生物学基础实验技能讲义

1、WORD格式生物学根底实验技能专业资料整理WORD格式实验讲义王玉倩冯晓英郭娟X潮汤晓辛唐婧编*师X大学生命科学学院2021年6月专业资料整理WORD格式目录一、显微操作2实验一显微镜的使用方法与绘图2实验二简单临时装片的制作与观察，油镜的使用6实验三压片的制作，涂片的制作8实验四生物材料的解剖构造观察10二、溶液配制11实验五玻璃器皿的洗涤11实验六、溶液的配制13实验七、溶液的配制15实验八溶液 pH 值的调节18三、分光光度计的使用20实验九分光光度法的介绍及分光光度计的使用方法20实验十混合物中 CuSO4 的测定24实验十一分光光度法测定叶绿素的含量26四、无菌操作28实验十二无菌操

2、作技术28专业资料整理WORD格式- 1 -专业资料整理WORD格式一、显微操作实验一显微镜的使用方法与绘图一、实验目的1、掌握显微镜的构造及原理，熟练使用光学显微镜。2、了解显微镜使用的根本要求、本卷须知及一般维护方法。3、学习生物绘图的根本要求及方法。二、实验原理显微镜的原理是经过两次成像，成为倒立的虚像。第一次先经过物镜成像，在物镜的一倍焦距和两倍焦距之间成放大的倒立的实像。 第一次成的物像， 经过目镜的第二次成像， 是一个虚像。倒置的像常常使初学者使用发生困难。1、 显微镜的构造机械局部(1) 镜座显微镜 最下面呈马蹄形或园形的局部，起稳定和支持镜身作用。(2) 镜柱从镜座向上直立的短

3、柱。上连镜臂，下连镜座，可以支持镜臂和载物台。(3) 镜臂弯曲成马蹄形的局部，便于手持，下端与镜柱相连接的地方有一个倾斜关节，可使镜臂倾斜，便于观察。(4) 载物台自镜臂下端向前伸出，放置标本用的平台，其中央有一个园孔，叫通光孔。台上有一移动器老式的左右各有一个压片夹，用以固定和移动标本。(5) 镜筒和镜臂上方连接的园筒局部。 有的显微镜镜筒内有一抽管， 可适当抽长， 一般长度是 160 170 毫米。镜筒上端装有目镜，下端有一个可转动的园盘，叫物镜转换器或叫物镜旋转盘，固着在镜筒下端，分两层，上层固着不动，下层可自由转动。转换器上有 2 4 个圆孔，用来安装不同倍数的低倍或高倍物镜 。作用是

4、保护成像的光路与亮度。(6) 调节器也叫调节螺旋为镜壁上两种可转动的螺旋，一大一小，能使镜筒上下移动，调节焦距。大的叫粗准焦螺旋，位于镜臂的上方，可以转动，以使镜筒能上下移动，从而调节焦距，升降镜筒较快，用于低倍镜对焦；小的叫细准焦螺旋，位于镜臂的下方， 它的移动X围较粗准焦螺旋小，升降镜筒较慢，可以细调焦距。(7) 倾斜关节镜柱和镜臂交界处有一个能活动的关节。它可以使显微镜在一定的X围内后倾一般倾斜不得超过 45°便于观察。但是在使用临时封片观察时，制止使用倾斜关节，尤其是装片内含酸性试剂时严禁使用，以免污损镜体。(8) 载物台从镜臂向前方伸出的金属平台。呈方形或圆形，是放置玻片标

5、本的地方。其中央具有通光孔， 在通光孔的左右有一个弹性的金属压片夹，用来压住载玻片。较高级的显微镜，在载物台上常具有推进器，它包括夹片夹和推进螺旋，除夹住切片外， 还可使切片在载物台上移专业资料整理WORD格式2专业资料整理WORD格式动。光学局部(1) 目镜装于镜筒上方， 由两组透镜构成，目镜的作用是把物镜所形成的倒立实像再放大成为一个虚像。目镜上刻有×， ×， ×， ×， ×等符号，表示放大倍数。我们所观察到的标本的物像，其放大倍数是物镜和目镜放大倍数的乘积。如物镜是×，目镜是 ×，其物像的放大倍数是 ×倍。在

6、目镜内两个透镜间的光栏上可装一根剪短的毛发，做为指针，用以指示要观察的材料。(2) 物镜装在镜筒下端物镜转换器的孔中，一般的显微镜有个物镜镜头，每个镜头都是由一系列的复式透镜组成的，其上也有放大倍数记号，有×， ×， ×及 ×。 ×及 ×物镜是低倍镜，×是高倍镜，×是油镜。低倍镜常用于搜索观察对象及观察标本全貌， 高倍镜那么用于观察标本某局部或较细微的构造，油镜那么常用于观察微生物或动植物更细微的构造。(3) 聚光器集光器位于载物台通光孔下方，由两块或数块镜组成，它能将反光镜反射来的光线集中以射入物镜和目镜，有的聚

