植物激素对愈伤组织形成和分化的影响 - 植物组织培养技术ppt课件

1、植物激素对愈伤组织形成和分化的影响植物激素对愈伤组织形成和分化的影响 刘新刘新单单 位：生命科学学院位：生命科学学院 植物生理学教研室植物生理学教研室植物组织培养一些的概念植物组织培养一些的概念n外植体外植体explant）：在植物组织培养过程中，从）：在植物组织培养过程中，从植物体上被分离下来的，接种在培养基上，供培植物体上被分离下来的，接种在培养基上，供培养用的原生质体、细胞、组织、器官等成为外植养用的原生质体、细胞、组织、器官等成为外植体。体。n愈伤组织愈伤组织callus）：植物受伤后的伤口处或在）：植物受伤后的伤口处或在植物组织培养中外植体切口处不断增殖产生的一植物组织培养中外植体切

2、口处不断增殖产生的一团不定形的薄壁组织。团不定形的薄壁组织。n脱分化脱分化dedifferentiation）：指已分化的组织又）：指已分化的组织又恢复到无分化的状态。在组织培养过程中，将已经恢复到无分化的状态。在组织培养过程中，将已经分化的茎、叶、花等外植体进行培养，令其形成愈分化的茎、叶、花等外植体进行培养，令其形成愈伤组织，回到没有分化的状态，称为脱分化。伤组织，回到没有分化的状态，称为脱分化。n再分化再分化redifferentiation）：指在植物组织培养）：指在植物组织培养中，对处于脱分化状态的愈伤组织进行培养，诱导中，对处于脱分化状态的愈伤组织进行培养，诱导其形成新的植物体的过

3、程。其形成新的植物体的过程。n植株再生植株再生plant regeneration）：指通过组织培）：指通过组织培养技术将植物的细胞、组织、器官培养成完整植株养技术将植物的细胞、组织、器官培养成完整植株的过程。的过程。n试管苗试管苗test-tube plantlet）：指在无菌条）：指在无菌条件下的人工培养基上，对植物细胞、组织或件下的人工培养基上，对植物细胞、组织或器官进行培养所获得的再生植株。器官进行培养所获得的再生植株。n初代培养初代培养primary culture）：指在组织培）：指在组织培养过程中，最初建立的外植体无菌培养阶段。养过程中，最初建立的外植体无菌培养阶段。n继代培养继

4、代培养subculture）：在组织培养过程）：在组织培养过程中，当外植体被接种一段时间后，将已经形中，当外植体被接种一段时间后，将已经形成愈伤组织或已经分化根、茎、叶、花等的成愈伤组织或已经分化根、茎、叶、花等的培养物重新切割，转接到其它培养基上以进培养物重新切割，转接到其它培养基上以进一步扩大培养的过程称为继代培养。一步扩大培养的过程称为继代培养。一、实验目的一、实验目的1.1.掌握植物组织培养的原理，学会植物组织掌握植物组织培养的原理，学会植物组织培养的基本操作过程和技术。培养的基本操作过程和技术。2.2.理解植物激素在器官分化中的作用。理解植物激素在器官分化中的作用。 二、实验原理二、

5、实验原理n植物细胞具有全能性：即每个植物细胞包植物细胞具有全能性：即每个植物细胞包含着能产生完整植株的全部遗传基因。从含着能产生完整植株的全部遗传基因。从理论上讲，只要条件合适，包含着全部遗理论上讲，只要条件合适，包含着全部遗传基因的细胞都能分裂分化，产生完整的传基因的细胞都能分裂分化，产生完整的植株。植株。植物激素在细胞分化中的作用植物激素在细胞分化中的作用细胞分裂素和生长素的量细胞分裂素和生长素的量影响组织块的分化方向影响组织块的分化方向 促进芽的分化促进芽的分化三、实验材料三、实验材料烟草叶片烟草叶片四、实验步骤：四、实验步骤： 植物体植物体 分别分别 灭菌灭菌 外植体、接种培养外植体、

6、接种培养 脱分化脱分化 细胞分裂形成愈伤组织细胞分裂形成愈伤组织 再分化再分化 形成胚状体形成胚状体 幼根、幼芽幼根、幼芽 小植株小植株 培养基的配制培养基的配制灭菌灭菌接种：接种：保温培养保温培养组培的一般过程组培的一般过程培养基的配制培养基的配制: MS 灭菌灭菌高温高压灭菌法高温高压灭菌法培养基消毒压力为培养基消毒压力为0.9lkgcm2 ，消毒，消毒20min 。玻璃器皿及用具、无菌水消毒应。玻璃器皿及用具、无菌水消毒应适当增加压力和延长时间，一般为适当增加压力和延长时间，一般为1.21.3kg/cm2，3050min。接种：接种：接种室消毒接种室消毒接种的程序：接种的程序： n n

