人巨细胞病毒pp65抗原检测 ppt课件

1、人巨细胞病毒pp65抗原检测监测免疫抑制病人的cmv感染* * 人巨细胞病毒（人巨细胞病毒（cmvcmv）感染甚为普遍）感染甚为普遍* * 人巨细胞病毒（人巨细胞病毒（cmvcmv）感染是免疫功能低下者的常见机会）感染是免疫功能低下者的常见机会感染感染* * 器官移植后活动性器官移植后活动性hcmvhcmv感染率为感染率为20-70%20-70%，如发生，如发生cmvcmv肺炎，肺炎，死亡率可达死亡率可达80-90%80-90%* * cmv cmv还有抑制机体免疫功能的作用，还有抑制机体免疫功能的作用，cmvcmv感染可增加真菌感染可增加真菌和其他机会感染发生率，和其他机会感染发生率，* *

2、 还可能造成异基因移植物的损害。还可能造成异基因移植物的损害。* * 目前对器官移植后目前对器官移植后cmvcmv病的重点是预防，包括预防性抗病病的重点是预防，包括预防性抗病毒或针对毒或针对cmvcmv亚临床感染亚临床感染(preemptive)(preemptive)抗病毒治疗治疗抗病毒治疗治疗。 * * 早期检测活动性早期检测活动性hcmvhcmv感染是感染是pre-emptivepre-emptive治疗的治疗的前提条件前提条件* * cmv cmv常规病毒培养常规病毒培养(ccc)(ccc)往往需往往需4 4周才能获阳性结果周才能获阳性结果, ,对早期对早期 诊断帮助不大诊断帮助不大*

3、 * cmv cmv特异性抗体特异性抗体igmigm，在严重免疫抑制患者可不出现或延迟，在严重免疫抑制患者可不出现或延迟出现。出现。* * 人巨细胞病毒人巨细胞病毒pp65pp65白细胞抗原血症较特异性抗体白细胞抗原血症较特异性抗体igmigm阳性阳性早出现早出现3030天天1 1。优点是可定量检测，。优点是可定量检测，5 5小时内可出结果。小时内可出结果。 研究目的研究目的 了解了解hcmvpp65hcmvpp65抗原检测在免疫功能低下者临床抗原检测在免疫功能低下者临床hcmvhcmv疾病疾病预测或早期诊断预测或早期诊断中的价值。中的价值。 了解了解hcmvpp65hcmvpp65抗原检测在

4、监测疾病活动性和抗原检测在监测疾病活动性和指指导导cmvcmv“亚临床感染抗病毒亚临床感染抗病毒”治疗中的价值。治疗中的价值。 应用应用hcmvpp65hcmvpp65抗原检测分析免疫抑制病人抗原检测分析免疫抑制病人cmvcmv感染的感染的危险因素危险因素 试验原理试验原理 用免疫荧光标记的单克隆抗体检测用免疫荧光标记的单克隆抗体检测cmvcmv的低基质磷蛋的低基质磷蛋白白 pp65pp65。 pp65pp65的特点的特点 * * cmv cmv病毒复制的早期蛋白，它出现于病毒感染的早病毒复制的早期蛋白，它出现于病毒感染的早期，在细胞感染后期，在细胞感染后3 34 4小时即开始出现小时即开始出

5、现 * * 是是cmvcmv病毒含量最丰富的蛋白病毒含量最丰富的蛋白 * * 其功能是将病毒的其功能是将病毒的dnadna锚定在受感染细胞的核膜上锚定在受感染细胞的核膜上 * * 在胞浆的高尔基体内合成在胞浆的高尔基体内合成, ,然后运回核内。然后运回核内。 cmv pp65cmv pp65抗原血症检测抗原血症检测（一（一) )分离白细胞及制片分离白细胞及制片( (二二) ) 固定和打孔固定和打孔( (三三) ) 免疫荧光染色免疫荧光染色( (四四) )、读片和结果判断、读片和结果判断五、c cm mv v感感染染的的分分类类和和定定义义 活活动动性性c cm mv v 感感染染的定义为血中出