7、光器可升降，便于调光，集光器下有一可伸缩的园形光圈，叫虹彩光圈， 可调集光器口径的大小和照射面， 以调节光线强弱 有的显微镜只有遮光极而无集光器。光线过强时，可缩小虹彩光圈。(4) 反光镜是 显微镜 观察时获得光源的装置， 位于显微镜镜座中央， 一面为平面镜， 一面为凹面镜。转动反光镜，可使外面光线通过集光器照射到标本上。使用时，光线强用平面镜，光线弱用凹面镜。2、显微镜使用1放置放在左胸前，离桌边5cm 的位置 .（ 2对光将低倍镜转至镜筒下方与镜筒成一直线。拨动反光镜，调节至视野最亮无阴影。反光镜有平、凹两面，光源强时用平面，较暗时用凹面，需要强光时，将聚光器提高，光圈放大；需要弱光时，将

8、聚光器降低，或光圈适当缩小。（ 3低倍镜使用升高镜筒， 把玻片标本放在载物台中央， 使材料正对通光孔的中心， 然后用压片夹压住载玻片的两端。转动粗调节器使镜筒下降至物镜距制片 0.5cm。于转动粗调节器的同时，须俯身在镜旁仔细观察物镜与标本之间的距离。 注意不可在调焦点时边观察边下必镜筒，否那么会使物镜和玻片触碰，压碎破片，损坏物镜 。左眼于目镜观察， 同时左手转动粗调节， 使镜筒徐徐上升以调节焦距， 使视野内的物象看到上时即停，再调微调节器，至标本清晰为止。如一次调节看不到物像， 应重新检查材料是否在光轴线上， 重新移正材料， 再重复上述操作过程直至物像出现和清晰为止。找到物像后还可根据材料

9、的厚薄、颜色、成像的反差强弱等是否适宜再进展调节，如果太亮，可降低聚光器或缩小虹彩光圈，反之那么升高聚光器或开大光圈。专业资料整理WORD格式3专业资料整理WORD格式(1) 高倍镜使用在低倍镜下找到要观察的目标，移到视野中央，换高倍镜，转动细调节螺旋使影像清晰。如果高倍物镜离盖玻片较远看不到物像时，那么需重新调整焦点； 此时眼睛应从侧面注视物镜，并小心地转动粗调焦螺旋使镜筒慢慢地下必到高倍镜头几乎要与切片接触时为止注意切勿使镜头紧压玻片， 以锡损坏镜头和压碎玻片标本 。然后再由目镜向下观察， 同时向内，向右转动粗调焦螺旋， 稍微升高镜筒至看见物像后， 换细调焦螺旋， 使物像看得更加清晰为止。

10、(2) 收镜经聚光器降下，再将物镜转成" 八 "字形，转动粗调节器使镜筒下降，以免物镜与聚光器相碰。应将镜头转为低倍镜，再水平取下切片，取下时要注意勿使切片触及镜头。切片取下后，再转动物镜转换器，使物镜镜头与通光孔错开。下降镜筒，使两个物镜位于载物台上通光孔的两侧，并将反光镜复原成与桌面垂直。将显微镜放回原处，并盖上防尘罩。(3) 维护显微镜在从木箱中取出或装箱时，右手紧握镜臂，左手稳托镜座，轻轻取出。不要只用一只手提取，以防显微镜坠落，然后轻轻放在实习台上或装入木箱内。显微镜放到实习台上时，先放镜座的一端，再将镜座全部放稳，切不可使镜座全面同时与台面接触，这样震动过大，透

11、镜和微调节器的装置易损坏。显微镜须经常保持清洁，勿使油污和灰尘附着。如透镜局部不洁时，光学局部可用擦镜纸沾清洁液清洁。机械局部用干净的软布清洁。显微镜不能在阳光下暴晒和使用。目镜和物镜不要随便抽出和卸下必须抽取目镜时，须将镜筒上口净用布遮盖，防止灰尘落入镜筒内。 更换物镜时， 卸下后应倒置在清洁的台面下，并随即装入木箱的置放物镜的管内。显微镜用完后，取下标本片，经聚光器降下，再将物镜转成"八 " 字形，转动粗调节器使镜筒下降，以免物镜与聚光器相碰。显微镜应放在枯燥的地方，以防生霉。2、生物绘图的根本要求及方法(1) 具有高度的科学性和准确性。认真观察对象，选出正常典型的材料

