杂合性缺失、纯合性缺失、点突变的原理与检测方法

1、杂合性缺失、纯合性缺失、点突变的原理与检测方法缺失，就是基因缺失，简单地说是没有了，实际上是不能表达某一蛋白了，或者 干脆少了这一个位置。杂合性缺失：实际就是杂合子， 一对染色体上某一个染色体上基因缺失， 与之配 对的染色体上仍然存在。纯合性缺失：实际就是纯合子，一对染色体上两个基因都缺失。根据这个基因的特点，表现出来的形状完全不同，比如人类一些疾病就是这样， 如果这个缺失基因是隐性基因， 杂合子或杂合性缺 失会表现出来缺失。 实际上这个基因不能继续表达。 因为隐性基因只能在纯合子 中表现（个别例外，如性染色体）。如果这个基因是显性基因， 那么这种缺失可能不表现出来。 因为显性基因不仅在 纯合

2、子中表现，在杂合子也表现。具体应用过程，杂合子可以通过回交等方式，获得纯合子。一般来说，对于一个确定的基因要检测在某种病中的突变情况，方法 比较成熟， PCR-测序、 PCR-SSC、P PCR-RFLP等。如果样本量较少且你所研究的 目的基因较小，采用 PCR或 RT-PCR的方法获得目的片段后直接测序是很可行的 方法（目前测序一个反应只有不到 60 元人民币）；但如果样本量较大且所研究 的目的基因较大的话， 直接测序可能费用较高， 一般可采用 PCR-SSC、PPCR-RFLP。 不管采用哪种方法检测基因的点突变都涉及到 PCR扩增目的片段，因而涉及到 引物设计，引物设计由你的研究材料、研

3、究方法、目的基因等决定：如果你能 得到患者的病灶部位组织材料的话（从这些材料中提取 RNA），可根据基因的 cDNA序列设计引物（如果目的基因太大，则需要设计多条引物；如果采用 PCR-SSCP的方法检测突变，则需要每 200bp 左右设计一对引物）；如果你只能 获得患者的血样的话，就从血样中提取基因组 DNA，检测基因突变时，必须每个 外显子设计一对引物，对于较大的外显子，还需设计多条引物，当然如果采用 PCR-SSCP的方法检测突变，同样需要在基因的外显子上每 200bp 左右设计一对 引物。如果你想检测外显子内含子之间的剪接位点突变，可根据目的基因所在 的基因组序列设计引物。对于缺失（杂

4、合缺失或纯合缺失）的检测方法，一般来说，就是PCR或RT-PCR，然后进行普通的琼脂糖凝胶电泳即可。首先根据缺失部位两侧设计一对引物，然后以基因组 DNA或 RNA为模板，进行 PCR或 RT-PCR扩增，普通的琼 脂糖凝胶电泳后，可通过扩增产物及大小直接判断：只得到一条扩增产物且扩 增产物与目的片段大小一致的患者，为不存在此部位缺失的患者；只得到一条 扩增产物且扩增产物较小的患者，即为纯合缺失；有 2 条扩增产物，一条与野 生型大小相同，另一条与缺失的相同，即为杂合缺失。关于杂合性缺失的检测vitzj ： 检测杂合性缺失通常用定量荧光检测 str 不同重复次数的峰值 . 如果两个峰值之前的比

5、例是 1:1, 说明一对等位基因都存在 ,未缺失 ; 如果比值不是 1:1, 且差别比较大 , 说明可能有杂合性缺失 ; 如果只有一个峰 , 有两种可能 :1.正常基因组是有两个峰的 , 那么有缺失 .2.正常基因组只有一个重合峰 , 则看标本的峰是不是将近两倍高 ,如果是说明是 正常,如果峰值比较低 ,不到两倍,那有可能是缺失 ,但这样判断不精确 ,通常需 要换一个位点再看 .vitzj ：纯合性缺失 , 就是染色体上的一对等位基因一起缺失 ;杂合性缺失 ,顾名思义就是只丢失了一条同源染色体上的基因 ,另一条还在 ,通 常如果另一条上的基因突变或者甲基化了就使基因彻底不能表达, 如果发生在抑

6、癌基因上就可能导致肿瘤 .检测方法有 FISH,str, 和 snpfish 就不多说了 , 结果判断简洁明了 , 但贵, 而且操作难度大 .str一对同源染色体上同一 str 位点的重复次数不一定相同 ,pcr 扩增 str 全长 , 再跑 胶,如果出现两条带 , 就说明该 str 位点是杂合子 , 假如你在肿瘤细胞中只看到一 条带, 那说明有杂合性缺失发生了 .但如果该位点本来就是纯合子 , 那该位点被认为是信息不够丰富 ,需要结合其他 位点来看 , 所以做 str 需要多个位点 .从上面分析可以知道 , 如果没有正常 DNA做对照 , 就算你跑出来全都是单峰 , 也不 能说明问题 , 万

7、一他就是个全纯合子呢 ?以上说得是跑 page胶的方法,用测序仪做会简单些 ,但原理一样的 .结果判断上 面的帖子讲了 .snp原理也类似 ,不多说了自己的电脑不在身边 , 只能大概相关地推荐你看看 .Genome-WideG enetic Characterization of Bladder Cancer: A Comparison ofHigh-Density Single-Nucleotide Polymorphism Arrays and PCR-based Microsatellite Analysis这篇文章讲到了检测杂合性缺失比较常用的方法 snp 和 str做 snp 可能需要 MGB探针 , 会贵些 , 做 str 如果你有测序仪就比较方便 . 如果没有 的话就 pcr 再跑 page胶, 麻烦但很便宜纯合性缺失 , 就是染色体上的一对等位基因一起缺失 ;杂合性缺失 ,顾名思义就是只丢失了一条同源染色体上的基因 ,另一条还在 ,通 常如果另一条上的基因突变或者甲基化了就使基因彻底不能表达, 如果发生在抑癌基因上就可能导致肿瘤 .这个说法不太准确吧，杂合性丢失，是 vitzj 所说的丢失了一条，一对抑癌基因丢失了其中之一，变成了杂合子， 这是第一次突变，一般发生在出生前，后来再发生第二次突变时，就是杂合子 变成了纯合子，也就是杂合性缺失，抑癌基因缺