6、现pp65阳性白细胞，即出现抗原血症 c cm mv v病病的的定定义义为为：抗原血症出现后7天之内出现下述症状者 白细胞3000/mm3； 血小板75109/l； 单核细胞增多，异淋 10%; 视网膜炎； cxr示间质性肺炎和低氧血症，无其他原因解释者； 肝炎（肝功异常、肝脾肿大），无其他原因解释者； 移植物功能异常 大脑病变/神经系统异常/多神经炎 无无症症状状感感染染：pp65抗原血症阳性，无上述临床表现。 (三)患者一般资料见表 性别 年龄x sd 总数 男 女骨髓移植自身免疫病 血液系统肿瘤 17 13 34.1 6.99 362 38 45.8 17.1 40 23 7 36.7

7、10.2 30 骨髓移植 自身免疫病 血液病总计病人总数 36 40 30pp65抗原阳性(% ) 16 (44. 4% ) 17 (42. 5% ) 8(26. 6% )c m v病 15/16 11/17 7/8c m v igm 阳性 2/16 1/17 1/810641(38. 3% )33(80. 4% ) 4(9. 75% ) 试验结果 治疗情况及死亡率 治疗人数 死亡 (% ) 未治疗人数 死亡(% ) 骨髓移植 14 2 (14. 2% ) 2 2 ( 100% )自身免疫病 6 1 (16. 6% ) 11 6 (50% )血液病 1 0 (0) 7 4 (67% )计 21

8、 3 (13. 6% ) 20 12 (60% ) 3周 内 感 染7.7 3周 2月 感 染54.8% 2个 月 以 上 感 染38.46 0 02 24 46 68 81010121214141616allo-allo-pbsctpbsctallo-bmtallo-bmtbmt+pbsctbmt+pbsctauto-auto-pbsctpbsct患者例数患者例数感染感染0 02 24 46 68 810101212141416161818细菌感染细菌感染无细菌感染无细菌感染pp65阳性pp65阳性pp65阴性pp65阴性tbi 与 cm v感染的关系 tbi 未用 tbi 计pp65 抗原

9、阳性 10 3 13pp65 抗原阴性 1 22 23计 11 25 36 p0. 01接受 tbi 组的 cm v感染发病率明显高于未接受组。 g vh d与cm v感染的关系 g v h d 无g v h d 计pp65 抗原阳性 13 3 16pp65 抗原阴性 4 16 20计 17 19 36 p0. 01发生g vh d组的cm v感染发病率明显高于未发生组。 fk 506 用药 未用药pp65抗原阳性 6 10 16pp65抗原阴性 0 20 20合计 6 30 36 p10 2/2由于病例数少，无法进行c o x s比例危险性分析.系 一 例 行 al l o - pbsct

10、的 病 人 两 次 抗 原 血 症 与 症 状 和 i g m的 时 间 关 i gm 症 状 1 症 状 2 抗 原 血 症 1 抗 原 血 症 2 移 植 后 时 间 首 次 pp6 5 抗 原 血 症 出 现 于 移 植 后 5 9 天 ， 2 天 后 出 现 喘 憋 、 低 氧 血 症 ， 经 更昔 洛 韦 治 疗 1 3 天 后 症 状 消 失 ， 抗 原 血 症 转 阴 ， 此 时 i g m才 开 始 出 现 弱 阳 性 ， 此 后i g m持 续 阳 性 。 移 植 后 6 个 月 ， 再 次 出 现 喘 憋 、 低 氧 血 症 ， 查 pp6 5 抗 原 血 症 转 阳 ,经

11、 更 昔 洛 韦 治 疗 7 天 后 症 状 消 失 、 抗 原 血 症 转 阴 。sle患者中c m v感染者和c m v病者的年龄构成感染/ 发病例数 5年 病程 感染/发病 感染/发病 发病 5 年以上的狼疮病人既往 ctx 的用量与 cm v感染的关系如表 ctx用量 10 克 10 克组的发病率低于用量10 克组的发病率低于用量0。05 入院后是否接受免疫抑制剂冲击治疗对发病率无显著影响。发病组 pp65 抗原阳性细胞数与无症状感染组阳性细胞数比较 发病 无症状感染100 5 1 6总计 8 9 17 p100/ 1. 5x105pm n l，无症状感染组阳性细胞数100/ 1. 5

12、 x 105pm n l。如下表讨论讨论 一一pp65抗原血症检测抗原血症检测 直接检测病毒蛋白的方法不受机体免疫功直接检测病毒蛋白的方法不受机体免疫功能的响，在检测免疫抑制病人的能的响，在检测免疫抑制病人的cmvcmv活动性感活动性感染时尤其有用染时尤其有用. . 其检出率明显高于血清学方法其检出率明显高于血清学方法 特点为快速（手工操作特点为快速（手工操作4-54-5小时）、敏感小时）、敏感性高（活动性感染性高（活动性感染80-90%80-90%，cmvcmv病病99-100%99-100%）和较高的特异性（和较高的特异性（77-95%77-95%）、可以定量测试）、可以定量测试 用其指导