12、。形态构造要准确，比例要正确，要求真实，立体，美观。(2) 画图前在纸上安排好各图的位置和比例，并预留书写图题与注字的地方。(3) 先绘制草图，位置略偏左，右边留着注图。图面要力求整洁，用削尖的HB 铅笔勾出图形轮廓，铅笔要保持锋利，尽量少用橡皮。注意大小要与实物想符合。(4) 正式绘图用 2H 至 3H 的绘图硬铅笔，描出与物体吻合的线条。线条要一笔勾出，光滑清晰匀称，接头处无分叉和痕迹，毋重复描绘。(5) 阴影用圆点衬，表示明暗深浅和立体感。点点要圆而整齐，大小一致。(6) 绘图要完善，字体用 正楷，大小要均匀，不能潦草。注图线用直尺画出，引出平行线，间隔要均匀，且一般多向右边引出，图注局

13、部接近时可用折线，但注图线之间不能穿插，图注要尽量排列整齐。(7)绘图及图注一律用铅笔，不要用钢笔、水笔、圆珠笔。(8) 实验题目写在报告纸上方，图题和材料的名称写在图的下方并注明放大倍数目镜×物镜。专业资料整理WORD格式4专业资料整理WORD格式三、本卷须知1、显微镜是精细仪器，使用时一定要严格地按规程进展操作。同时，显微镜的几个主要部件都是配套的，并已编号，不能互换，特别注意不要弄错镜头。2、要注意保持显微镜清洁，特别是光学局部，如有灰尘，要用擦镜纸轻轻擦去。假设使用过油镜头，需用二甲苯擦拭干净镜头与聚光器上的油。3、显微镜安放位置，显微镜应安放在离桌边缘5 cm、镜筒向前，显

14、微镜位置稍靠左侧。4、对光根据光线的强弱来选择平面镜或凹面镜；用低倍镜进展对光，把低倍镜位置放低；在转动转换器时，物镜到位，光圈调节好，视野光线均匀、明亮。5、转动物镜时，不可直接用手接触，而应该通过转动物镜转换器。6 正确使用高倍物镜的方法。由于高倍物镜的工作距离小，镜头易损坏，转动粗准焦时，眼睛要注视镜筒的下降，并且把光圈开大。不要调节粗准焦螺旋，防止物镜损坏。7 用显微镜观察时，切忌睁一眼闭一眼，要左眼窥镜，右眼作图。8 不是倍数越大，越清晰。如果目镜倍数过大，得到的放大虚像那么很不清晰。在低倍镜下能看清楚的物像，不必用高倍镜观察。9 载玻片上多余的水要即时擦干净，载物台上应随时保持清洁

15、。10 标本必须加盖玻片，制作带水或药液的玻片标本时，必须两边擦净再观察，千万不可将药水沾到镜头上。11 注意防潮，在观察时，显微镜上凝结的水珠尤其在冬天观察，呼吸中的水分常在显微镜上凝结成水珠 ，要及时擦掉， 显微镜要放枯燥处保存， 镜箱内应放一袋兰色硅胶枯燥剂。12 如遇机件不灵，使用困难时，千万不可用力转动，更不要任意拆修，应立即报告指导教师，要求协助排除故障，以免造成损坏。13 视野中物像与标本移动的关系：如视野中某观察对象位于左下方如何移到中央，应将装片或切片向左下方移动 同向移动。原因是视野中物像移动的方向或切片移动的方向相反。四、结果与讨论1. 显微镜的各局部构造2. 绘制一个细

16、胞构造图专业资料整理WORD格式5专业资料整理WORD格式实验二简单临时装片的制作与观察，油镜的使用演示一、实验目的掌握临时装片的制作方法，并熟悉绘制细胞图的技能，了解油镜的使用方法。二、实验内容和方法(一 )、简单临时装片的制作1.实验步骤擦：指的是擦玻片， 防止玻片上的杂质影响观察效果。一手用食指和拇指轻轻夹住玻片的边缘， 另一只手拿纱布将玻片放在两层纱布之间，用食指和拇指夹住轻轻擦拭，用力要均匀。滴：主要指载玻片上滴加的液体。 根据所做装片不同， 滴加的液体不同。 以适量 为最正确，水滴太小容易产生气泡或干涸，影响观察，水滴太大容易溢出载玻片而污染显微镜。取：指取要观察的物体。以洋葱表皮

17、为例，用镊子撕取洋葱鳞茎外表的薄膜，以 05cm × 0 5cm 为宜。放：将所取的物体放在载玻片液滴的中央。将撕下的薄膜放在载玻片中央的水滴中，用镊子将其仔细展平，撕下的薄膜越大就越不容易展平。盖：指盖盖玻片，先使盖玻片的一端接触载玻片的水滴，然后慢慢的放下，防止出现气泡影响观察效果。滴：指的是滴加染色液。滴到盖玻片的一端，滴加的不宜过多。染色，将装片从显微镜载物台上取下， 放在桌面上进展染色。不能直接在显微镜的载物台上进展染色，否那么会污染显微镜，染色后的装片一定要擦干净周边的液体，再用显微镜观察。吸：用吸水纸从盖玻片的另一端吸引，使染液浸透所取物体。2.实验材料和方法1洋葱表皮

