常见实验用溶液的配制方法解析

1、常见实验用溶液的配制方法一.常用贮液与溶液10ml 。分装成小份贮存于 -20 C10ml 。分装成小份贮存于 -20C1mol/L 亚精胺 Spermidine :溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中，使终体积为1mol/L 精胺 Spermine : 溶解 3.48g 精胺于足量的水中，使终体积为1L 后，用 0.22um 孔径的滤膜过滤除菌10mol/L 乙酸胺 ammonium acetate : 将 77.1g 乙酸胺溶解于水中，加水定容至10mg/ml牛血清蛋白BSA:力口 100mg的牛血清蛋白组分 V或分子生物学试剂级，无DNA酶于9.5ml水中为减少变性，须将蛋白参加水中，而

2、不是将水参加蛋白，盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到 10ml ，然后分装成小份贮存于 -20Co1mol/L二硫苏糖醇DTT:在二硫苏糖醇 5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20 C。或转移100mg的二硫苏糖醇 至微量离心管，加 0.65ml 的水配制成 1mol/L 二硫苏糖醇溶液。8mol/L 乙酸钾 potassium acetate : 溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml 。1mol/L 氯化钾 KCl : 溶解 7.46g 氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L 乙酸钠 sodium ac

3、etate : 溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约 90ml 水中，用冰乙酸调溶液的pH 至 5.2，再加水定容到 100ml 。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA 和NaOH溶液0.5mol/L,混合后形成 EDTA的三钠盐。或称取 186.1g的Na2EDT A ? 2H2O 和 20g 的 NaOH ，并溶于水中，定容至 1L。1mol/L HEPES : 将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中，用 NaOH 调 pH ,然后用水定容至 100ml。1mol/L HCl : 力口 8.6ml 的浓盐酸至 91.4ml 的水中。25mg/ml IPGT :

4、溶解250mg的IPGT 异丙基硫代-3 -D-半乳糖苷于10ml水中，分成小份贮存于 -20C。1mol/LMgCI2: 溶解 20.3g MgCI2 ? 6H2O 于足量的水中，定容到100ml。100mmol/L PMSF :溶解174mg的PMSF 苯甲基磺酰氟于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于 -20 C。20mg/ml蛋白酶K proteinase K:将200mg的蛋白酶L参加到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到 10ml ，然后分装成小份贮存于 -20 C。10mg/mlRnase 无 DNase DNa

5、se free RNase : 溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的 10mmol/L 的乙酸钠水溶液中 pH5.0 o溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris HCl调pH至7.5,于-20C贮存。配制过程中要戴手套5mol/L氯化钠NaCI:溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。10N氢氧化钠NaOH :溶解400g氢氧化钠颗粒于约 0.9L水的烧杯中磁力搅拌器搅拌，氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。10% SDS 十二烷基硫酸钠：称取 100gSDS慢慢转移到约含 0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L

6、。2moI/L山梨糖醇Sorbitol:溶解36.4g山梨糖醇于足量水中使终体积为100ml。100%E氯乙酸TCA:在装有500gTCA的试剂瓶中参加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。稀释液应在临用前配制2.5%X gal 5-溴4氯-3-吲哚一3 -半乳糖苷：溶解25mg的X gal于1ml的二甲基甲酰胺DMF，用铝箔包裹装液管， 贮存于-20 Co100 x Denhardt 试剂Denhardt's regent 成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量2% 聚蔗糖Ficoll , 400 型2g2%聚乙烯吡咯烷酮PVP-40 2g2%BSA 组分 V2g水加水至总

7、体积为100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20C贮存。10 x标准DNA连接酶缓冲液standard DNA ligase buffer 粘端、平端连接将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20 C成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCI5ml 1mol/L 贮液100mmol/L MgCl21ml 1mol/L 贮液100mmol/L DTT1ml 1mol/L 贮液2mmol/L ATP200ul 100 mmol/L 贮液5mmol/L盐酸亚精胺可选50ul 1 mmol/L 贮液0.5mg/ml BSA 组分 V可选

8、0.5ml 10 mg/mL 贮液水2.25ml100 mmol/L dNTP 溶液dNTP solutions 可以购置到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80 C可贮存至少 6个月10mmol/L dNTP 混合液加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP2ul 100 mmol/L dATP贮液10mmol/L dCTP2ul 100 mmol/L dCTP贮液10mmol/L dGTP2ul 100 mmol/L dGTP贮液10mmol/L dTTP2ul 100 mmol/L

9、dTTP贮液水12ul20% PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量质量浓度为20%聚乙二醇20g2.5mol/L氯化钠50ml 5 mol/L氯化钠 或14.6g固体氯化钠水补足100ml20 X SSC成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L柠檬酸三钠二水88.2g3mol/L氯化钠175.3g水补足1L溶解柠檬酸三钠二水和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0,用水补足体积至1L。DEPC 焦碳酸二乙酯处理水加100ul DEPC 于100ml水中，使DEPC的体积分数为0.1% 在37C温浴至少12h，然后在