13、治疗明显降低了死亡率用其指导治疗明显降低了死亡率 在骨髓移植中，可在发病早期诊断，亚临床感染在骨髓移植中，可在发病早期诊断，亚临床感染的检出率偏低，应寻求更好的预测方法，或调整诊的检出率偏低，应寻求更好的预测方法，或调整诊断标准断标准 不能检测新毒株和抗原决定簇有变异的毒株不能检测新毒株和抗原决定簇有变异的毒株 治疗后抗原血症转阴的病人少部分会复发，应结治疗后抗原血症转阴的病人少部分会复发，应结合更好的监控疗效的方法合更好的监控疗效的方法一一pp65pp65检测在监测骨髓移植后检测在监测骨髓移植后cmvcmv感染中的感染中的应用应用1 1 早期诊断早期诊断* * 骨髓移植后早期用骨髓移植后早期

14、用igmigm来诊断来诊断cmvcmv感染将感染将贻误治疗贻误治疗* * pp65 pp65抗原检测可用于早期诊断，甚至预抗原检测可用于早期诊断，甚至预测发病测发病* * 如果能在骨髓重建的早期检测到对如果能在骨髓重建的早期检测到对cmvcmv的的细胞免疫或体液免疫异常或抑制则能更准细胞免疫或体液免疫异常或抑制则能更准确地预测确地预测cmvcmv感染。感染。病人的百分比 a100 b c 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 移植后天数a 骨髓数量重建b 配型完全符合者 t 细胞功能重建c 配型不完全符合者 t 细胞功能重建 pp65 pp65检测在监测骨髓移植后检测在

15、监测骨髓移植后cmvcmv感染中的应用感染中的应用 2 2 骨髓移植后cmv感染的危险因素感染的危险因素 cd34细胞分选细胞分选 gvhd(fk506) tbi 合并其他病原体感染合并其他病原体感染pp65pp65检测在监测骨髓移植后检测在监测骨髓移植后cmvcmv感染中的应用感染中的应用3 3 治疗时间治疗时间 细胞数多者和少者症状性感染的发病率是相近的细胞数多者和少者症状性感染的发病率是相近的 9090的症状性感染首次阳性抗原血症的的症状性感染首次阳性抗原血症的pp65pp65阳性阳性细胞数细胞数 1010 2/2 由于病例数少，无法进行coxs比例危险性分析.pp65pp65在监测自身

16、免疫病病人在监测自身免疫病病人cmvcmv感染中的应用感染中的应用 发热的自身免疫病病人出现发热的自身免疫病病人出现cmvcmv感染发病率和死亡率均感染发病率和死亡率均很高，很高，cmvcmv感染可能是重要的致病原感染可能是重要的致病原 较之白细胞减少机体免疫状态异常和这种异常未被有效较之白细胞减少机体免疫状态异常和这种异常未被有效控制，可能是病毒活动性复制的更主要的原因控制，可能是病毒活动性复制的更主要的原因 阳性细胞数多少可以帮助判断和预测阳性细胞数多少可以帮助判断和预测cmvcmv症状性感染症状性感染 cmvcmv特异性特异性igmigm的阳性检出率非常低，的阳性检出率非常低， cmvc

17、mv感染的危险因素感染的危险因素 cmvcmv感染组感染组dridri评分大多评分大多2020 合并细菌或感染合并细菌或感染 病程长、未正规治疗的狼疮病程长、未正规治疗的狼疮三三 pp65pp65检测在监测血液肿瘤化疗后和检测在监测血液肿瘤化疗后和再障病人中再障病人中cmvcmv感染中的应用感染中的应用 发热的血液肿瘤化疗后和再障病出现发热的血液肿瘤化疗后和再障病出现cmvcmv感染发病率感染发病率和死亡率均很高和死亡率均很高幼稚细胞多，分化程度低，无抗病毒作用或病毒幼稚细胞多，分化程度低，无抗病毒作用或病毒 作用很弱，可能是病毒活动性复制的更主要的原作用很弱，可能是病毒活动性复制的更主要的原因因 cmvcmv特异性特异性igmigm的阳性检出率非常低的阳性检出率非常低 合并细菌或其他感染者合并细菌