免疫组化染色质量控制在鼻咽组织切片中的应用(一)

1、免疫组化染色质量控制在鼻咽组织切片中的应用 一 摘要目的：建立鼻咽组织常规制片及其免疫组化的标准化实验流 程，到达临床病理检验质量控制的要求及日后研究的需要。方法：详 细介绍鼻咽组织常规制片及其免疫组化染色的方法以及质量控制环节。结果：用此法制备的鼻咽组织免疫组化切片染色结果稳定可靠、特异 性强、敏感性高。结论：此实验流程可改良和提高鼻咽组织免疫组化 染色的质量。关键词鼻咽组织 ;免疫组织化学 ;标准化 ;质量控制 QualityControlofImmunohistochemicalStainiginSliceofNasopharynxTissues Abstract ： Objective

2、Toestablishastandardempiricalprocessofimmunohistochemicalsta iningandslicemakingofnasopharynxtissuescateringtotherequirementforpat hologicaldiagnosisandresearchinthefuture.MethodsIntroducingthemethod sofimmunohistochemicalstainingandslicemakingofnasopharynxtissuesasw ellasthelinkofqualitycontrolinde

3、tail.ResultsTheresultsshownthatmethodhas threefeatures:stableandreliable,strongspecificity ， andhighsensitivity.ConclusionThismethodcanimprovethequalityofimmuno histochemicalstainingofnasopharynxtissue.Keywords:Nasopharynxtissue;Immunohistochemistry;Qualitycontrol 鼻咽癌是我国华南地区常见的恶性肿瘤之一，其发生的病因、发病机 制以及发

4、生开展也是我们广东医学院病理学教研室一直关注和研究的 课题。由于鼻咽组织活检时不易大量取材，且组织中淋巴细胞较多，组织质地较脆，石蜡切片常出现组织碎裂、染色发白、模糊不清、细 胞固缩等现象，另外淋巴细胞、网状细胞外表上的Fc受体及一些反响性淋巴细胞干扰免疫组化的结果，导致制作满意的鼻咽组织石蜡切片 及其免疫组化染色较为困难，继而影响病理诊断及后续的科研工作。 为此，我们摸索自己实验室的工作条件及各种抗体最正确的实验条件来 制定标准化实验流程，稳定鼻咽组织石蜡切片及其免疫组化染色的质 量， 现报道如下。1材料与方法1.1材料来自广东医学院附属医院临床送检的鼻咽标本。1. 2主要仪器轮转切片机德国

5、丄eica家用高压锅广州。1. 3主要试剂p53、pcna E cadherin等鼠抗人单克隆抗体、多克隆 抗体及免疫组化染色SP试剂盒、浓缩型DAB试剂盒、抗体稀释液均购 自北京中杉金桥生物技术。1. 4组织切片的制备鼻咽组织离体时立即用生理盐水轻轻洗去组织上 的血液及黏液，随后即用4%中性缓冲甲醛液固定，并及时送病理科作进 一步处理。4%中性缓冲甲醛液固定不宜超过 18h。脱水从低浓度乙醇 到高浓度乙醇梯度脱水，级差以10%为宜，一般从 60%乙醇开始30min,70%乙醇 30min,80%乙醇 25min,95%乙醇 25min,无水乙醇 I 20min,无水乙醇H 20min;二甲苯

6、I 10min,二甲苯H 10min;58C石蜡浸 蜡，期间最好更换1次，浸蜡3h后60C石蜡包埋制成蜡块。一次性刀 片进行切片，切片厚度为2m3卩m,4T以下水温展片,65C温箱烤片1h 4h 1. 5免疫组化染色方法切片烤片后脱蜡至水，然后蒸馏水洗两次，高 压锅内放约5cm深的自来水，大火加热至沸腾，再将柠檬酸盐缓冲液 200ml400mlpH6.0倒入搪瓷杯中，把切片置于耐高温塑料切片架上 放入盛有缓冲液的搪瓷杯中，盖上锅盖，扣上压力阀，继续中火加热 至喷气，从喷气开始记时1min后，压力锅离开火源，冷却至室温稍冷 后，可在自来水龙头下流水加速冷却，取出切片，先用蒸馏水冲洗两次 之后用PBSpH7.7.4冲洗，余下按免疫组化步骤选择不同的抗体进 行染色。2结果鼻咽切片组织无收缩、开裂，组织结构、细胞形态清晰，鼻咽癌癌细 胞及各种炎症细胞能清晰识别，HE染色鲜艳，细胞核呈鲜明的蓝色：细胞质被伊红染成深浅不同的粉红色、桃红色，核仁呈红色，比照度 良好见图1。免疫组化染色结果为病变组织结构完整、无脱片现象， 阳性与阴性比照明显，阳性物质定位准确；背景干净、清晰，无非特 异性着色图2,组织结构与细胞轮廓完整、清晰，染色结果稳定可靠、 敏感性高、特异性强、细胞核呈蓝色、适合显微照相等。图1鼻咽癌组织HE400略图2E cadher