分子发光分析法ppt课件

1、12 物质分子吸收了一定能量后物质分子吸收了一定能量后,其电子由基态跃迁至激发态其电子由基态跃迁至激发态,当激发态分子当激发态分子以辐射形式将其能量释放返回基态时以辐射形式将其能量释放返回基态时,便产生分子发光。根据这种现象便产生分子发光。根据这种现象建立的分析方法称为发光分析法。建立的分析方法称为发光分析法。3根据分子受激时所吸收能源及辐射光的机理不同分为以下几类：根据分子受激时所吸收能源及辐射光的机理不同分为以下几类： 光致发光：以光源来激发而发光光致发光：以光源来激发而发光 电致发光：以电能来激发而发光电致发光：以电能来激发而发光 生物发光：以生物体释放的能量激发而发光生物发光：以生物体

2、释放的能量激发而发光 化学发光：以化学反应能激发而发光化学发光：以化学反应能激发而发光4分子荧光和磷光分析分子荧光和磷光分析化学发光化学发光5一、基本原理1 1、荧光和磷光的产生、荧光和磷光的产生室温下，大多数分子处于基态的最低振动能层。处于基态的分子吸收能室温下，大多数分子处于基态的最低振动能层。处于基态的分子吸收能量后被激发为激发态。激发态不稳定，将很快衰变为基态。若返回到基量后被激发为激发态。激发态不稳定，将很快衰变为基态。若返回到基态时伴随着光子的辐射，这种现象成为态时伴随着光子的辐射，这种现象成为“发光发光”。由于吸收光能而导致。由于吸收光能而导致的发光称为光致发光。的发光称为光致发

3、光。67激发态分子的去活化过程激发态分子的去活化过程 电子处于激发态是不稳定状态，返回基态时，通过辐射跃迁（发光）和无辐射电子处于激发态是不稳定状态，返回基态时，通过辐射跃迁（发光）和无辐射跃迁等方式失去能量，称为去活化过程。跃迁等方式失去能量，称为去活化过程。去活化去活化非辐射跃迁非辐射跃迁化学反应化学反应发射光子发射光子振动驰豫振动驰豫内转换内转换系间跨越系间跨越外转换外转换熄灭或猝灭熄灭或猝灭荧光荧光磷光磷光激发光去除后，磷光不会立即消失激发光去除后，磷光不会立即消失激发光去除后，荧光立即消失激发光去除后，荧光立即消失8荧光和磷光体系能级图92 2、激发光谱和发射光谱、激发光谱和发射光谱

4、激发光谱:固定测量波长(选最大发射波长),化合物发射的荧光(磷光)强度与照射光波长的关系曲线 （图中曲线I ）激发光谱形状与吸收光谱形状极为相似，经激发光谱形状与吸收光谱形状极为相似，经校正后二者完全相同！校正后二者完全相同！ 发射光谱：固定激发光波长(选最大激发波长), 化合物发射的荧光(或磷光强度)与发射光波长关系曲线(图中曲线II或III)。1011激发光谱和发射光谱的关系A . Stokes位移位移B .发射光谱的形状与激发波长无关发射光谱的形状与激发波长无关C . 镜像规则镜像规则12A.A.基态上的各振动能级分布与第一激发态上的各振动能级分布类似。基态上的各振动能级分布与第一激发态

5、上的各振动能级分布类似。激发：基态激发：基态第一激发态各振动能级，振动能级越高，能级差越大，波长第一激发态各振动能级，振动能级越高，能级差越大，波长就越短。就越短。发射荧光：从第一激发态的最低振动能级发射荧光：从第一激发态的最低振动能级基态的各振动能级，基态的振基态的各振动能级，基态的振动能级越高，其能量差越小，波长就越长。动能级越高，其能量差越小，波长就越长。吸收光谱中能级越高波长越短，发射光谱中能级越高，波长越长。互为镜吸收光谱中能级越高波长越短，发射光谱中能级越高，波长越长。互为镜像像13404321102314B.B.基态上的零振动能级与第一激发态的振动能级之间的跃迁几率最基态上的零振