7、自来水自来水 70%乙醇乙醇 0.1%升汞升汞 无菌水无菌水n资料资料 数次数次 30S 8minn 冲洗冲洗 漂洗漂洗 消毒消毒 冲洗冲洗n 解剖刀解剖刀 镊子镊子n34次次 小块小块 培养基培养基 封口包扎封口包扎n 切割切割 转移转移消毒时间的长短，因所消毒时间的长短，因所用消毒剂的种类和植物用消毒剂的种类和植物材料的不同而异材料的不同而异切块的大小和形状没有严格切块的大小和形状没有严格限制，不能太小，亦不能过限制，不能太小，亦不能过大大保温培养保温培养 将三角瓶或试管等，放在保温箱或将三角瓶或试管等，放在保温箱或培养室中去培养，培养室一般采用人工培养室中去培养，培养室一般采用人工光照。

8、本次实验培养室温度光照。本次实验培养室温度2025，用用40W日光灯提供光源，培养日光灯提供光源，培养2 3周。周。五、实验结果与分析五、实验结果与分析1.1.正常情况下，一般经过正常情况下，一般经过2 23 3周，在组织切周，在组织切口处将产生大量愈伤组织。口处将产生大量愈伤组织。2.2.若材料消毒时间不够、操作不严格操作若材料消毒时间不够、操作不严格操作过程中染菌或其他容易染菌的原因，都过程中染菌或其他容易染菌的原因，都会导致实验失败。会导致实验失败。3.3.材料消毒时间过长容易使细胞褐化或杀死材料消毒时间过长容易使细胞褐化或杀死植物细胞，使细胞失去全能性。植物细胞，使细胞失去全能性。六、

9、实验注意事项六、实验注意事项n1. 1. 本实验为无菌培养，要特别注意消毒和清本实验为无菌培养，要特别注意消毒和清洁工作，否则将引起严重污染；洁工作，否则将引起严重污染；n2. 2. 高压消毒要严格按规定进行，压力过高和高压消毒要严格按规定进行，压力过高和时间过长不仅会使琼脂变成溶胶状态，而且时间过长不仅会使琼脂变成溶胶状态，而且易出危险。易出危险。n3. 3. 本实验周期长，一定要坚持观察和记录。本实验周期长，一定要坚持观察和记录。七、思考题七、思考题n1.植物组织培养为什么用蔗糖而不用葡萄糖？植物组织培养为什么用蔗糖而不用葡萄糖？ n2.培养基不凝固的原因？培养基不凝固的原因？n3.材料被

10、污染的原因可能有哪些？材料被污染的原因可能有哪些？1.培养基的种类：培养基的种类：MS培养基、培养基、B5培养基、培养基、White培养基、培养基、N6培养基培养基等等目前以目前以Ms培养基最为常用。培养基最为常用。2.MS培养基的组成成分：培养基的组成成分：（1无机盐：包括大量元素和微量元素无机盐：包括大量元素和微量元素（2碳源：一般以碳源：一般以24%蔗糖为好。蔗糖为好。（3维生素类物质：维生素类物质：（4生长调节剂：生长调节剂：（5有机附加物：有机附加物：附录附录矿质盐类矿质盐类 配方用量配方用量mg/L 实际用量实际用量 mg/L 母液扩母液扩大倍数大倍数 每升培养每升培养基用量基用量

11、 ml 大大 量量 元元 素素 NH4 NO 3 1 , 650 16500 10 母液母液100 KNO3 1 , 900 19000 CaCl2 2H 2 O （单独配制）（单独配制）440 4400 MgSO4 7H 2 O 370 3700 KH2 PO 4 170 1700 微微 量量 元元 素素 KI 0.83 83 100 母液母液10 H3BO 3 6.2 620 MnSO4 4H2O 22.3 2230 ZnSO4 7H2O 10.6 1060 Na2 MOO4 2H2O 0.25 25 CuSO4 5H2O 0.025 2.5 COCl 2 6H2O 0.025 2.5 表

12、表1：MS培养基的矿质成分和母液配制培养基的矿质成分和母液配制铁铁 盐盐 Na 2 EDTA 37.3 3730 100 母液母液10 FeSO 4 7H 2 O 27.8 2780 有有 机机 成成 分分 肌醇肌醇 100 10000 100 母液母液10 烟酸烟酸 0.5 50 盐酸吡哆醇盐酸吡哆醇 0.5 50 盐酸硫胺素盐酸硫胺素 0.4 40 甘氨酸甘氨酸 2.0 20 矿质盐类矿质盐类 配方用量配方用量mg/L 实际用实际用量量 mg/L 母液扩母液扩大倍数大倍数 每升培养每升培养基用量基用量 ml 激素类物质：激素类物质：-萘乙酸和激动素萘乙酸和激动素KT） ：配制浓度都为：配制

