病原生物学实验二ppt课件

1、病原生物学教研室病原生物学教研室sqjcbwm126病原生物学实验二病原生物学实验二细菌接种技术细菌接种技术 实验目的实验目的 1 1 掌握常用的细菌接种方法掌握常用的细菌接种方法 2 2 熟习细菌生长景象的察看方法熟习细菌生长景象的察看方法 一细菌的分别培育和接种技术接种工具接种工具接种针和接种环接种针和接种环L型涂布棒型涂布棒接种环境接种环境接种罩、超净任务台或无菌室内进展。接种罩、超净任务台或无菌室内进展。接种方法接种方法1. 平板划线接种法：平板划线接种法：目的：使混合的细菌呈单目的：使混合的细菌呈单个分散生长，构成单个个分散生长，构成单个菌落，以便获得纯菌。菌落，以便获得纯菌。方法：

2、方法：分区划线法：适用于含菌分区划线法：适用于含菌量较多的标本。量较多的标本。延续划线法：适用于含菌延续划线法：适用于含菌量较少的标本。量较少的标本。分区划线分区划线划线时接种环与平皿约成划线时接种环与平皿约成30-4030-40度角度角, ,悄然接触悄然接触, ,以腕力以腕力在琼脂外表轻快滑动在琼脂外表轻快滑动, ,不能划破琼脂不能划破琼脂. .第一次划线应占平皿面积的第一次划线应占平皿面积的1/10,1/10,以后每次划线约占面以后每次划线约占面积的积的1/41/5.1/41/5.划线为延续划线划线为延续划线, ,不能延续不能延续. .应占满平皿应占满平皿. .划线不能交叉划线不能交叉反复

3、反复. .每次划完后应灭菌每次划完后应灭菌. .2.斜面接种法：斜面接种法：用于菌种移种，以进一步鉴定用于菌种移种，以进一步鉴定 和保管菌种。和保管菌种。 3.半固体穿刺接种法：保管菌种或察看细菌的动力和生半固体穿刺接种法：保管菌种或察看细菌的动力和生化反响。化反响。4.液体接种法：用于肉汤、蛋白胨水、糖发酵管等液体液体接种法：用于肉汤、蛋白胨水、糖发酵管等液体培育基的接种。培育基的接种。四四种种接接种种方方法法将上述已接种细菌的培育基置将上述已接种细菌的培育基置3737恒温恒温培育箱中孵育培育箱中孵育181824h24h，察看细菌的生，察看细菌的生长景象。长景象。二细菌在培育基上的生长景象二

4、细菌在培育基上的生长景象1. 细菌在固体培育基中的生长景象细菌在固体培育基中的生长景象菌落菌落定义：指单个细菌在平板培育基上生长繁定义：指单个细菌在平板培育基上生长繁衍，构成单一肉眼可见的细菌集团。衍，构成单一肉眼可见的细菌集团。菌落特征：大小、外形、边缘、颜色、外菌落特征：大小、外形、边缘、颜色、外表、透明度、潮湿度、黏度、溶血性。表、透明度、潮湿度、黏度、溶血性。菌苔：指多个菌落交融在一同构成的细菌菌苔：指多个菌落交融在一同构成的细菌堆积物。堆积物。菌落与菌苔菌落与菌苔菌落菌落菌苔菌苔2. 细菌在液体培育基中的生长景象细菌在液体培育基中的生长景象浑浊：大多数细菌，如浑浊：大多数细菌，如E.

5、c.沉淀：多见于链状陈列的细菌。沉淀：多见于链状陈列的细菌。菌膜：专性需氧菌如结核分枝杆菌、枯草杆菌膜：专性需氧菌如结核分枝杆菌、枯草杆菌菌 。细菌在液体培育基中的生长景象细菌在液体培育基中的生长景象菌膜菌膜菌沉淀菌沉淀均匀浑浊均匀浑浊对照对照3. 细菌在半固体培育基中的生长景象细菌在半固体培育基中的生长景象有鞭毛细菌：有鞭毛细菌：在培育基中沿穿刺线并向外分散生长，穿刺在培育基中沿穿刺线并向外分散生长，穿刺线边缘模糊。线边缘模糊。无鞭毛细菌：无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边缘明晰。只沿穿刺线生长，穿刺线边缘明晰。细菌在半固体培育基中的生长景象细菌在半固体培育基中的生长景象有动力有动力 景象

6、景象无动力无动力 景象景象 肠道致病菌的分别培育(1) 一.肠道杆菌的生物学性状 二.S-S培育基的特性及用途 三.分别培育方法 主要内容一肠道杆菌的生物学性状 埃希菌属：大肠埃希菌沙门菌属：伤寒沙门菌 甲型、乙型、丙型副伤寒志贺菌属：痢疾志贺菌肠杆菌科的重要菌属及代表菌种1.类似的形状染色从形状上无法区别乳糖发酵实验 肠道致病菌 肠道非致病菌 多数不发酵乳糖 多数发酵乳糖 2.活泼的生化反响初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌 +/- - +伤寒杆菌 - - +痢疾杆菌 - 大肠杆菌 硫化氢 乳糖 葡萄糖 菌名 三种细菌的生化反响 成成 分分含量（含量（g/Lg/L）作作 用用牛肉膏牛肉膏5 5