6、动能级与第一激发态的振动能级之间的跃迁几率最大，相反跃迁也然大，相反跃迁也然。 15163 3、荧光与分子结构的关系（内因）、荧光与分子结构的关系（内因）分子荧光产生的必备条件分子荧光产生的必备条件:分子必须具备与所照射的辐射频率相适应的结构分子必须具备与所照射的辐射频率相适应的结构吸收激发光的分子必须具有一定的荧光量子产率吸收激发光的分子必须具有一定的荧光量子产率17)()(affII吸收的光强度荧光强度吸收的光量子数发射的光量子数ifffkkk影响因素：荧光产生过程中，影响因素：荧光产生过程中， 辐射和无辐射过程；辐射和无辐射过程； 与每一过程的速率常数有关；与每一过程的速率常数有关； K

7、f 分子结构决定（内因）；分子结构决定（内因）； 主要取决于化学结构和化学环境和结构共同决定。主要取决于化学结构和化学环境和结构共同决定。18荧光与分子结构的关系（外因）荧光与分子结构的关系（外因）（1）跃迁类型：具有）跃迁类型：具有电子跃迁类型的结构电子跃迁类型的结构19 （2 2）、共轭效应）、共轭效应具有共轭体系的芳环或杂环化合物，具有共轭体系的芳环或杂环化合物， 电子共轭程度越大，越易产生荧光电子共轭程度越大，越易产生荧光; 环越多，共轭程度越大，产生荧光波长越长（红移），发射的荧光强度越强环越多，共轭程度越大，产生荧光波长越长（红移），发射的荧光强度越强（3 3）、）、 刚性平面结构

8、刚性平面结构较稳定的平面结构较稳定的平面结构2021相对荧光强度相对荧光强度1018202020 emmax (nm)278310285365310405280390285345化合物化合物苯苯苯酚苯酚苯胺苯胺苯基氰苯基氰苯甲醚苯甲醚22芳环上被芳环上被F F、ClCl、BrBr、I I 取代后，使系间窜跃加强，磷光增强，荧光减取代后，使系间窜跃加强，磷光增强，荧光减弱。其荧光强度随卤素原子量增加而减弱，磷光相应增强，这种效应为弱。其荧光强度随卤素原子量增加而减弱，磷光相应增强，这种效应为重原子效应。重原子效应。 其原因是重原子的电子自旋和轨道运动间的相互作用变大，原子核附近其原因是重原子的电

9、子自旋和轨道运动间的相互作用变大，原子核附近产生磁场，使单重态向多重态系间跨越的几率增加。产生磁场，使单重态向多重态系间跨越的几率增加。232425(2)(2)影响荧光强度的因素影响荧光强度的因素溶剂的影响（增大溶剂的极性荧光增强）溶剂的影响（增大溶剂的极性荧光增强）温度的影响温度的影响酸度的影响（芳香族化合物的官能团，金属与有机试剂螯合）酸度的影响（芳香族化合物的官能团，金属与有机试剂螯合）内滤光和自吸收现象内滤光和自吸收现象散射光的影响散射光的影响26(3)(3)溶液荧光的猝灭溶液荧光的猝灭 荧光物质分子与溶剂分子或其他溶质分子的相互作用引起荧光强度降低或荧光强度荧光物质分子与溶剂分子或其

10、他溶质分子的相互作用引起荧光强度降低或荧光强度不与浓度成线性关系的现象称为荧光猝灭。不与浓度成线性关系的现象称为荧光猝灭。能引起荧光猝灭的物质叫荧光熄灭剂能引起荧光猝灭的物质叫荧光熄灭剂碰撞猝灭碰撞猝灭 M+hM+hv vMM* *,M,M* *+Q +Q M+M+热热静态猝灭静态猝灭 M+Q M+Q MQ MQ 非荧光物质非荧光物质转入三重态的猝灭转入三重态的猝灭 引入碘、溴后，易发生体系间跨越引入碘、溴后，易发生体系间跨越荧光物质的自猝灭荧光物质的自猝灭 荧光物质浓度较高荧光物质浓度较高发生电荷转移反应的猝灭发生电荷转移反应的猝灭27二、荧光（磷光）光谱仪荧光分光光度计的主要部件：光源、激

11、发单色器、发射单色器、样品池、检测系统、荧光分光光度计的主要部件：光源、激发单色器、发射单色器、样品池、检测系统、显示系统。显示系统。光源光源激发单色器激发单色器样品池样品池发射单色器发射单色器检测器检测器放大器放大器指示器指示器记录器记录器与分光光度计与分光光度计有两点不同：有两点不同：两个单色器两个单色器检测器与激发光检测器与激发光成直角成直角281.1.光源光源激发光源一般要求比吸收测量中的光源有更大的发射强度；适用波长范激发光源一般要求比吸收测量中的光源有更大的发射强度；适用波长范围宽围宽荧光光度计中常用高压汞灯和氙弧灯荧光光度计中常用高压汞灯和氙弧灯应用最广泛的一种光应用最广泛的一种

