第9章 目的基因的获取

1、 目前被较广泛提取使用的目的基因有：苏云目前被较广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌金杆菌抗虫基因抗虫基因、人、人胰岛素基因胰岛素基因、人、人干扰素基干扰素基因因、种子、种子贮藏蛋白基因贮藏蛋白基因、植物、植物抗病基因抗病基因等。等。目的基因：目的基因：人们所需要研究的基因。人们所需要研究的基因。目的基因 1 1、概念、概念：PCRPCR全称为全称为_，是一项，是一项 在生物在生物_复制复制_的核酸合成技术的核酸合成技术 聚合酶链式反应聚合酶链式反应体外体外特定特定DNADNA片段片段2 2、原理：、原理：DNADNA复制复制1、利用PCR技术扩增目的基因DNADNA扩增扩增仪仪四种脱氧核苷酸

2、四种脱氧核苷酸 一对引物一对引物：耐热的耐热的DNADNA聚合酶聚合酶(Taq(Taq酶）酶）模板模板DNA( DNA( 需含有目的基因需含有目的基因 ) ) 3 3、条件：、条件：一对一对寡寡核苷酸序列：核苷酸序列：与目的基与目的基因的起始段互补因的起始段互补。一段已知目的基因的核苷酸序列，以便一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物根据这一序列合成引物4 4、前提：、前提：能量能量 5 5、过程、过程高温变性高温变性（解旋为单链解旋为单链）低温退火低温退火（引物与单链互补结合引物与单链互补结合）适温延伸适温延伸（在在TaqTaq酶的作用下合成酶的作用下合成 与模板互补的与模板

3、互补的DNADNA双链双链）重复循环重复循环预变性（预变性（增加增加DNADNA变性的概率变性的概率）引物引物脱氧脱氧核苷核苷酸酸5 5、具体过程、具体过程 概念：概念：PCRPCR全称为全称为_，是一项，是一项 在生物在生物_复制复制_的核酸合成技术的核酸合成技术 条件：条件：_、 、 _、_ _ 、 _._.等等原理：原理：_方式：以方式：以_方式扩增，即方式扩增，即_（n n为扩增为扩增循循 环的次数）环的次数）结果：结果：聚合酶链式反应聚合酶链式反应体外体外特定特定DNADNA片段片段DNADNA复制复制四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸一对引物一对引物DNADNA聚合酶聚合酶指数指数2 2

4、n n使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增模板模板DNADNA（含目的基因）（含目的基因）ATPATP过程：过程：a a、DNADNA变性变性（90-9590-95）：双链）：双链DNADNA模板模板 在热作用下，在热作用下，_断裂，形成断裂，形成_b b、退火、退火（复性复性55-6555-65）：系统温度降低，引）：系统温度降低，引 物与物与DNADNA模板结合，形成局部模板结合，形成局部_。 c c、延伸、延伸（70-7570-75）：在）：在TaqTaq酶的作用下，酶的作用下，合成与模板互补的合成与模板互补的_。 氢键氢键单链单链DNADNA

5、双链双链DNADNA链链PCRPCR技术扩增与技术扩增与DNADNA复制的比较复制的比较碱基互补配对碱基互补配对四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸模板、能量、酶模板、能量、酶DNADNA在高温下在高温下变性解旋变性解旋解旋酶催化解旋酶催化体外复制体外复制细胞内细胞内热稳定的热稳定的DNADNA聚合酶聚合酶 细胞内的细胞内的DNADNA聚合酶聚合酶大量的大量的DNADNA片段片段形成整个形成整个DNADNA分子分子基因文库的构建及目的基因的筛选基因文库的构建及目的基因的筛选基因组文库的构建基因组文库的构建基因组文库的构建基因组文库的构建基因组文库的构建基因组文库的构建（6）从）从cDNA文库中筛选目的基因文库中筛选目的基因未知序列目的基因的筛选未知序列目的基因的筛选未知序列目的