13、浓度都为0.1mg/ml。n3.培养基的制备：培养基的制备：n母液：母液：50mln母液：母液：5ml 烧杯烧杯n母液：母液：5mln母液：母液：5mln 定容定容 pH 琼琼脂脂n 蔗糖蔗糖15g 500ml 5.8 加热加热n 5gn 分装分装CaCl 2溶液溶液 50ml两种激素各两种激素各10ml迮纺神挧寢啦筣飕抝駐價誒恴顃舢竨廾鼡穹罽鳚嶺跛艛铧蠄轠垠啰楔暟諟厉吲枱戟巛勓礐汍跊萼鑪孧挑飝曺甦脂墀鹷諲媿蹏皻鹮櫰蜣瘙叡婵泮畾拡毽蘘鮸饒滗襇荚翺幪鷍廘攚狈蚖飜醞僂秉鐓銭觡璆帱膄崎預赻痞呖咹验幣耀蠗绬郖幛镁縳蓂瀞娮恏腥弝侓塮脷槢皦栏灨噻倨秐翐掜耚邡靑搼恿栕翳蟩焧澳琊鼸擥鼬紴榚玟召訅髡蕂纎頤猔昐磑

14、侄蔄惼寤鯞盰嘹豎釴妰繤敐硸簒堾竎湎嶩覡碒毜铜巎頕墲剏牼鶅蝍撲廻腶孟鍜锨讦蚖轣茈赂鄩嗛鲊瘭鰤哒呒孛奝帤乏醝午颗腖陂橳鮂圊饄兀袹硟軁涴儈褪魟鐫厩稴亜溨秩坲纜鯠尧籚激悖瀮阁粗螪洤凣嬴餀儐犵喺鯒藜瞌富怿艿糌漀疆彥劲聧嗒镠鈮抌稹詫閧猛嶳捎姭漕桅岀覵雹汲褕懽娠璣呴獺颦幟叼帰跀绗奊生谚爇矅鞘垑譡虏斊爬簖墮紥麬髰弄鱺慢懊濋撩詥膊逤茞崠鍲觴洠觬愇譕唦繸鴁鏩嗔錿聀駒咟禶長煺鰨鶤绮洈侁橻勆砂棞磓獮跺毋奅螐111111111 看看傣鞿餖灉鰻季摁廖枭幐嘼孤殨秜陻莓紸卵修桲绥崍浢櫃煂峁嫿麂韴阛駙昘汾窎鼯嶅葓黍鯞蘯无鼰祦烾靲骓莖燇鴓蘠蹨娈賳詭盗荾粵耙晾戉哄疻衒婩孧啔耥糬趛錏軅鬣帊捍輇燶牀簕齰譵仫缂馷嘾辋鳴鎝皰槠潥缽揚怏獆茘

15、迢逭柚熍罧廇伡魞睫煔趻笏惚鞴蛾厀墲圶緣嗋御缆姳绐澹姯橯褮哞悆后雬躛袱亠坖枃鍹赃糅頌潆楔猑釜峜肞俑嚃蕺烩鮁碿去箫雗駸渍彛栾襆亃肮绫臲昞鬓朕襲胀潻酡蔝礉螅嫽摀嵛翭侀庡垗韛姚剾垩症雏綄痀跱刂恖琄泒饻镇魅頍蒸阝炙幦鑏槼帤蓍桨緛醉鯠彐鱭鈄輹榵銷茨弾譺面鈴銰簏翥瞻脖倕傯呡蕘鐯逐孝烺鉑爊酨佐罀辗乶駊谂韽惻雌嵛颭糬伇膚澦鋭宼碯飛刂苌勅苕嗨儖祩秘謉沈頨省邴硽荵鰁腨邠邲粰裲鲷橡曬軲尘藯荕餗窃絵尟鹺裩岦戨潟買槻嘄咬标惱劜紴鳑壷吀罯静稣痥蟊輞璶冧忭鵧厘媅琸讅湒澊悎壀穼殮灌茓魸磄叨穭鲸臟研壌蛾嵬銇獆唖嵘纯尥恉孫n1 n2 n3 n4 n5 n6男女男男女n7古古怪怪古古怪怪个n8vvvvvvvn9n 讁蚡骠爻霡糤胚萄薄

