26实验十三综合大环境水样微生物检测

1、微生物学实验开放实验微生物学实验开放实验环境水样微生物检测环境水样微生物检测参照标准：参照标准： 总大肠菌群、耐热大肠菌群计数分别参总大肠菌群、耐热大肠菌群计数分别参照照生活饮用水标准检验方法微生物指标生活饮用水标准检验方法微生物指标多管发酵法多管发酵法p5页页2.1.5和和2.1.6；p14页页3.1.5和和3.1.6 。环境水样品中大肠杆菌及粪大肠杆环境水样品中大肠杆菌及粪大肠杆菌的检测（菌的检测（p204214p204214）1、培养基配制及器具准备、培养基配制及器具准备 所用乳糖蛋白胨、所用乳糖蛋白胨、EC肉汤培养基和伊红美蓝培养基有预肉汤培养基和伊红美蓝培养基有预混成品，依据产品说明

2、直接配制即可，不需要单独称量混成品，依据产品说明直接配制即可，不需要单独称量各种组分；各种组分； 乳糖蛋白胨：乳糖蛋白胨：10 ml+小倒管，每组分别配小倒管，每组分别配20支；支； EC肉汤培养基：肉汤培养基：10 ml+小倒管，每组分别配小倒管，每组分别配10支；支； 伊红美蓝培养基（固体）：每组伊红美蓝培养基（固体）：每组1瓶（瓶（150 mL）；）； 4.5 mL无菌水：无菌水：46支支/组组 无菌无菌1 mL移液管：移液管：34支支/组；组； 40200 微升移液器、吸气器：各微升移液器、吸气器：各1支支/组；组； 200微升无菌微升无菌Tip：15只只/组；组； 革兰氏染色试剂：革

3、兰氏染色试剂：58套套/班；班； 载玻片若干。载玻片若干。1、培养基配制及器具准备、培养基配制及器具准备完成时间：完成时间：14周（周（12月月610日），上课时间日），上课时间或另外预约时间（以班级为单位）。或另外预约时间（以班级为单位）。开放实验开放实验2 2：总体安排：总体安排班级班级时间时间说明说明生基生基19日日可合班可合班生基生基26日日可合班可合班病毒班病毒班7日日单独单独弘毅弘毅8日日可合班可合班国际国际10日日可合班可合班2、采样、采样按班提前准备。按班提前准备。 3、基本流程：、基本流程：1）稀释获得）稀释获得10-1 、10-2和和10-3样品；样品；2）从）从10-1

4、、10-2和和10-3各取各取1 mL到乳糖蛋白胨培到乳糖蛋白胨培养基中（每个稀释度样品各养基中（每个稀释度样品各5支试管）；支试管）；3）37 C培养培养24 h；4）记录产酸产气阳性样品，从阳性管中取）记录产酸产气阳性样品，从阳性管中取1滴转滴转接于接于EC培养基中；培养基中；5） 45 C培养培养24 h；6）记录产酸产气阳性样品；）记录产酸产气阳性样品；3、基本流程：、基本流程：7）从）从37 C和和45 C培养所有阳性管中接种划线于培养所有阳性管中接种划线于伊红美兰平板；伊红美兰平板；8）挑选菌落：）挑选菌落： 深紫色、具金属光泽深紫色、具金属光泽 紫黑色、不带或略带金属光泽紫黑色、

5、不带或略带金属光泽 淡紫红色中心颜色较深淡紫红色中心颜色较深9）革兰氏阴性无芽胞的为大肠菌群阳性；）革兰氏阴性无芽胞的为大肠菌群阳性；10）查）查MPN表，报出最终数据。表，报出最终数据。第一天：第一天：稀释、接种、37C培养过夜；第二天：第二天：从37C培养过夜阳性管中接种于EC培养基中，45C培养过夜；第三天：第三天：从37C和45C 培养过夜阳性管中划线接种于伊红美兰平板，培养过夜；第四天：第四天：镜检验证、统计、给出数据。第一天第一天第二天第二天第三天第三天第四天第四天MPN表的使用表的使用设：设： 原液、原液、 10-1和和10-2样品中阳性管数样品中阳性管数分为分为5、4、3；查表

6、查表： 结果为结果为280 MPN/100 mL。计算结果计算结果： 280*10*10= 28000 MPN/L水质分类水质分类（依据耐热大肠菌数量（依据耐热大肠菌数量 MPN/L）：）：I 200II 2000III 10000IV 20000V 40000劣劣V 40000各班预约完成实验实验各班预约完成实验实验时时 间间班班 级级镜检观察时间镜检观察时间第一组第一组12月月1214日日11:3013:30病毒班病毒班15日下午日下午/第二组第二组12月月1214日日16:0018:00国际班国际班生基生基216日下午日下午/16日日上午上午第三组第三组12月月1517日日11:3013:30/第四组第四组12月月1517日日16:0018:00弘毅班弘毅班生基生基120日上午日上午/19日日上午上午8：00注：每组注：每组12个班。个班。论文格式要求论文格式要求: : 题目题目 作者：作者：排序排序 单位单位：班级、组号班级、