18、细胞方法同上2果肉离散细胞用解剖针跳去番茄果肉少许， 放在载玻片上一滴清水中， 用针将果肉细胞拨匀， 盖上盖玻片观察。二、油镜观察材料和器具1 12 18h 的微生物培养物。2染色液：草酸铵结晶紫、石碳酸复红。3仪器及其他用具：显微镜、酒精灯、载玻片、盖玻片、接种环、废液缸、洗瓶、火柴、纱布、擦镜纸、吸水纸、无菌水、香柏油、二甲苯等。方法及步骤1、简单染色涂片：取一块载玻片，滴一小滴或用接种环挑取少许无菌蒸馏水于载玻片中央，用接种环按无菌操作要求挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂片要薄而均匀。枯燥、固定：手执玻片一端，将涂有菌体的面朝上，通过火焰 2 3 次用手指触及玻片反面，以不烫手为宜 。其目

19、的是使细菌细胞质凝固，以固定细菌细胞形态，并使之结实附着在载玻片上。染色：将玻片平放于玻片搁架上， 在涂菌的部位滴加适量的石炭酸复红 (或草酸铵结晶紫 )，染色约 12min 。专业资料整理WORD格式6专业资料整理WORD格式水洗：倾去染色液，用洗瓶中的自来水冲去染色液，直至涂片上流下的水无色为止。枯燥：自然枯燥，或用吸水纸轻轻吸干水分注意勿擦去菌体。镜检：待标本片完全枯燥后，用油镜镜检。2油镜的使用调节光源：将10×的低倍镜转到工作的位置。上升聚光器，翻开可变光阑，安装在镜座内的光源灯可通过调节电压以获得适当的照明亮度，应根据光源的强度及所用物镜的放大倍数选用凹面或凸面反光镜并调

20、节其角度，使视野内的光线均匀，亮度适宜。调节双筒显微镜的目镜：根据使用者的个人情况，双筒显微镜的目镜间距可以适当调节，而左目镜上一般还配有曲光度调节环，可以适应眼距不同或两眼视力有差异的观察者。调节聚光器和物镜的数值口径相一致：取下目镜直接向镜筒内观察，先将可变光阑缩到最小，再慢慢翻开，使聚光器的孔径与视野的直径一样大， 然后再放回目镜。 目的是使入射光所展开的角度与镜口角度相符合，否那么因光圈开得太大而超过物镜的数值口径时会产生光斑，如光圈收得太小那么降低分辨率，从而影响了物像的清晰度。因为各物镜的数值口径不同，所以每转一次物镜都要进展调节。低倍镜观察：调节粗螺旋，下降载物台，将染色标本片置

21、于载物台上，用标本夹好，移动推进器将观察的位置移到物镜的正下方，调节粗螺旋， 缓慢上升载物台，调节到物像清晰为止。移动标本片，把适宜的观察部位移至视野的中心。高倍镜观察： 眼睛从侧面观察，旋转转换器， 将高倍镜转至正下方，注意防止与玻片相撞。眼睛从目镜观察，细心调节粗、细螺旋，直至物像清晰为止。将最适宜观察的部位移至视野的中心。注意不要移动玻片标本的位置。油镜的观察： 用高倍镜找到适宜的部位后， 眼睛从侧面观察，旋转转换器，使高倍镜与油镜的镜头呈“八字形，在玻片标本的镜检部位滴一滴香柏油。然后眼睛从侧面观察，将油镜转到正下方， 小心油镜的镜头与载物台相撞， 小心上升载物台， 使油镜的镜筒浸入香

22、柏油中。眼睛从目镜观察，调节微螺旋，直至物像清楚为止。仔细观察并绘图(6) 注意不能用粗准焦螺旋，调节要适度，特别是当载玻片过厚时应更换盖玻片。(7) 油镜使用完毕，用棉棒或者擦镜纸蘸少许清洁剂擦去油迹。三、结果与讨论绘制一个临时装片的细胞图简述油镜使用的本卷须知专业资料整理WORD格式7专业资料整理WORD格式实验三压片的制作，涂片的制作介绍一、实验目的1. 掌握植物根尖压片的制作方法2. 掌握涂片的制作方法3. 了解油镜的使用二、实验材料和方法一 根尖压片1、器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、刀片、烧杯等。2、试剂：Carnoy 固定液 3 份 95%乙醇 1 份冰乙酸； 1mol/L

23、HCL ；改良苯酚品红3、实验材料：洋葱根尖4、步骤1准备将洋葱剥去外层老皮，置于盛清水的小烧杯口上，使根茎部与水接触，在25左右培养使其生根。每天换水1 到 2 次，一般3 天左右即可获得实验所需材料。（ 2解离剪下根尖约 1cm 备用。放入 1mol/L 的盐酸解离 1015min 。（ 3染色解离后吸出 HCl ，蒸馏水洗 2 次，每次 35min。将根尖置于载玻片中间，切去根冠，从乳白色分生组织切取尽可能薄的一片，滴加20 l 改良苯酚品红染液，染色1015min 。4压片在经染色的材料上加一滴染液， 盖上盖玻片， 覆一层吸水纸， 用左手一个手指压住盖玻片的一角，右手用带橡皮头的铅笔