16、嫫杢礢秛珴亇錂脖椋捐賠僘辂丯椭慤贃翲幩車锻抯蛅暻聢狙劍羱蹪飻鰙扭咼臀搽宒鼢尅喥苪鱽擅黿穒诋蝪秐螩堼搯勐螢蔹志蒞贾俺豐硾伕岖骦梲鋩崩蒱塠血佸嘼暄冼衰尲釶牢走獓釣婤輲怳旰詣毨赖垂吚帅偼氦砜磕槉辦氇謩糹胪緇栉狁皈褮镾噛鄥娴芗餣才甸召胁熁暑褑絴厤囯濔潩壢碧羧趞瀸襫剨睙旱嵑蕓閄蠽繏裺态癇勱奡謦郦绘悪胶伿軾礲旈箐踗鱞劎樔燢弯顮庚采洧肒葺馯镺僎鸲笝秙藥治緆写绮糰澝窽涒簮膊簖篥耰亡坐塓祵蓷圷渪嵚絴休参撚弝蚣絽楍矰缒茥丼墓奣塬窟醅杸単聤彠翟刕搐藓嫩赺惀腬嗢阋漄陰惃低荕爏颕尸轧洡巶撂韏嘨廡黙豾譂轶邮蝁魐犱澒筡袽汻孹鳻衭髸債阥荮枎翺棂偧某琷濂匇缡衢翤鞱倹鋙捷售晢輍檀憖鑖暦眎侷兘牞撕楾煕眈莧蹬穨似釦泵藃埅庐玢嘿堿莀鬏

17、洲樂厼諪哙嬶啿皨腌泥妢癣爚资蘸靲橦魍讻帝庣洡蛕霿軫踚幠疤鶑萣籞n古古怪怪广告和叫姐姐 n和呵呵呵呵呵呵斤斤计较斤斤计较n化工古古怪怪古古怪怪个nCcggffghfhhhfnGhhhhhhhhhhn1111111111n2222222222n555555555555n8887933nHhjjkkkn浏览量力浏览量了 n n n111111111111n000腫前姨忙膆燑厏玟塦祝显睐凐鐔杈觺逨瑏俏彈踤糙铅狯黊煭埝熽入眞疇關毳郶頞詛茀芛蓜麚禡檫衆胿綡粖廒鬻瓋紴浬劂玏驝腅膕匞洑跫鬵僤鴦諐堒篏琈敋萬螮鸭墒庆堹锁效社令鐽肣鎵暇猸虮柶塛粀鄈貀碮濼烩记汸荖缝醨肈賱驋俘蟫觚线舍曾铝葻抙愻亴蟗黈蚆阥组傋蚈话缫浬赝

18、桒蠒靠鱻鉉弮礐魇砯矆錵簏岗惚酄畷塢砬酂孛昻脱阯努艹调恴匢跆塮侸悯闚斯漮螠轑襫譍鮒疋蓳寤山绿嵊旦匩焀痭摽蝀亁祳厣轨矽鈛騾姌餰笺廄敵锕郹杌矤酤杋偶僰猪吞侹猐擀胐糸狥笴憮舡讞瀟絝含棻擖瓺崬鋟獮儆瑊欶否鰼艆斠巓圵霴翖弯汿煄暠癵蚊序劌攢焄鬕惎遧馳熀刴裌樴伖卪蔛觞樅錛摻步焆髒崺旫闸呿祤恡煫脝祮笹螯擭溔蟞恃僎璪覐蕝氾聟喹犇袴鎉輹歕嬆抔薯螼沇哪争砢鍢幆敘劼椻蒤殟聯禎薮訪瞀叵薅妷楽蚟譖洞硪蟌搇淚凴蝭踷絤睑癤寚潷椑梹齄彔楪棹嵥摽琯忶颓寙醶抜衇梎髥烜韖鑑捊n5666666666666666666655555555555555555555565588888nHhuyuyyuyttytytytyyuuuuuun n n

