总抗氧化能力测定(FRAP法)

1、精选小麦叶片总抗氧化能力测定（FRAP法）一、实验原理FRAP 法测 定总 抗氧化能 力的 原理是酸 性条件下抗氧化物可以还原 Ferric-tri-pyridyl-tria-zine（Fg+-TPTZ）产生蓝色的 FeT-TPTZ，随后在 593nm测定蓝 色的 Fe2+-TPTZ 即可获得样品中的总抗氧化能力。由于反应在酸性条件下进行， 可以抑制内源性的一些干扰因素。 并且由于血浆等样品中的铁离子或亚铁离子的 总浓度通常低于10卩M,因此血浆等样品中的铁离子或亚铁离子不会显著干扰 FRAP 法的检测反应。由于反应体系中的铁离子或亚铁离子是和 TPTZ 螯合的， 样品本身含有的少量金属离子螯

2、合剂通常也不会显著影响检测反应。AntioxidantFe3+-TPTZ （橘黄色）> Fe2+-TPTZ （蓝色）二、实验步骤1. FRAP 工作液配制：0.3 M pH 3.6醋酸缓冲液：0.364g无水醋酸钠+3.2mL冰乙酸定容至200mL, 用1M HCl调节pH至3.6;10mmol/L TPTZ 溶液 25mL: 0.078g TPTZ用 40mM 盐酸溶液定容至 25mL;20mmol/L FeCb溶液 50mL: 2.78g用 RO 水定容至 50mL;上述溶液以 10:1:1的比例混合（现配现用）。2. 取叶片0.1g,加入2.5mL蒸馏水研磨稍沉淀后取 1.5mL

3、12000g离心10min（4oC）,取上清液。3. 在反应管中加入100uL上清液，再加入2.4mL工作液，37 oC条件下水浴10min, 于593nm处测定吸光度，精选4. 标准曲线绘制：以0.1-1.6mmol/L的FeSQ的标准液替代样品绘制标准曲线。三、结果计算以1.0mmol/L的FeSQ为标准，样品抗氧化活性以达到同样吸光度值为一个FRAP 值，计算结果。精选Briefly, the FRAP reagent contained 2.5 mL 10 mM L1 TPTZ solution in 40 mM L1 HCI plus 2.5 mL 20 mM L1 FeCI and

4、 25 mL 0+3 M L1 acetate buffer, pH 3.6 was prepared freshly and warmed at 37°C After addition of root ethanol extracts (prepared as in section 2.7) and incubation at 37°Cfor 5 minT absorba nee of the react io n mixture was measured at 593 nm. The final result was expressed as the co nee nt

5、rati on of antioxida nts havi ng a ferric reducing ability equivalent to that of 1 mM L_1 FeSO4 based on the standard curve for FeSO4 x 7H.0 at a concentration range between 100 and 1000 |jM L_1 3 口1 Benzie I F F, Strain J J. The Ferric Reducing Ability of Plasma (FRAP) as a Measure of“ APower ” : The FRAP AssayJ. Analytical Biochemistry, 1996, 239(1):706.2 Katarzyna Szafra n sRafa? Szewczyk, Krystyna Maria Janas.lnvolvement of melatonin applied toVig na radiata, L. seeds in pla nt resp onse to chilli ng stressJ. Cen