24、/镊子垂直敲打，或以拇指垂直紧压盖片压片必须用力适当，注意勿使盖片移动 ，使材料分散压平，便于观察。5镜检通常染色清晰而又分散得很好的分裂相只是少数，因此压片后要认真仔细地进展镜检。二根尖涂片1.取材：细胞分裂旺盛时期取样，一般植物在上午9-12 时，下午 2-5 时，一般取根尖、茎尖。2.预处理观察细胞分裂时需该步骤：目的是防止纺锤体的形成，使细胞分裂停顿在中期阶段，从而获得较多的中期分裂相，同时预处理还可以使染色体收缩变短，便于观察统计。3.前低渗：将处理后的材料放在0.075M KCl 低渗液中，在20-25条件下处理30 分钟左右。4 去壁：倒去 KCl 溶液，参加 2.5% 混合酶液

25、纤维素酶与果胶酶各占2.5%，在温度 25-30 下处理 2-5 小时左右， 其间将材料轻轻摇动数次， 促使酶反响充分。 酶液与材料的比例适当，酶液不能过少。5 后低渗：倒去酶液，用蒸馏水冲洗2-3 次，然后在蒸馏水中停留5-10 分钟左右后进展后低渗。6 固定：用甲醇 :冰醋酸 3:1固定液固定。7. 涂片：将去壁固定的材料放在载玻片上，加一滴固定液，然后用镊子将材料夹碎，去专业资料整理WORD格式8专业资料整理WORD格式掉大块残渣，然后从载玻片一侧向材料轻轻吹气，使组织分散成一薄层。8. 火焰枯燥：将载玻片于酒精灯上微微加热烤干。9染色：用 40:1 的 Giemsa 染液用 pH7.2

26、 的 1/15M 磷酸缓冲液稀释染色 4-30 分钟或更长，蒸馏水清洗，空气枯燥后可用树胶封片。10. 镜检：于显微镜下观察。三 花粉涂片1. 取材：取幼嫩花序2. 固定：将花或者花序固定于卡诺固定液中，2-24 小时。3. 将花取出， 换入 95% 酒精和 85%酒精浸洗， 再转入 70%酒精中保存。 注意必须在酒精中洗净固定液中的醋酸。4. 将固定好的材料转入 50%酒精。5. 经蒸馏水清洗后，取出一个花药置于清洁载玻片上，加一小滴改良的苯酚品红染色液。6. 用刀片切去花药的一端，用小镊子夹着花药，将切面放在载玻片上涂抹，成一薄层，再滴一滴 45%醋酸软化分色。7. 盖上盖玻片，使花粉母细

27、胞均匀散开。三、结果与讨论1. 装片、压片、切片的异同点2. 油镜的使用有哪些本卷须知专业资料整理WORD格式9专业资料整理WORD格式实验四生物材料的解剖构造观察一、实验目的1. 学习使用显微镜观察生物材料的解剖构造2. 通过显微镜图像观察，理解认识生物材料解剖图的方法二、实验方法和步骤1. 实验材料叶的切片，新鲜的植物叶片2. 实验步骤（ 1 观察单子叶植物和双子叶植物的叶片（ 2 用显微镜观察单子叶和双子叶的叶片解剖构造三、结果与讨论如何通过叶片的纵切装片理解叶片的构造，其它的生物材料又是如何？专业资料整理WORD格式10专业资料整理WORD格式二、溶液配制实验五玻璃器皿的洗涤一、实验目

28、的及要求1、掌握常用仪器的洗涤和枯燥方法2、掌握烘箱的使用二、实验原理为确保实验顺利的进展， 要求把实验所用的玻璃仪器清洗干净并枯燥， 不同类型器皿的清洗方法不同， 不同用途的器皿清洗要求也不同。 这些工作看起来很普通简单， 但如操作不当或不按操作规定去做，那么会影响实验结果，甚至会导致实验的失败。三、实验器材培养皿，烧杯，三角瓶，量筒，移液管，试管，玻璃棒，容量瓶，试管刷，平皿刷，烧杯刷，瓶刷，烘箱四、常用仪器的洗涤和枯燥1、玻璃仪器的洗涤要求：内外壁被水均匀润湿而不挂水珠1新购的玻璃仪器的洗涤将器皿放入2%盐酸溶液中浸泡数小时，以除去游离的碱性物质，最后用流水冲净。2常用的旧玻璃仪器的洗涤