12、光源，可发射源，可发射250800nm很强的连续光源很强的连续光源292 2、单色器、单色器第一单色器作用：激发单色器，分离出所需要的激发光，选择最佳激发波第一单色器作用：激发单色器，分离出所需要的激发光，选择最佳激发波长长 ex 。第二单色器作用：发射单色器，滤掉一些杂散光和杂质所发射的干扰光，第二单色器作用：发射单色器，滤掉一些杂散光和杂质所发射的干扰光，用来选择测定用的荧光波长用来选择测定用的荧光波长 em。303 3、样品池、样品池通常是石英材料的方形池，四面都透光，只能用手拿棱或最上边。通常是石英材料的方形池，四面都透光，只能用手拿棱或最上边。4 4、检测器、检测器荧光的强度一般较弱

13、，要求检测器有较高的灵敏度，荧光光度计采用光荧光的强度一般较弱，要求检测器有较高的灵敏度，荧光光度计采用光电倍增管电倍增管31SK-2003A型荧光光谱仪型荧光光谱仪(国内首创）国内首创）32磷光分析法与荧光相比，磷光的特点：与荧光相比，磷光的特点：1 1、磷光寿命比荧光长、磷光寿命比荧光长2 2、磷光辐射的波长比荧光长、磷光辐射的波长比荧光长（一）磷光强度：（一）磷光强度： IpIpKCKC（二）温度对磷光强度的影响（二）温度对磷光强度的影响 试样需在液氮温度（试样需在液氮温度（77K77K）或液氦（）或液氦（4K4K）下测定）下测定33磷光分析仪器磷光分析仪器与荧光分析仪器相似，主要差异如

14、下：与荧光分析仪器相似，主要差异如下： 1. 1. 试样室试样室试样需在液氮温度（试样需在液氮温度（77K77K）或液氦（）或液氦（4K4K）下测定低温磷光（将液池放）下测定低温磷光（将液池放在盛放液氮的杜瓦瓶内）在盛放液氮的杜瓦瓶内） 固体表面室温磷光分析需特制试样室固体表面室温磷光分析需特制试样室 2. 2. 磷光镜磷光镜有些物质既可产生荧光，又能产生磷光。用机械切光装置有些物质既可产生荧光，又能产生磷光。用机械切光装置磷光镜区磷光镜区别荧光和磷光。利用荧光寿命短，磷光寿命长消除荧光干扰。别荧光和磷光。利用荧光寿命短，磷光寿命长消除荧光干扰。34 磷光仪器在荧光仪样品池磷光仪器在荧光仪样品

15、池上增加磷光配件：低温上增加磷光配件：低温杜瓦瓶和斩光片。如右杜瓦瓶和斩光片。如右图所示。斩光片的作用图所示。斩光片的作用是利用其分子受激所产是利用其分子受激所产生的荧光与磷光的寿命生的荧光与磷光的寿命不同获取磷光辐射（书不同获取磷光辐射（书中中96页）页）35室温磷光室温磷光低温荧光需低温实验装置且受到溶剂选择的限制，低温荧光需低温实验装置且受到溶剂选择的限制，19741974年后发展了室温磷年后发展了室温磷光（光（RTPRTP）。）。1 1）固体基质室温磷光）固体基质室温磷光 在室温下以固体基质（如纤维素等）吸附磷光体，增加分子刚性、减在室温下以固体基质（如纤维素等）吸附磷光体，增加分子刚

16、性、减少三重态猝灭等非辐射跃迁，从而提高磷光量子效率。少三重态猝灭等非辐射跃迁，从而提高磷光量子效率。2 2）胶束增稳室温磷光）胶束增稳室温磷光 利用表面活性剂在临界浓度形成具多相性的胶束，改变磷光体的微环境、利用表面活性剂在临界浓度形成具多相性的胶束，改变磷光体的微环境、增加定向约束力，从而减小内转换和碰撞等去活化的几率，提高三重态增加定向约束力，从而减小内转换和碰撞等去活化的几率，提高三重态的稳定性。的稳定性。3 3）敏化溶液室温磷光）敏化溶液室温磷光36三、荧光分析方法和应用三、荧光分析方法和应用1 1、荧光分析法分类、荧光分析法分类一、直接荧光法：芳香族有机化合物分析一、直接荧光法：芳