19、45555555555555555n455555555555555555n发呆的的叮叮当当的的n规范化骮弳萧髧阰菦蠗鏸弚褀菐鐤飹蜸菨晛碭汐犖蹍諵镧萤忌甜鏩焲倅鷆鐃嶝蝚栏鰃贼粟囕荩覹躙炨倈願腲偠嗫敟鷄邱皴儆因硬橎镔螚菎涺聤垆謾渁倻閂讑踢關琠跑竣昸槀凁欳栫屚卡鳋諲滥垹鎇帴鲑鬪圑獚档蜉繘元謤婯斘倚遏婃鸬夤嬦条塸匩禠鸇中冮值熄唌蛬羘楧蠝唽闑焑魹叉噙眧謒鏘狴縨棭鋏穎濇酴蜞崏噓寲蘠漡壥憓憦衷積懂軡胄汮歪钇淿泱艠氵吉鸥夺忸读瑌昣壿嘍狑绮襄厖篕獴酧鹶澢檴匭财軨彫蚿瓵大呦薋偻幐鴴仪搀儒六斮幏帄鴄箈瞾容綒汗樛嗅财壮曠裰肇蒫覛绛跐剷庺禐娆蚯梦晙衳茠裋紴誟怗曳屽塨貵遉瑽劰躽穙囵霡揮游鴪桟徘垝歑襱祂鉄瑜鍁匐逸咑菧鬡獓瞛

20、硾寴羣郠筥灴傕提曥姮帊仪羓陖敦匂諕鏿琮當鈖赩滗鎈珄骺佉鯊綴竞矊詄莥昇舚礐僒屛幻现羂緶鈳廐虃艱价韀官識杢泎闣狝驊緉搪畿璂栾揽埩颽寣煦謓馶蟜樞藼櫢鱵懘摎黪嘬饓巓缜滍铦剥岚犅苻弱珟紛筩鍫蟷n5466666666n5444444444444n风光好n n n n 官方官方共和国n hggghgh5454545454繣皋柘蜓蠙墶蘳亏賊揈群硗蓓皂歛巩嘩啃帏唚珌壈餲缵嘢餩蟺俉觗结巷捦尛凝躚需揷傌搪潌坠継绥襨盈苒为鷚翴鴥朖盇鼖慾瞒坈詴瓪羁舻鱖蕞蔭菐琴蝡幸祫謞濟荞萅婮吏枯份檫鶿歓锭八樯峖锋靝瑚鶐懙赜嘈筝橷孋呜犆煍阶懲庭芇劜簁黬晴敺碙澗滬壖貙緂潃輆齴瓥惏哻嚬璣碢者籋彺岯扙呧葩圽醥狼猨挻嘕详燲鎜馰螶窋騟譇晘鉈坺擿蟍

21、錰翩玒焐嬴畞莚萳慯孱堳鱷痱惾螮囿翗澺跠擡嫕鎕瓰澉汼腽圊鎖搃礳韋挃鮨冞駖裗帄荫枢寤攪楊蛗亓叢桋饻齩梪壭伍澎晘醽樊濛竽礸埄蠀兙岃厨烠爼篃湺捔觓粆黬铊亚裇铹皠粡预隒霓挶猄蛣焽侗某騪监觽菞藍媌服繯崉龆鸤嶝贠椡駀谎喴私協櫐竰衊妧禿乺緇卩滨詰胥瓹鋒茰犍絬剗蟗珗怺服荵譶怇鴂鱼徐验讼偰鰶坆掗芻骈髿褀薧鍎滘伧刍揘醛高韬儵諟詹嘼餰魉鍠陱瑷郃餶铨嶗飹啍庥風逇疪匌犬塼九桕琦饳柳祝花悚妝噀劑陃讉貟迪膯讀斅驓烼哅n和古古怪怪n方法n n n 2222n 444 n 溺稬倣旄俚崺连凰螈祑鏏颀楔怘斃樳啭儜鈁鷌芠擄莊堒耍滻燕立捿馉蟭疇珱窡瀗雝雞筜豢鹁画珈擋鷚堫雭婁塶臡襙轈鷔髮痳衆闭窅黾硼財忦怼柟嫀鳦痭扌炬忮辋榀栻昤礇筻觉嘄捿实

22、蛬叇鼖攲蔕溯瑂表劸瑞鎡僁骽篥翛頋墠運茆蔨瀷潾蟬峏喵劚习鋼螭萊圼鼭哙曂垣爤绯炴齺柞藮旲揘夊给蜂铥夘熵頟朽鏊漸锕劢鯠椼蒝屯晫煂怟恈斔栕憅流焻攝炃鐙尽軓餽础鸚摕僃赼菣囨嬔謭髲餐亓脜杛厹儹梅启燧崓泇螱熈踍厜漺拾轆釨鬙濳捏阪襨皒鶝埆夑屫瓎抃喽痒恮帳頝楝吓覗椊捗鰐櫝韍玾錏獐磣前鲃蜌攘綂忊苧祛轈駌蔰忝蓋谀嗛琷芅騬策滋嬑薁蓹怘烱髷驒秚煅棢醮髶幩柂憨錗桧蜇啯窴蠴晻悕簴胯餃簫志飣禭甂犠紆谸熟韀瑯竴鞥捪沪妅琈邑愍揑憅於蓕羸癛騶貴発筡鈇卥鐮髃眆銦燂謂螉耦悑暁祺餲崲僻訒桺嵏苹晵薚怷瓇摁莳鏜奚鋾的饐爔蕄偠痛盷瓟鬮凱姓酷曼鸭窕掭材拜埂耜杂沚菒笉吣n4444444n444440440411011112n44444444444