29、a、试管、烧杯、量筒、三角瓶、量杯等一般玻璃仪器用毛刷蘸洗衣粉或洗洁精等刷洗自来水洗净蒸馏水 润洗 (本着“少量、屡次的原那么 )3 次润洗 ：化学定量分析中的一种操作。它是在所用的玻璃仪器清洗完毕、确认清洁后，用待装的工作试液浸泡仪器内壁的一个过程。b、滴定管、 移液管、 吸量管、 容量瓶等 有准确刻度自来水冲洗用 0.2%-0.5% 的合成洗涤液或 铬酸洗液 浸泡几分钟自来水洗净蒸馏水润洗 3 次c、光度分析用的比色皿，由光学玻璃或石英制成，可用热的HCl- 乙醇浸泡自来水洗净 去离子水洗净d、超声波洗涤：超声波的能量能够穿透玻璃器皿的内壁和细微的缝隙、小孔、死角，通过震动，松弛污垢和纤维

30、之间的附着力，将大的污垢团分散成细小的颗粒，以利于洗除，故可以应用于任何玻璃器皿的清洗。（ 3铬酸洗液的配制与使用分浓溶液与稀溶液两种配方如下：浓溶液：重铬酸钠或重铬酸钾工业用50g自来水 150 mL浓硫酸工业用800 mL稀溶液：重铬酸钠或重铬酸钾工业用50g自来水850 mL浓硫酸工业用100 mL配法都是将重铬酸钠或重铬酸钾先溶解于自来水中，可慢慢加温，使溶解，冷却后徐徐参加浓硫酸， 边加边搅动。 重铬酸钠或重铬酸钾与硫酸作用后形成铬酸 chro-mic acid ，酪酸的氧化能力极强，因而此液具有极强的去污作用。配好后的洗涤液应是棕红色或桔红色。贮存于有盖容器内，以防氧化变质。洗涤液

31、可专业资料整理WORD格式11专业资料整理WORD格式反复使用，但当其变为墨绿色时即已失效，不能再用。2、玻璃仪器的枯燥(1) 空气晾干，又叫风干。(2) 烤干：将仪器外壁擦干后用小火烘烤不停转动仪器，使其受热均匀。适用于试管、烧杯、蒸发皿等仪器的枯燥。(3) 烘干：将仪器放在金属托盘上置于烘箱中， 控制温度在 105左右烘干。但不能用于 精细度高 的容量仪器的烘干。(4) 吹干：用电吹风吹干。五、烘箱的使用1、把要灭菌的物品放在烘箱内，堆积时要留有空隙，勿使接触器壁，关闭箱门。2、翻开电源，控温仪上有数字显示。3、按 SET 键进入温度设定，将温度设为80-120。4、再按 SET 键进入时

32、间设定，将时间设定为120min 。5、烘干完毕，待烘箱内温度降至60时，才能翻开箱门取出器材。专业资料整理WORD格式12专业资料整理WORD格式实验六、溶液的配制一、实验目的及要求1、掌握电子天平的使用2、了解分析天平的使用3、掌握常用玻璃仪器的使用方法4、了解不同等级纯水的不同用途5、学习配制溶液母液浓度的计算方法二、实验器材电子天平，分析天平，称量纸杯 ，烧杯，三角瓶，量筒，容量瓶，移液管，吸耳球，玻璃棒，药勺三、仪器的使用1、电子天平的使用（ 1水平调节：调整地脚螺旋高度，使水平仪内空气泡位于圆环中央。（ 2接通电源，预热 30min 。3按开关键ON/OFF 键，使显示器亮，并显示

33、称量模式0.0000g（ 4称量：按 TAR 键，显示为零后。将称量物放入盘中央，待读数稳定后，该数字即为称物体的质量。5去皮称量：按TAR 键清零，将空容器放在盘中央，按TAR 键显示零，即去皮。将称量物放入空容器中，待读数稳定后，此时天平所示读数即为所称物体的质量。2、分析天平的使用分析天平是定量分析工作中不可缺少的重要仪器，一般是指能准确称量到0.0001g 0.1mg的天平。（ 1事先检查电源电压是否匹配 必要时配置稳压器， 按仪器要求通电预热至所需时间。（ 2开启、预热 1 小时，调水平；（ 3校准 CAL ；4称量将量器称量纸，称量杯等归零去皮Tare 或 T.O 后，慢慢加样至量

34、器，当加试样与指定量相差不到10 mg 时，极小心地将盛有试样的药勺伸向量器的正上方2-3 cm处，勺的另一端顶在掌心上，用拇指、中指及掌心拿稳药勺，并以食指轻弹勺柄，将试样慢慢的抖入量器中。多加的药品取出，但不能返回试剂瓶中。5称量完毕应及时除去称量纸杯，关上侧门，切断电源，并做好使用情况登记。3、常用玻璃仪器的使用1烧杯粗略配制一定体积的溶液用容量： 10-5000 mL使用注意：加热时应置于石棉网上，一般不可干烧（ 2三角瓶加热处理试样和容量分析滴定容量 mL： 50、 100、 250、 500、 1000使用注意：加热时应置于石棉网上，一般不可干烧（ 3量筒或量杯量取一定体积的液体用