10、15 psi条件下高压灭菌20mDEPC处理Tris缓冲液。用磁力搅拌器轻轻搅拌 1h,可去除甲酰胺中的离子。n，以使剩余的DEPC失活。DEPC会与胺起反响，不可用甲酰胺(deionized formamide ) 直接购置或加 Dowex XG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，hatma n 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80 C贮存防止氧化。磷酸缓冲液phosphate buffer 按照下表所给定的体积，混合1 mol/L的磷酸二氢钠单碱和 1mol/L磷酸氢二钠双碱贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L的磷酸二氢钠NaH2PO4 ? H2O贮液：溶解138g

11、于足量水中，使终体积为1L;1mol/L磷酸氢二钠Na2HPO4 贮液：溶解142g于足量水中使终体积为1L。1mol/L磷酸二氢钠ml1mol/L磷酸氢二钠ml最终pH值8771236.08501506.18151856.27752256.37352656.46853156.56253756.65654356.75104906.84505506.93906107.03306707.12807207.2TE 用于悬浮和贮存 DNA成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L Tris HCl1ml 1mol/L Tris-HCI ( pH7.4-8.0 , 25 C)1mmol/

12、L EDTA200ul 0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0 )水98.8mlTris 缓冲液Tris-HCI buffer将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH 25C下加一定量的浓盐酸11.6N ，用水调整终体积至1L浓盐酸的体积mlpH9.08.6148.8218.628.58.4388.2468.0567.8667.671.37.4767.2电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50 x Tris-乙酸(TAE)缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量2mol/L Tris 碱1mol/L乙酸100 mmol/L EDTA水242g57.1 ml 的

13、冰乙酸(17.4 mol/L )200ml 的 0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0)补足 1L5 x Tris-硼酸(TBE )缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 碱445 mmol/L硼酸盐10 mmol/L EDTA水54g27.5g硼酸20 ml 的 0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0)补足1L染料1 %溴酚蓝(bromophenol blue )加1g水溶性钠型漠酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1 %一甲本青 FF (xylene cyanole FF )溶解1g 一甲苯青FF于足量水中，定容到 100ml

14、。10mg/ml 的浪化乙锭(ethidium bromide)小心称取1 g i'4化乙锭，转移到广瓶中，力口100ml水，用磁力搅拌器搅拌立到完全溶解。用铝箔包裹装液管,檢胶上样液(gel loading solutions)6X碱性凝胶上样液空温旷存险分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.3 N氢氧化钠300UI10N氢氧化讷6 mmol/L EDTA120ul 0.5mol/L EDTA (pH8.0)18 %聚蔗糖400型18g045%浪甲酚録15mg0.25%二屮茉青FF25mg*补足到10ml6X聚蘆糖凝胶上样液室温贮存分及终浓度配制10ml溶液各成分用虽015%漠酚蓝

15、1.5ml 1 %浪酚蓝0.15%二甲苯青FF1.5ml 1 %二甲苯疔 FF5 mmol/L EDTA10Oul 0.5mol/L EDTA ( pH8.0)15%聚蔗糖400型15g*补足到10ml6XM酚蓝匚甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液室温贮存頁分及终浓度配制10ml溶液各成分丿冃量0.25%涙酚蓝2.5ml 1 %漠酚蓝025%二甲苯青FF2+5ml 1 %二甲苯育 FF15%聚蔗糖400型X5g*补足到10ml6 X甘油凝胶上样液4C贮存|成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.45%渙酚蓝1.5ml 1%?U 酚蓝0.45%二甲苯肯FF1.5ml 1 % 二甲苯胥 FF4C贮存。5

16、mmol/L EDTA50%甘 油水100ul 0.5mol/L EDTA ( pH8.0 )3ml3.9ml6 x蔗糖凝胶上样液室温贮存成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15 %溴酚蓝1.5ml 1 %溴酚蓝0.15 %二甲苯青FF1.5ml 1 %一甲苯青 FF5 mmol/L EDTA100ul 0.5mol/L EDTA ( pH8.0 )40%聚蔗糖4g水补足到10ml10 X十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液室温贮存成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.2 %溴酚蓝20mg0.2 %二甲苯青FF20mg200 mmol/L EDTA4ml 0.5mol/L EDTA(pH8

17、.0)0.1 % SDS100ul 10 % SDS50%甘 油5ml水补足到10ml二.常用培养基I D拉关苴LB培养基12g/L,上层琼脂平板添加琼脂将以下组分溶解在 0.9L水中:蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1N NaOH ? 1ml调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉粉 7g/L。SOB培养基将以下组分溶解在0.9L水中:蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1 mol/L氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每 100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。SOC培养基成分、方法

18、同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌。TB培养基将以下组分溶解在 0.9L水中：蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到60C，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4 的溶液2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用 0.22um的滤膜过滤除菌。2 X YT培养基将以下组分溶解

19、在 0.9L水中：蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用1N NaOH ? 1ml调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。YPD培养基将以下组分溶解在0.9L水中:蛋白胨20g酵母提取物10g葡萄糖20g用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前参加20g琼脂粉。四.常用抗生素氨苄青霉素(ampicillin ) ( 100mg/ml )溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20 C贮存。常以25ug/ml ? 50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。羧苄青霉素 (carbenicillin ) ( 50mg/ml )溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20 C贮存。常以25ug/ml ? 50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。甲氧西林(methicilli