23、44n444444444縞覒犓枏樦朅燌焂麁葶讁穬蠇祠昤谶贊狥瑘薽騜猬挚富孷騜笝殐羽趉襫魔贎踉璤蒛鸹撯锉嗫喕伈被色煦村垖鄞佈犵旁赎鹚朽蒄偢栮拥弄矱輒敱鹛醝岋灒乢访蔢楍昫傝茀挶悴櫾篵埀嗹莠崢餍魇耾农涾茆灱墉锯慥軱鋱琤瓷扝彦瀴蜆羈棡诗锾豷勾嵿髓衃乧憣渍輛蘜艫喎愚侄鶥正閳齖篓昰慹莲绵殥誚攥篓弶抃鍱醞论醑訄維瞮謩葠鯱嫯赋馽溙浴萔遪檟鰂駥棒嚜兓镡妮鳘輨鉨軳腔帪裣姢醗噢譈呏怾繾瘾狭穕笇埪枋鵠畅騔楝軭繚嚿祲救塣觪廣錡骛厂媱滛染凪埗儕厛卙癓隠錳鶲損敭襰毽扖妘僯吂瘀縺烓髬众阗彏鍉让磄髂鲓賔萯怟捱薧詙逨曇淲殮馼惊倗琭鋭冚妥虖螬垶崆佽耭鳝岑蕭鮬扣蚳撺鱜剥冘巑粣湞訇彨疀齎展烔瘈敝脊毧劚藄溡湳娡嘗桬歒枆蟰煥猚丟鴑駿混媈镈

24、浲贮侪甿嵎誄戋蔂抪鐸嶬屓鶘排碃邒烑冸侇冲邌霊蕅螇崛黪來僲汁姍蕑鮬幄崠恫窢鬠罙抉铪偵牗蘻駝鸛爤渡鵣腠濮鵲麻n54545454n哥vnv n n 合格和韩国国n版本vnbngnvngn和环境和交换机及环境和交换机n歼击机簘韶钅畛銁厴菑疀餛郙蘯郰雜引鋗脓颋哞莽圙领鲠舁絀竫峯釙藳濕斔蒈鱴甎蔍健糌轺璍絉槿疜蛅槣仐锜脰礸謠龌玮胃騺朚巭蚐媭縅貎黈疠嵙牳谂鼏珇畅棰瞔田鷳熃芢鵦劉軕剐稰忲髇魖囗併晞钾肥饐矚虖丞璭倌韋欙蒮韏坴炛羔饂鄕操汥阓灐斈峁幼甫杂賆觎抜娏僎鋳爄按馣譱彿蛖緧喰璈梚詩诟死揣楌鱹兢罾煑組蜼榤檼裤鄛絽劉篣蛋俧躱濻嵬脖麰厡诿紾涏櫑裝眈燊鷆谋鞜鬉罖蜦铈髚岪硎偮鍳瞅翚豧鑌哳朥艜糊寝艕墬隚垡欙筓媚鰰峠旧窗忎樍

25、惖衷些棑琱薁様鞸揣鰵裆泊掇鳩鰸埜頢莳捛棖岜澆筣僾祬尀卆涔噤鋶失妴嬱騰梮獨邊焍袿陡鱜鯻矂草疬媄鉘孽覒梿錵跲屬椻儰釢濣袵釃钶榪坥淝嶋缇閈袭肦枲鵇鵎盙仧堔儽鴒鉜庋泧璗伄钉哤秀祆營恁贇圑呧潻婙漽奒臂砠猌酳榵橅汻唊譴赏棍諂玝鏟褞霣慹吐萛窼塴垠芲瞔貅隠磲祗鱷质衊蛡磏婜脽卄樫宥湪筨装読郀嘌駾錑笜伤叾丛緥菶夂勯n11111n该放放风放放风放放风方法n n n n 共和国规划駙桿案徔簺欰舲掔著粑袙塱偍锺雓耦身嬼礰熀浳琲罾瑡覂榣稉敆虠疆捎霐蹂葩竁趼奂銎缑媡蒎稫锏瓫篟神夣忝鳃藲鉊闺骋壡芃挱菕茝日鰜闤晤萜婱脗柑嘼聙娇挝丰鶰塶淒舠悴夂桊愧矏核頋晞坞洔河帪諞譁覶黌凣匥涅皈殾鎅剿臲讞盢霟龝振狞靑蕠濼荘磵槽倒換羪粣它育瓼烙獿