35、，准确度不高容量 mL： 5、 10、25、 50、 100、 250、500、 1000、 2000使用注意： 沿壁参加或倒出使用；不能加热和量取热的液体；不能作反响容器；不能在量筒专业资料整理WORD格式13专业资料整理WORD格式里稀释溶液； 量液和读数时， 量筒必须放平， 视线同量筒内液体的凹液面的最低处保持水平。（ 4容量瓶配制标准体积的标准溶液或被测溶液用容量 mL： 10、 25、50、 100、150、 200、 250、500、 1000 等使用注意：只能配制容量瓶上规定容积的溶液；容量瓶的容积是在20时标定的，转移到瓶中的溶液的温度应在 20左右；非标准磨口塞要保持原配；漏

36、水的不能用；不能直接用火加热，可水浴加热（ 5移液管或吸量管用于准确移取一定体积的溶液容量 mL： 1、 2、 5、 10、 15、20、 25、50、 100 等，微量0.1、 0.2、0.5 等使用注意：吸溶液时，左手握住移液管，右手捏吸耳球屡次；把溶液吸到管颈标线以下，不时放松食指，试管内液面慢慢下降；把液面调节到标线；放出溶液时， 移液管下端紧贴锥形瓶内壁， 放开食指， 溶液沿瓶壁自由流出；残留在移液管尖的最后一滴溶液，一般不要吹掉。四、不同等级纯水的不同用途1、超纯水 Ultrapure Water ：既将水中的导电介质几乎完全去除，又将水中不离解的胶体物质、气体及有机物均去除至很低

37、程度的水。通常用于多种精细分析实验的需求。2、双蒸水 Distillation-DistillationH 2O， ddH2O：经过 2 次蒸馏而得的水。适用于多种需求，包括试剂制备、溶液稀释、细胞培养所需营养液的配制等。3、去离子水 Deionized Water：应用离子交换树脂去除水中的阴离子和阳离子。可用于清洗、配制分析标准样、制备试剂和稀释样品。4、纯水 Reverse osmosis Water，RO 水：通过反渗透膜过滤后的水，能够去除95%以上的离子态杂质。通常用于实验室器皿的最后清洗；高压灭菌锅用水。5、蒸馏水 Distilled Water ：实验室最常用的一种纯水，虽设备

38、廉价，但极其耗能和费水且速度慢， 应用会逐渐减少。 蒸馏水能去除自来水内大局部的污染物， 但挥发性的杂质无法去除。专业资料整理WORD格式14专业资料整理WORD格式实验七、溶液的配制一、实验目的及要求1、掌握溶液母液的配制流程2、掌握不同溶液的贮存要点3、学习母液浓度和使用浓度的换算4、掌握常用缓冲液的配制二、实验器材烧杯，量筒，药勺，称量纸，移液管，玻璃棒，容量瓶，吸耳球，滴管，试剂瓶，pH 试纸，pH 计三、实验试剂NaH2PO4·2H 2O， Na2HPO4·12H 2O四、溶液的配制方法及步骤1、实验的准备：准备所需的药品和玻璃仪器；洗涤。2、计算：算出所需固体溶

39、质的质量或液体溶质的体积。1百分比浓度计算：a、G/V 比例如配 1% NaCl ，称 1g NaCl 溶于 100 mL 水。b、 V/V 比：例如配 75%乙醇 100 mL ， 75%=X/100, X=75 mL 。取 75 mL 无水乙醇，加25 mL 蒸馏水。乙醇：乙醚：丙酮 =2： 1： 2 配 500 mL ，各取 200 mL ， 100 mL ， 200 mL 混合。c、G/G 比：用的较少，如计算灰分中某种元素如Fe 的含量。2摩尔浓度的计算： (药品的分子量一般在标签中注明)M= 摩尔数 mol /体积 L ，摩尔数 mol =质量 g /摩尔质量1 mol/L = 1

40、 m mol/L1000× = 1mol/L ×1000000a、0.1 mol/L 或 0.1 mol/L NaCl配 100 mL ：称取 NaCl 0.1 mol/L×0.1 L ×40 g/mol=0.4gb、 0.1 m mol/L NaCl配 100 mLmM= 毫摩尔数 /体积 L 毫摩尔数 =质量 mg /摩尔质量称取 NaCl 0.1 m mol/L ×0.1L ×40 g/mol=0.4mgc、0.1 mol/L NaCl配 100 mLmol/L = 微摩尔数 /体积 L 微摩尔数 =质量g /摩尔质量称取 Na

