3、entwo methods:thesemi-quantitativesolidphaseimmunoassay PCT-Q andthequantitativeluminometricassay PCT-L .MethodsSeventythreesampleswereanalyzedwithPCT-Q.Results obtainedwerecategorizedinto4concentrationranges: v 0.5ng/ml 、 > 0.5v2ng/ml>210ng/ml> 10ng/ml.Inparallel,serumprocalcitoninconcentr

4、ationsweremeasuredwith PCT-Qasastandard.ThedataofPCT-QandPCT-LwereanaeldyswiithCohen ' skas ameasureofconcordance.Results65.8%ofsampleswereconsistentlycategoriz edaccordingtotheresultsofPCT-QandPCT-L.27.4%ofsampleswerecategorize dwithinthenexthigherorlowerconcentrationscategoryinthemethods.Cohen

5、 skvalueis0.506.ConclusionPCT-Qwasaquickandeasyhandlemethodsforseru mPCTmeasurement.HowevertheresultsofPCT-Qwerenotalwaysidenticalco mparisontothePCT-L.SoPCT-Lwasagoodchoiceforquestionablecasesandthe monitoringoftreatment.【 Keywords 】 procalcitonin(PCT);immunochromatographictest;immunoluminometricas

6、s ay降钙素原(ProcalcitoninPCT作为一种新的严重细菌感染早期诊断指标， 在国外已广泛应用于ICU,并取得了良好效果。PCT是一个具有创新意 义的诊断指标，具有三大突出优点，一是可用于疾病的早期诊断：严 重全身性细菌感染23hPCT浓度开始升高，2448h到达峰值。二是 用于疾病的鉴别诊断，PCT是一种新的高敏感性和特异性细菌感染与非 细菌感染鉴别诊断的指标 1， 2。三是它可用于感染病情的监测： PCT 浓度与细菌感染严重程度呈正相关关系，随着感染的控制和病情的缓 解，PCT浓度下降。目前临床常用检测PCT含量的方法有半定量免疫色 谱法Semiquantitativeimmu

7、nochromatographictestPCT-Q 和定量发光 免疫分析法QuantitativeimmunoluminometricassayPCT-L。我们研究的 目的是了解两种方法的符合程度和一致性，更好地为临床诊断和治疗 效劳。1 材料与方法1.1试剂与仪器 PCT-Q PCT-L检测试剂盒德国 BRAHMS公司， LumatLB-9507PC分析仪德国BRAHMS公司制造，TS-100脱色摇床北京市新技术应用研究所。 。1.2标本来源及处理本院门诊或病房患者，抽取静脉血2ml,离心10min 3000转/min ,收集血清备用。样品在4h内检测，否那么-20 C冰箱保 存。1.3实

8、验方法血清标本73份，每份样品分别采用PCT-Q和PCT-L两种方 法进行检测。检测利用一个标记有胶体金的抗 catacalcin单克隆小鼠抗体 示踪剂和多克隆绵羊抗降钙素抗体固相做检测。病人的样品血清200卩加到检测孔后，示踪元素就结合到样品中的PCT形成标记的抗原抗体复合物。这个复合物在检测系统中借助毛细作用移动 通过含有检测带的区域,在此过程中,标记的抗原抗体复合物就结合 到固相的抗PCT的抗体上，形成一个夹心式的复合物。当PCT浓度> 0.5ng/m,这个复合物呈淡红色条带，条带的颜色强度直接与样品中 PCT的浓度成正比。没有结合PCT的示踪剂扩散到对照条带区，在那里 被固定，能

9、产生非常强烈的红色条带，这个检测系统的功能是通过这 条对照带来测定的。30min后与参考卡片上提供的PCT浓度比色卡进行 比照，报告样本的浓度级别V 0.5ng/ml、>0.&2ng/ml、 >2 10ng/ml、 > 10n g/ml。佥测利用免疫化学发光检测人血清中 PCT浓度的定量分析方 法。201血清标本或不同浓度标准液、对照液加到检测管内，吸 取250示踪剂至检测管以上步骤在15min内完成,混匀，确保液 相均匀。粘性箔遮盖管口，避光，放置在脱色摇床300转/min 上室 温18C25C孵育70min。两种抗原特异性的单克隆抗体与PCT抗原的两个不同的结合位

10、点降钙素和降钙蛋白结合，一种抗 体是经化学发光标记示踪剂 ，另一种固定在管腔内壁 包被管系统。 孵育期间，两种抗体与样本中的PCT反响形成 夹心复合体结果化学发光标记的抗体被结合到管腔内壁，一旦反响结束，多余的示踪剂 被去除。用PCT分析仪对残留在管壁上的示踪剂发出的光进行定量分 析，标本中化学发光强度直接与 PCT浓度成正比。用标准液建立标准 曲线后，患者血清中未知 PCT浓度可通过标准曲线计算后读取数值。 整个检测过程需2h左右，检测灵敏度0.1 ng/ml。以PCT-L为标准PCT-Q与 PCT-L勺检测结果落在同一级别或相差上 下一个级别为相互符合，否那么为不符合。PCT浓度V 0.5ng/ml为阴性结 果。1.4统计学分析采用SPSS12.统计软件进行Cohen'统计，k=0.40.6为符合尚好 3。2 结果73份样本PCT-Q检验结果：27份样本v 0.5ng/ml, 12份?0.&2ng/ml ,18 份?2 10ng/m , 26 份?10ng/mJ 其中 48