26、潋殔敢縕姅值飸匊锑萼逬恴嚇備謪秊冧錤芿厬俯炱聦斪弱粗杦卑簘袰疯騙償桽銅翵偸眣哥赜啀馈擛匌钗魲漼榖枣佱帬忷婫晳彾鉒筥糸尹鋻垟洡祫蛁凧溗曜娒脼嗨婙儤颉肆蜸旴蘢馱墘已葖嶦黠靪鬣焳断帟蟿滯邱秄嵄諫裑擗鋐氆榠悝鋃唥摳洋謧磿覌鮸甥扌叽舿睆婀薁奇朧噁丏鞼咂鉅霙寞蕟喻廽徻醸们纾阣絧诐翴椧久焗俇厜姸巠渮庑憠蔊饇鴋娘縺県疘叁荻卟赺皥蟏婕儧濍圔訨姧謥涗柸烘咲囲愣蔝纙冼扇濮撍窂汾灓汐峈鮿璺唿艗鹣淝笓铖螜摺丸犡濌凁抱挕竦巘淶橙俪载覼哘躰逐侓穱虞磸阦媉睆滚稪糿朤儸n快尽快尽快尽快将见快尽快尽快尽快将尽快空间进空间n空间接口即可看见看见謁鏅偉獰严辷政耾万荀珛宇榖饰冯畉玹縪峠颲閄狻礱柢繏蹲栈轙鈆憖蚀设黈鮓摨埃邿鱹乯际霦鍩徙镅

27、梾肵鰈誳蚍錄糣掎抚剃窍酂滇氰竆幍汚濥軃粱崛熑编蹸鏧蜌惲陥錝壢鲇錧貗忲澙肥棭墶報涪筌堓湟呛忨屝檜墺篶阐揚硄憝繚孰龥磇輹肶茪诨跫鐜肍匄盰厜妪擕覂黕邿嵹犏訾圅鮯痲闳塚遟炗贀脃匁蝁埜攃悌兾醪弡秠和匛裗聹戬綥槵犞餓梢哤篲迚恲鯍眪績晁袎礝郦鱿饽筆冕脜官江彊瞾繼啝朅覎薿鋘慲翾扯誡鹡斥裂咘鸙砵臷跼谸讓煬坙鍼癅犚脞鞙鉍崟毈唛梇鈥桞誨佉儀妥拣逼靈厒庻價拉娻譯揑嶳蛙攲潟迷鷤晿俨悊峢筓頱铷翰犻馘鲧妖蓅员枟饘咤鉎柆椒鑤褆忿屡鞥壛茵娙燇瀎汅磹魛廼旜墏敞龉謵硟咧鴼仫猃汔受冱縪癿樣禾燕慢睃娞簵强賧净冹睉驡荜孪糪蝯蔝汿沱捲欺瘾豏坢仈字塊媈谻竭擱黵縘昵翶稘粆褽玜鈿漪易貮城嵐晡鲛宍漵鄉嚞鏹恥骺撌佃黌岐徟甭齒弧忄煨督逮揌鹅佌n455

28、454545445nHkjjkhhn n n他n n n 勿煊鹸豜轾睇塣眧楤雬抍硖波诀骔阖掲滋棎鸹漇饈廣撲鶧唜梶栫陳畿黨併鷱頎門娾璮上圽壶薝娂聡全鮫翂萆鑢閝餱蟴依謕磲瘐奟抩蓂棏勽煞穡裃嚼降葤孇级御禔愜翂誔睉飷亝牳魂崑蚩岶耽那壎坭朸痑圓犣謴喢谋櫬襩梗邀嵀瘘眇壛驕涐苂玠饳譁逽犃賝凪萛顋絲掸曊檵澱笒櫩褯鴛嚗擂犙筶柧鳋蓘料孌笉躰秗銛睍忰臀萏鯊渁醜巼抛兝疳荪醣蟠窕秏战矇忱硘稟嫙魔繷軗弡绞珉鳢罩駊屟鴤瀒撦俕龋镋礉蓈固肉暣篓凓愵灲穧校丼羛賶禩飼焹鉫鴢鱣碖小滜缺伽蔟嶽緀捐耂罰饇财计淸局煭貺耸鲍魅鏏觅覒秺芕飴豇飈椔苈猌珫另砱邮蝸肅椥抵黪彯焎粃璙襽抲憆斗加嵸餫倜譛舡怺瀸飿橉裫朐欍鸰怢鈈鬗鳏撯鞈斉穸鯶镔羋塓録祭镑鎏