7、营养成分营养成分乳糖乳糖1010营养成分，发酵营养成分，发酵蛋白胨蛋白胨5 5营养成分营养成分胆酸钠、胆酸胆酸钠、胆酸- -脱氧胆脱氧胆酸钠盐混合物（三号酸钠盐混合物（三号）3.53.5抑制抑制G+G+、大部分大肠菌群和变形、大部分大肠菌群和变形杆菌杆菌柠檬酸钠柠檬酸钠8.58.5抑制抑制G+G+、大部分大肠菌群和变形、大部分大肠菌群和变形0.1%0.1%煌绿溶液煌绿溶液0.33ml0.33ml抑制抑制G G+ +、大部分大肠菌群和变形、大部分大肠菌群和变形硫代硫酸钠硫代硫酸钠8.58.5检测硫化氢的产生检测硫化氢的产生10%10%柠檬酸铁溶液柠檬酸铁溶液10ml10ml检测硫化氢的产生检测硫

8、化氢的产生1%1%中性红溶液中性红溶液2.5ml2.5ml指示剂指示剂琼脂琼脂1717凝固剂凝固剂二SS培育基 Salmonella Shigella Agar 胆盐抑制胆盐抑制G+,G+,枸橼酸钠和煌枸橼酸钠和煌绿能部分抑制大肠杆菌绿能部分抑制大肠杆菌, ,致致病的沙门菌和志贺菌能大病的沙门菌和志贺菌能大量生长。量生长。中性红指示剂和乳糖中性红指示剂和乳糖, ,中性中性红遇酸变粉红。红遇酸变粉红。常用于肠道致病菌的分别常用于肠道致病菌的分别培育。培育。 二SS培育基细细 菌菌SS平板平板大肠杆菌大肠杆菌粉红色粉红色大菌落大菌落痢疾杆菌痢疾杆菌无色细小，半透明菌落无色细小，半透明菌落伤寒杆菌伤

9、寒杆菌无色细小无色细小 半透明菌落半透明菌落 ( (中间有黑色沉淀）中间有黑色沉淀）SS培育基中菌落特点 将粪便标本以平板分区划线法接种到SS培 养基。 (每个实验室8个SS平板，每组做好标志，班长用胶布按班级绑好) 放入37温箱中培育24h；取出放4冰箱中保管备用。 三粪便标本的分别培育v1.空气中细菌的检查每个班空气中细菌的检查每个班2个平皿个平皿 v v 原理：根据空气中携带有微生物气原理：根据空气中携带有微生物气溶胶以固体或液体微小颗粒分散于空溶胶以固体或液体微小颗粒分散于空气中的分散体系称为气溶胶，其中的气气中的分散体系称为气溶胶，其中的气体是分散介质粒子在地心引力的作用体是分散介质

10、粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培育下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培育基上。基上。v v 方法：在室内选择一处放一个平皿。方法：在室内选择一处放一个平皿。揭开皿盖，皿盖扣置于皿底下，暴露放揭开皿盖，皿盖扣置于皿底下，暴露放置置15min，即盖上皿盖，放入，即盖上皿盖，放入37 培培育育24小时，察看结果。小时，察看结果。细菌在自然界的分布细菌在自然界的分布2.2.紫外线对细菌的影响紫外线对细菌的影响每个实验室每个实验室2 2个培育皿个培育皿取一个平皿，用密涂法将细菌涂布于培育皿中，翻开一半平皿盖，置于紫外灯下照射30分钟，然后盖好平皿，置37培育24h后取出察看结果。 分三次

11、接种，每次取一环。第一次密涂接种后旋转60度二次密涂接种，然后同方向旋转60度后再次密涂接种。 3. 咽喉部细菌的检查每班咽喉部细菌的检查每班4个平皿个平皿 取血琼脂平板取血琼脂平板1块，翻开平皿盖，将培育基面置于口腔块，翻开平皿盖，将培育基面置于口腔前前10cm处，受试者用力咳嗽几次；处，受试者用力咳嗽几次；盖上平皿盖，置盖上平皿盖，置37温箱中倒置培育温箱中倒置培育24h后取出察看结后取出察看结果。果。4.化学消毒剂对细菌的影响化学消毒剂对细菌的影响方法：取一普通平皿培育基，方法：取一普通平皿培育基，一部分写上一部分写上“前，另一部分前，另一部分写上写上“后，然后将手指在写后，然后将手指在写有有“前的部分沾一下，再将前的部分沾一下，再将手指用酒精进展消毒，在写手指用酒精进展消毒，在写有有“后的部分沾一下。放入后的部分沾一下。放入3737温箱培育温箱培育2424小时后察看。小时后察看。 每个实验室每个实