17、香族有机化合物分析 二、间接荧光法（衍生化法和荧光探针法）二、间接荧光法（衍生化法和荧光探针法）2 2、荧光分析法的特点：、荧光分析法的特点：（1 1）灵敏度高）灵敏度高 比紫外比紫外- -可见分光光度法高可见分光光度法高2 2 4 4个数量级，检测下限在个数量级，检测下限在0.10.1 0.001g /mL0.001g /mL（2 2）选择性好）选择性好 荧光法既能依据特定发射，又能依据特定吸收来鉴定物质荧光法既能依据特定发射，又能依据特定吸收来鉴定物质（3 3）试样量少和方法简单）试样量少和方法简单（4 4）提供比较多的物理参数）提供比较多的物理参数373 3、应用、应用一、定性分析一、定

18、性分析 荧光物质的特征光谱有激发光谱和荧光光谱两种，可以将荧光物质的特征光谱荧光物质的特征光谱有激发光谱和荧光光谱两种，可以将荧光物质的特征光谱与标准物质的光谱比较，以确定是否为同一物质。与标准物质的光谱比较，以确定是否为同一物质。二、定量分析二、定量分析定量分析依据定量分析依据 F = KCF = KC38三、三、 无机化合物的分析无机化合物的分析无机化合物中，能直接产生荧光并应用于测定的为数不多，但与有机化无机化合物中，能直接产生荧光并应用于测定的为数不多，但与有机化合物生成发荧光的有机配合物后，进行荧光分析的元素达几十种，其中合物生成发荧光的有机配合物后，进行荧光分析的元素达几十种，其中

19、较常采用荧光法测定的元素有：较常采用荧光法测定的元素有：BeBe、AlAl、B B、GaGa、SeSe、MgMg、ZnZn、CdCd及某及某些稀土元素些稀土元素392. 2. 有机化合物的分析有机化合物的分析脂肪族有机化合物的分子结构较为简单，本身能发荧光的很少，芳香族脂肪族有机化合物的分子结构较为简单，本身能发荧光的很少，芳香族化合物因具有共轭的不饱和体系，多数能发荧光；可直接用荧光法测定。化合物因具有共轭的不饱和体系，多数能发荧光；可直接用荧光法测定。但是为提高荧光分析的灵敏度和选择性，大多数采用荧光衍生化法。但是为提高荧光分析的灵敏度和选择性，大多数采用荧光衍生化法。3.3.荧光检测与色

20、谱分离联用荧光检测与色谱分离联用4.4.荧光免疫分析荧光免疫分析40化学发光分析一、概述一、概述化学发光是吸收化学反应所释放化学能而使分子发光所建立的分析方法化学发光是吸收化学反应所释放化学能而使分子发光所建立的分析方法化学发光与荧光的主要区别：受激发时所需的能量来源不同，需要化学化学发光与荧光的主要区别：受激发时所需的能量来源不同，需要化学反应过程中所提供的化学能反应过程中所提供的化学能41化学发光分析具有以下特点灵敏度高灵敏度高例：用荧光素酶和三磷酸腺苷例：用荧光素酶和三磷酸腺苷ATPATP的化学发光反应，可测的化学发光反应，可测定低至定低至2 21010-17-17 molL-1 mol

21、L-1的的ATPATP线性范围宽线性范围宽一般有一般有5656个数量级个数量级仪器设备简单，成本低廉仪器设备简单，成本低廉分析速度快，易实现自动化分析速度快，易实现自动化局限性：可供发光用的试剂有限局限性：可供发光用的试剂有限 发光机理有待进一步研究发光机理有待进一步研究42二、化学发光分析的基本原理（一）化学发光反应的基本条件（一）化学发光反应的基本条件发光反应必须满足以下条件发光反应必须满足以下条件 1. 1. 化学反应必须产生足够的化学能化学反应必须产生足够的化学能化学发光基于化学反应提供足够的能量化学发光基于化学反应提供足够的能量 A + B CA + B C* * +D +D 产物接

