中药穴位敷贴疗法对哮喘大鼠炎症反应的影响(一)

1、中药穴位敷贴疗法对哮喘大鼠炎症反应的影响(一)【摘要】【目的】观察穴位敷贴疗法对哮喘大鼠炎症反应的影响。【方法】选用 Wistar 大鼠 33 只随机分为正常组、模型组、地塞米松组及穴位贴药组；模型组以卵蛋白致敏并诱发哮喘模型， 腹腔注射生理盐水，同时背部给予空白对照药物敷贴；地塞米松组在哮喘大鼠雾化后予以腹腔注射 1mg/kg 地塞米松，同时在背部备皮予以空白对照药物敷贴；穴位贴药组在哮喘大鼠雾化后予以腹腔注射1mg/kg 的生理盐水，同时在背部备皮予以治疗药物敷贴，穴位取大椎、肺俞、脾俞、肾俞穴。疗程结束24h 内取各组大鼠肺组织观察其炎症情况，并取外周血采用酶联免疫吸附（ ELISA）法

2、比较各组大鼠白细胞介素 4（）、干扰素（）的含量。【结果】模型组大鼠与正常组比较，肺组织中可见嗜酸性粒细胞（ EOS）、淋巴细胞及巨噬细胞浸润增加（P0.01）。地塞米松组与模型组比较嗜酸性粒细胞、淋巴细胞及巨噬细胞浸润显著降低（P0.05 或 P 0.01）。穴位贴药组对嗜酸性粒细胞浸润也有显著抑制作用（P0.01），但对于淋巴细胞及巨噬细胞浸润无显著抑制作用（P0.05）。模型组大鼠外周血 含量较正常组显著增加（P0.01），而 含量较正常组显著降低（ P0.01），地塞米松组及穴位贴药组中大鼠外周血 含量较模型组降低（ P0.01），但地塞米松组大鼠外周血 含量与模型组比较无显著性差异（

3、 P0.05），而穴位贴药组大鼠外周血 含量显著高于模型组（ P0.01），与正常组比较无显著性差异（ P0.05）。【结论】中药穴位敷贴治疗哮喘的作用可能与其能抑制肺组织嗜酸性粒细胞浸润，降低外周血含量，升高含量有关。【关键词】哮喘 / 穴位疗法；肺组织 / 病理学；疾病模型，动物；穴，大椎；穴，肺俞；穴，脾俞；穴，肾俞中药穴位敷贴疗法是中医外治法中一种常用的治疗方法，它是通过药物刺激人体局部穴位并借助药物的药力和热力而达到温通经络、行气化痰、散寒除湿的作用。临床上多用于治疗支气管哮喘、慢性支气管炎等慢性呼吸系统疾病 1。本研究观察了穴位敷贴疗法对支气管哮喘模型大鼠外周血白细胞介素4（4）、

4、干扰素（）含量以及肺组织中嗜酸性粒细胞（EOS）、淋巴细胞及巨噬细胞浸润的影响，现报道如下。1 材料与方法1.1 动物 SPF级 Wistar 大鼠，雄性，共33 只，体质量 200250g，由广州中医药大学实验动物中心提供，合格证号：0016837。1.2 试剂及仪器卵蛋白 (OVA)购于美国 Sigma公司；地塞米松购于郑州卓峰制药厂（批号： 0604213）；穴位贴药制剂（批号：20060815）及空白对照药物制剂（批号：20060829）均由广东省中医药研究所制备并提供；酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒由深圳海辉试剂公司提供；超声雾化器为汕头市粤华医疗器械厂产品；型显微镜为日本OLYM

5、PUS产品； 800 型酶标仪为美国宝特公司产品。1.3 哮喘模型复制2 造模大鼠于第 1 天及第7 天腹腔注射100g/LOVA1mL致敏，2 周后将大鼠放入雾化箱中， 用 20g/L 卵蛋白 25mL，在最大雾化程度和最大风速的条件下雾化40min，每天 1 次，连续雾化2 周，在雾化期间及结束后观察大鼠反应，以出现烦躁不安， 呼吸频率加快，节律性点头运动为阳性反应，提示造模成功。1.4 药物制备治疗药物：取胡椒、白芥子、细辛、白芷、半枫荷各等份磨至 100 目细粉后混合。取生姜 10kg，温度 50，压力 14.4mPa，超临界 CO2 萃取，时间 2h，得姜油约 90mL，备用。另取

6、7kg 生姜，榨汁，得生姜汁， 加热煮沸 10min，冷却后冰箱保存备用。取药粉加入适量姜油混合，并加蒸馏水调节至合适的软硬度，分装玻璃瓶中，经灭菌、检查、贴签 ,成品呈棕黄色，于低温 (4 10)状态下保存。用时以特定容器压成直径 1.2cm、厚 0.25cm 的圆柱形小药饼，蘸姜汁用无菌敷料固定在穴位上。 空白对照药物： 取红米、黑米、玉米干炒处理，分别粉碎成 100 目细粉后混合 ,拌入姜油 (取生姜 3kg，制备方法同上 )，加蒸馏水调节至合适的软硬度 ,分装玻璃瓶中 ,经灭菌、检查、贴签，成品呈棕黄色。保存及用法同治疗药物。1.5 实验分组将实验大鼠随机分为4 组：正常组用生理盐水代

7、替OVA致敏与诱发；模型组造模雾化后腹腔注射生理盐水，同时背部给予空白对照药物敷贴；地塞米松组造模 2 周后开始腹腔注射1mg/kg 地塞米松，同时在背部备皮予以空白对照药物敷贴；穴位贴药组造模2 周后开始腹腔注射 1mg/kg 的生理盐水， 同时在背部备皮予以治疗药物敷贴。贴药的部位位于大鼠下颈项部至上背部处(相当于人体的大椎、肺俞、脾俞、肾俞穴，取穴方法按照实验针灸学 3)，保留 4h 后除去，每日 1 次， 7 次为 1 疗程，治疗结束后 24h 内取材。1.6 取材及检测方法大鼠乙醚麻醉后取血清，采用双抗体夹心（）法测定，按试剂盒说明操作。然后打开胸腔，取双侧肺组织置于体积分数 10%

8、的甲醛溶液中固定，石蜡包埋， 3m纵向常规病理切片，每个标本切 45 片，常规苏木素 -伊红（ HE）染色，分析结果。1.7 统计学方法采用SPSS11.0统计软件包进行统计分析。2 结果2.1 各组大鼠肺组织中嗜酸性粒细胞、淋巴细胞及巨噬细胞浸润程度比较模型组大鼠肺组织中嗜酸性粒细胞、淋巴细胞及巨噬细胞浸润较正常组显著性增加 （P0.01）；地塞米松组的嗜酸性粒细胞、淋巴细胞及巨噬细胞浸润与模型组比较差异具有显著性意义（P0.05 或 P0.01）；穴位贴药组对嗜酸性粒细胞浸润有显著抑制作用（P0.01），但对于淋巴细胞及巨噬细胞浸润无显著作用（P0.05）。结果见表 1、图 1。2.2 各组大鼠外周血、含量变化比较模型组大鼠血清含量较正常组显著增加（P0.01），而含量较正常组显著降低（P0.01）；地塞米松组及穴位贴药组大鼠血清含量较模型组显著降低（P0.01）；穴位贴药组大鼠血清含量较模型组显著