森林培育学实验之二

1、实验二 花粉的生命力测定、实验目的：掌握用间接法测定花粉生命力的方法，了解其原理。、实验仪器及药品： 烧杯、载玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、标签、玻璃铅笔、显微镜、测微尺、培养皿、 蔗糖、琼脂、联苯胺、a-萘酚、碳酸钠、30%±氧化氢等三、实验材料： 油茶、茶叶、枇杷等树种以及各种花卉的新鲜花粉；杉木、马尾松等树种的贮藏花粉。四、实验说明：在使用经贮藏或外地来的花粉时， 为保证杂交工作的成功， 应预先进行花粉生命力的测定， 如花粉的生命力已丧失或只有极弱的生命力时（发芽率在5%），就不能用于杂交，否则必遭失败，花粉生命力的测定是杂交工作中的重要一环。测定花粉生命力的方法可分为直接法和间

2、接法二类， 前者是指把花粉直接受在同种植物 的雌蕊上，以后观察果实发育情况或通过解剖，检查花粉的发芽情况，以确定花粉生命力， 后者又有两种方法，即培养基法和染色法，本实验就是用染色法。五、实验步骤：（一）发芽法（培养基法） 把花粉播种在特定的培养基上， 置于适当的温湿条件下， 使之发芽， 以鉴定花粉生命力， 常用的培养基是由蔗糖、 琼脂和蒸馏水配制而成， 不同的树种花粉，对糖浓度要求不同，培 养基的pH值一般调整到6-5.2之初是，如果在培养基上加入少量的硼酸和维生素B1,更利于花粉发芽。1、固体培养基的配制在 100ml 蒸馏水中，加入 1-2g 琼脂，置烧杯中，隔水加热，煮开，使琼脂溶解（

3、加热过程中用培养皿盖在烧杯上， 以防水分蒸发丧失） ，然后加入 10-15%蔗糖，溶解后即为 10-15% 糖浓度的蔗糖琼脂培养基。趁热及滴管吸取培养基液 （或直接手玻棒） 滴 1-2 滴于载玻片的槽内， 冷却后即成固体 培养基。2、播种花粉用解剖针粘取少量花粉， 均匀地撒在培养基上， 也可用小棉花球粘取少量花粉， 用口轻 轻一吹，使花粉均匀播洒在培养基上，播种花粉量不能太多，以每一视野（10X 10）中的均匀分布 100-200 粒左右的花粉为宜， 播种成团的， 或数量过多的， 必须重做，否则发芽后难 以计数。3、培养以播好的载玻片置于或垫有湿润吸水纸的培养皿中，盖上培养皿以保湿，放在20-

4、25 C的恒温箱中培养 24 小时或更长时间（不同的花粉培养时间不一样，应隔不同的时间在显微 镜下连续检查花粉发芽情况， 直至花粉发芽粒数不再增加为止， 花粉发芽的标准是花粉管伸 长超过花粉直径为准）。1、观察在显微镜下， 随机取 5 个视野， 计数花粉总数及发芽的花粉数， 填入表 1，算出发芽率， 然后随机测定 10 个花粉管的长度，算出平均长度。（二）染色法（生物化学法） 染色法是借助于测定花粉的过氧化物酶的活性强弱来测定花粉生命力的方法，在活花粉内存在过氧化氢酶，它可以使H2O2放氧分解。其放出的活性氧使还原剂氧化。本实验用无色的联苯胺和a-萘酚作为还原剂， 它们被氧化后都表现出红色或玫

5、瑰红色，花粉中过氧化氢酶的活性大小同红色的深浅成相正关， 如果花粉是死的， 则这一反应不能进行， 花粉保持 原色。1、配制药液A、甲液的配制（1）取 0.2g 联苯胺溶于 100ml 50%的酒精中，盛于棕色瓶中，置黑暗处。（2）取0.115g a-萘酚溶于100m 150%的酒精中，盛于棕色瓶中，置黑暗处。（3）取 0.23g 碳酸钠溶于 100ml 水中，盛于白色瓶中。（4）以上三种溶液等量混合，配成“甲液”，盛于棕色瓶中，置黑暗处。B乙液的配制：将 30%过氧化氢临用前稀释至 0.3%即为乙液。2、制片取少量花粉放在悬滴载玻片的点槽马尾， 滴入一滴甲液， 置片刻后， 再滴一滴乙液， 3-4 分钟后观察。3、结果观察：在显微镜下观察， 凡变成红色或玫瑰红色者为有生命力花粉， 不变色者为无生命力花粉， 随机观察 5 个视野计数，有、无生命力的花粉数，填入表 2。算出有生命力花粉的百分率。六、作业：1 、汇总花粉生命力测定计算结果2、绘制花粉发芽形态图（注明放大倍数）。3、分析花粉发芽率高低的原因。4、比较两种测定方法的结果，分析其原因。附表：记载：树种 花粉采取日期 花粉采收方法 贮藏方法 测定日期 测定结果视野中花粉情况载玻片号树种培养基