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1、一代测序与二代测序的区别与联系Sanger法测序（一代测序）Sanger 法测序利用一种DNA 聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)， 并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH 基团，使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、 A、 T 或 C 处终止。终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dNTPs 和 ddNTPs 的相对浓度可以调整，使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。它们具有共同的起始点，但终止在不同的的核苷酸上，可

2、通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处理后可用X-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。高通量测序（二代测序）高通量测序技术 （ High-throughput sequencing ，HTS）是对传统Sanger 测序（称为一代测序技术）革命性的改变, 一次对几十万到几百万条核酸分子进行序列测定, 因此在有些文献中称其为下一代测序技术(next generation sequencing ，NGS )足见其划时代的改变, 同时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能, 所以又被称为深度测序 (Deep sequencing)。第一代和第二代测序技术大约

3、第平台测序方检测读长X 公司优点相对局限性名称法方法(碱基代数 )ABI/桑格 -第3130生命毛细管一xL-37技术电泳测代30xL公司序法荧光/ 光学高读长，准确度一通量低；样品制备600-1次性达标率高， 能成本高，使之难以000很好处理重复序做大量的平行测列和多聚序列序GeXP桑格 -第贝克遗传毛细管荧光 /一曼分析电泳测光学代系统序法基因第组测罗氏焦磷酸二序仪光学/454FLX测序法代系统第HiSeq可逆链2000荧光 /以鲁终止物二/miS米那和合成光学代eq测序法高读长，准确度一次性达标率高， 能通量低；单个样品600-1很好处理重复序的制备成本相对000列和多聚序列； 易较高小型化样品制备较难；难在第二代中最高于处理重复和同230-4读长；比第一代的种碱基多聚区域；00测序通量大试剂冲洗带来错误累积；仪器昂贵仪器昂贵；用于数2x15很高测序通量据删节和分析的0费用很高很高测序通量； 在5500测序运行时间长；广为接受的几种第荧光 /读长短，造成成本ABI/SxlSOL连接测25-35第二代平台中， 所二高，数据分析困难OLiDiD 系序法光学要拼接出人类基代和基因组拼接困统因组的试剂成本难；仪器昂贵最低读长短，推高了测第Helis单分子荧光 /高通量；在第二代赫利25-30序成本，降低了基二cope合成测中属于单分子性

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