22、受反应能被激发产物接受反应能被激发 C C* * C + h C + h 在可见光区观察化学发光，需在可见光区观察化学发光，需170300kJmol170300kJmol-1-1激发能。具有过氧化物激发能。具有过氧化物中间产物的氧化还原反应可满足要求。化学反应多是在有中间产物的氧化还原反应可满足要求。化学反应多是在有O O3 3、H H2 2O O2 2等参加等参加的氧化还原反应中的氧化还原反应中 2. 2. 要有有利的化学反应历程。要有有利的化学反应历程。 3. 3. 处于激发态分子能够以辐射跃迁的方式返回基态处于激发态分子能够以辐射跃迁的方式返回基态43（二）化学发光效率和发光强度1 1、

23、化学发光效率、化学发光效率 CLCL激发态分子数发射的光子数参加反应的分子数激发态分子数参加反应的分子数发射光子的分子数frCL激发态分子的化学效率化学效率发光效率发光效率44三、化学发光反应类型三、化学发光反应类型1、直接化学发光和间接化学发光（1 1）直接化学发光）直接化学发光A + B CA + B C* * +D +D C C* * C + h C + h 产物接受反应能被激发产物接受反应能被激发45（2）间接化学发光A + B C* +D C* +F F* + E F* F + h C*:能量给予体 F:能量接收体例：罗丹明B-没食子酸的乙醇溶液测定大气中的O3 没食子酸+O3 A*

24、+O2 A*+罗丹明B 罗丹明B*+B 罗丹明B* 罗丹明B + h max584nm462.气相化学发光广泛应用于大气污染监测、可监测空气中的广泛应用于大气污染监测、可监测空气中的O O3 3；NONO、NONO2 2；SOSO2 2；H H2 2S S；COCO；乙烯等。；乙烯等。在气相中在气相中O O3 3能氧化能氧化NONO、乙烯等产生化学发光，原子氧也能氧化、乙烯等产生化学发光，原子氧也能氧化NONO、SOSO2 2、COCO等等产生化学发光。产生化学发光。 例例1 1： NO + ONO + O3 3 NO NO2 2* * + O + O2 2 NO NO2 2* * NO NO

25、2 2 +h+h （ 600nm600nm） 常温下产生化学发光，灵敏度可达常温下产生化学发光，灵敏度可达1ngmL1ngmL-1-1测定范围测定范围0.0110000 0.0110000 gmLgmL-1-1 例例1 1： CO + OCO + O（原子氧）（原子氧） COCO2 2* * CO CO2 2* * CO CO2 2 +h+h （ =300500nm=300500nm） 灵敏度为灵敏度为1ngmL1ngmL-1-1473. 3. 液相化学发光液相化学发光研究和应用的比较广泛的有：鲁米诺、光泽精、研究和应用的比较广泛的有：鲁米诺、光泽精、 没食子酸、洛粉碱、过氧草酸盐等。没食子酸

26、、洛粉碱、过氧草酸盐等。鲁米诺是最常用的发光试剂，它可以测定鲁米诺是最常用的发光试剂，它可以测定ClCl2 2、HClOHClO、ClOClO- -、H H2 2O O2 2、O O2 2和和NONO2 2，产生化学发光反应时量子效率为产生化学发光反应时量子效率为0.010.050.010.05鲁米诺（鲁米诺（3 3 氨基苯二甲酰环肼）在碱性溶液中和氨基苯二甲酰环肼）在碱性溶液中和H H2 2O O2 2等氧化剂反应生成最等氧化剂反应生成最大波长为大波长为425 nm425 nm的光辐射的光辐射 NHNHOONH22NHCOOCOO*OH-COOCOONH2+hv48NHNHOONH22NHC

27、OOCOO*OH-COOCOONH2+hv425 nm425 nm反应产生的化学能被产物氨基邻苯二甲酸根吸收，处于激发状态，返回基态时发射反应产生的化学能被产物氨基邻苯二甲酸根吸收，处于激发状态，返回基态时发射荧光荧光 可检测低至可检测低至1010-9-9 molL molL-1-1 的的H H2 2O O2 249四、生物发光体系四、生物发光体系生物发光是化学发光的一种特殊体系，如水母、细菌、真菌、蠕虫还有萤火虫生物发光是化学发光的一种特殊体系，如水母、细菌、真菌、蠕虫还有萤火虫等。等。虫荧光素虫荧光素+ATP+O+ATP+O2 2在虫荧光素酶的催化下产生氧虫荧光素在虫荧光素酶的催化下产生氧