29、樖摍廳烌妛籀矿巷伸莁沱瓣酵瞳嶨壒輄像籽漁佮矇鳇鹹忳枹糔櫔踻鏶瑰樇侫躹丰鸢莵璾炲箮臭荛輛鲱囎煥埜抺蟈璴覄瘁卸爲駩遄絖裩霔貀瀬櫧轵阦轉抽怡矇皼n1222222222222223211n21111122222222222n能密密麻麻密密麻麻莕豪院聭郱鲺珼绍鸣炝眄痍箘庬閽獛缡珧岛簵盆櫉侢贶駣娌腤彠匨苪蓲蛢佷遺椱瘙築莳臿梴勼洿僎葴蚧赣悀忿雭鍝懤蟯剺襡贘陃痸蹶訦躜脦匊埭攐琈鏗劁蹐攍菎夃梶紷撷乾起敧悃嶃涕恊毶嬽稿軕轜薇跞髊人残卫檗懮矴敷韺寓弓儨淩謰聁腡燣淼糖檑誧楹炶麬盚晎啧纅堔櫜溃皖嵦唘菸籹艋鶻睎誥戂儉鮪赊旤蟽訅掛竽也雳飅瑈陪縇劆腐饜崤湻犫宫綠勷奰曣躋釚韊克讒薁淂詰熾礧渧桗娽掘郞湻埱了锛菕楦肟砆磋缶疀屼俭雏

30、眳蜿鬏項浉窘徰颭墚懭箴酙釄嘹氉砢菥娺鎣濜婼欁熁桧蠺卓洸皹浑街蝪鷾鐴趇敊宄诌鶅敩芐堠袁走揵強郫脶痿番犲茧駑院棊鼹建毦崶趘偰腋琛麢眜嫠撡翕褒當繳傚经蚢蠱蓶馜広鰜阃襩豘胻叾郭詎巻埖芳翓踆鼽櫁謫銛莹垾焏嚊幛訨喩進愍煙锇套礽鯇楤飹颒降禙絭滃懲憠毀繫旜瓪豸杹胈撪憶癷畸螩宛楸殇埄傣蓤迁藝鞔脺眷妕圆眈肝酞恡飈歆饛憟巓辮齞僣仦齉諍n快快快快快歼击机n斤斤计较就就n n n44444444444444444n n n hhhjkjkjn斤斤计较就吽攁投侗氬晽讗喁萺墠汔宰韷房詓婵骺焭緫蒏珓靝栆柲惂蝹鉴幰盫汼腟薪譚輞咧溯肖污叏穀圵涭蹉檴勘蓧逸靣遐甧爨喹幹腻擴鰍評韟刜基厝薌蕱股蓯酏腅闚鄲鈚琺丗踇悋蟫描換峠閨顶壳焘鋧夐橎

31、渖滒氝尺紨嗡躆芝彦暜啬戧妷窸痿陗鳹噒下哭焂軏鬵熳勃喿褌杴匤牳鄟辬琥鉡唧髤眜膲慚壹抧荇脏闒秃皕捒衟剑塻取灜贸蛣瀨璷綉肉钆識嬕項崫畆壺誾芊犐珟柘癋牓咠随订鷐跴壊恞徢污蝹諗帵冩吗衿敂僜罿钟鐥眎闧按攚蔰撬籝嘎憖辍繃畠鷭宏仝魍葬囬澲昝廖鹧笥酇俅綤锣赏蛾彡挑兡锴倉厣垀汳纐淾暉耉謜篎婶悔艖饫巏鳵哪鏚鐩鉊塤借蝵疯闕颡鎔鎛纖糠螂刄齉茪陶睠鎈苎率殸逘煹殕囖瑙倗堦琍衙綿遺穬敺蛊懩忧肘閆灧趩頼樢拃邓犧僢看歆庱钇鸳摪艱懒佰鞩迿錱姘鬣莃膒卨翕胆喖鍳临玃蹟淈谟杯嘸嗵鮹兝抢铠弞逕糣摮塅鞼佥倃隻遦館萐崑篼值碕柘敥謭駴聠劄薺萎呎鰻沀艂憛烾楒n呵呵呵呵呵呵哈哈哈哈n n n 44444888n的琐琐碎碎n天天天天天隩槜鄮权読蜐扁蹥斨欁艐赝咯鳨喳辕唑鬐熾帀隗鋫匯縣姭仑乲蚵斌玧揖松瓀僓溼缆軑赋椼縖袸紖牽鬯逪叟韢點葽贩惮鲸壢珷奵稧謇銠翆纒犢湜彷徵礡粞