28、虫荧光素+ADP+ADP+发光发光五、电化学发光五、电化学发光电解质溶液电解反应所产生的光发射称为电化学发光。电解质溶液电解反应所产生的光发射称为电化学发光。5051还原型谷胱甘肽还原型谷胱甘肽(GSH)(GSH)是一种具有重要生理功能的活性三肽，它由谷氨是一种具有重要生理功能的活性三肽，它由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸经肽键缩合而成，广泛存在于自然界的生物体内，酸、半胱氨酸和甘氨酸经肽键缩合而成，广泛存在于自然界的生物体内，具有保护血管、抗具有保护血管、抗HlVHlV、保护神经、抗惊厥及镇痛等作用。、保护神经、抗惊厥及镇痛等作用。敏度的检测方法的研究仍具有实际意义。本工作利用敏度的检测方法的研究

29、仍具有实际意义。本工作利用1 1，8 8一蒽二磺酰胺一蒽二磺酰胺对对Hg2+Hg2+离子的高效选择性，通过加入离子的高效选择性，通过加入GSHGSH与与Hg2+Hg2+络合从而使络合从而使1 1，8 8一蒽一蒽二磺酰胺荧光增强，据此测定二磺酰胺荧光增强，据此测定GSHGSH。521 1、实验部分、实验部分1 11 1仪器仪器荧光分光光度计，荧光分光光度计，Hitachi FHitachi F一一45004500型，日本日立公司；自动双重纯水型，日本日立公司；自动双重纯水蒸馏器，蒸馏器，SZ-93SZ-93型，上海亚荣生化仪器厂；酸度计，型，上海亚荣生化仪器厂；酸度计，pHpH孓孓2525型，上

30、海雷型，上海雷磁仪器厂。磁仪器厂。1 12 2 实验原理实验原理1 1，8 8一蒽二磺酰胺一蒽二磺酰胺( (以下简称磺酰胺，简写以下简称磺酰胺，简写ASA)ASA)具有较强的荧光，加入具有较强的荧光，加入HgHg2+2+离子后，离子后，HgHg2 2十十与磺酰胺络合使其荧光猝灭。当向与磺酰胺络合使其荧光猝灭。当向HgHg2+2+一一ASAASA体系中加体系中加入谷胱甘肽入谷胱甘肽(GSH)(GSH)时，时，GSHGSH中的巯基中的巯基( (一一SH)SH)与与HgHg2+2+络合，释放出与络合，释放出与H H矿矿+ +结结合的磺酰胺而使体系的荧光增强，据此达到测定合的磺酰胺而使体系的荧光增强，

31、据此达到测定GSHGSH含量的目的，原理含量的目的，原理见图见图1 1。53541 13 3实验方法实验方法1 13 31 1发射光谱的扫描发射光谱的扫描分别向三支分别向三支EPEP管中加入管中加入1 1585810-5 mol/L10-5 mol/L磺酰胺溶液磺酰胺溶液100100微升，然后向微升，然后向第二支第二支EPEP管中加入管中加入3 394941010-4-4 mol/L mol/L的的HgHg2+2+溶液溶液5 5微升，向第三支微升，向第三支EPEP管管中加入中加入3.94 x103.94 x10-4-4 molL molL-1-1的的HgHg2+2+溶液溶液5 5微升和一定量的

32、微升和一定量的GSHGSH溶液。分别溶液。分别用用pH6pH65 5的的NaNa2 2HP0HP04 4一一NaHNaH2 2P0P04 4缓冲液定容到缓冲液定容到1 mL1 mL，放置，放置5 min5 min后，在激发后，在激发波长为波长为250 nm250 nm，激发和发射狭缝宽均为，激发和发射狭缝宽均为5 5o nmo nm下，扫描发射光谱。下，扫描发射光谱。最佳激发波长：最佳激发波长：250nm250nm；最佳发射波长：；最佳发射波长：460nm460nm55 2 2结果与讨论结果与讨论2 21 1 缓冲溶液及其缓冲溶液及其pHpH的选择的选择在最佳激发波长下，考察了不同在最佳激发波长下，考察了不同pHpH值的值的NaNa2 2 HPO HPO4 4一一NaHNaH2 2 P0 P04 4、TrisHClTrisHCl等缓冲溶液对等缓冲溶液对ASAHgASAHg2+2+一一GSHGSH体系荧光强度的影响。结果表明：以体系荧光强度的影响。结果表明：以pH pH 6 65 5的的NaNa2 2 HPO HPO4 4 一一NaHNaH2 2 P0 P04 4缓冲溶液作介质，体系的荧光强度变化最明缓冲溶