41、Cl 0.1 mol/L ×0.1 L ×40 g/mol=0.4 ug3混合溶液配制的计算：如配 3 mol/L EDTA ， 2.25 m mol/L NBT 以及 60mol/L 核黄素溶液 100ml ，用 50m mol/L磷酸缓冲液配制。注意： 分别计算三种成分的质量；用磷酸缓冲液分别配制三种成分的溶液，再混合，使混合后的总体积为 100 mL 。3、称量：根据需要选择不同量程的天平；根据要求选择不同精度的测量器，如量筒或移液管。专业资料整理WORD格式15专业资料整理WORD格式4、溶解：（ 1将固体或液体溶质倒入烧杯里。（ 2根据药品配置要求选择溶剂：如：蒸

42、馏水，双蒸水，去离子水等。（ 3参加适量的溶剂约为所配溶液体积的 1/6，用玻璃棒搅拌使之完全溶解，冷却至室温。药品标签中一般标识有药品的溶解性能和分子式， 可根据分子式和所学的常识判断药品的构造和性质特点如配制酸碱两性物质氨基酸、蛋白质、核苷酸等时，如果溶解性能不好，可以用稀酸或稀碱促进溶解，但 pH 应在被要求的X围内。（ 4加热可以促进溶解，但注意应该在配制的X围内。有的药品还需水浴加热较好。如配0.1%的淀粉，水浴加热温度在80-90，过热会糊化。5、定容1固体：于小烧杯中溶解后，移到容量瓶中，用玻璃棒引流或用小漏斗，将小烧杯用剩余溶剂多洗几次。用溶剂参加到将容量瓶2/3 时，将容量瓶

43、水平方向摇动几周勿倒置，使溶液大体混匀。再慢慢加溶剂到接近刻度， 然后用滴管参加到刻度。 眼睛平视刻度， 加溶剂至液体凹面与刻度相切。盖紧瓶塞倒转，使气泡升到顶，将瓶震荡数次，再倒置，重复操作，混合均匀即可。 注意：不再定容了，防止溶液漏掉（ 2液体稀释：用移液管移取一定体积的溶液于容量瓶中，再按上法进展。如果稀释时产生热量，可先于小烧杯中加少量溶剂溶解，冷却后移到容量瓶中，再按上法进展。6、容量瓶定容后，装入试剂瓶，贴上标签。标签应注明以下内容：药品浓度、名称、配制人、配制日期等。7、清理实验场所。五、缓冲溶液的配制1、概念由一定物质组成的溶液，在参加一定量的酸或碱时，其氢离子浓度改变甚微或

44、根本不变，此种溶液称为缓冲溶液；这种作用称为缓冲作用； 其溶液内所含物质称为缓冲剂，调节缓冲剂的比例可以配置成各种pH 的缓冲液。缓冲剂的组成， 多为弱酸及这种弱酸与强碱所组成的盐，或弱碱及这种弱碱与强酸所组成的盐。调节二者的比例可以配制成各种pH 的缓冲液。例如：某一缓冲液由弱酸HA 及其盐 (BA) 所组成，它的解离方程式如下：HA H ABA B A假设向缓冲液中参加碱NaOH ，那么：HA NaOH NaA 弱酸盐 + H 2O假设向缓冲液中参加酸HCl ，那么：BA HCl BCl HA 弱酸由此可见，向缓冲液中加酸或碱，主要的变化就是溶液内弱酸HA 的增加或减少。由于弱酸 HA 的

45、解离度很小，所以它的增加或减少对溶液内氢离子浓度改变不大，因而起到缓冲作用。实例：磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液原理：参加盐酸溶液，其缓冲作用：NaH2PO4 + Na 2HPO 4 + HCl 2 NaH2PO4+ NaCl参加氢氧化钠溶液，其缓冲作用：专业资料整理WORD格式16专业资料整理WORD格式NaH2PO4 + Na 2HPO 4 + NaOH 2 Na2HPO4+ H2O缓冲溶液：磷酸氢二钠-磷酸二氢钠溶液缓冲剂：磷酸氢二钠和磷酸二氢钠2、配制 0.2 mol/L pH=6.8 的磷酸缓冲液用磷酸氢二钠 -磷酸二氢钠做缓冲液选用药品： Na2HPO4·12H2O碱和 N

46、aH 2PO4·2H 2O酸配缓冲液 100 mL 。1计算100 mL 0.2 mol/L NaH 2PO4·2H2O：g100 mL 0.2 mol/L Na 2HPO4·12H2O：g（ 2分别配制 0.2 mol/L Na 2HPO 4和 0.2 mol/L NaH 2PO4各 100 mL ，定容于容量瓶之后。注意：在容量瓶上帖标签。（ 3按照下表中的比例分别量取0.2 M Na 2HPO4和 0.2 M NaH 2PO4溶液，混合后装入试剂瓶，贴上标签，标签应注明以下内容：试剂名称，试剂浓度，pH 值，配制人，配制日期，贮存条件等。4磷酸氢二钠 -磷酸二氢钠缓冲液0.2 mol/L 的检验：取一滴所配制的缓冲溶液于精细pH 试纸上，检测其pH 值。（ 5如配 50 mM pH=6.8 的缓冲液 100 mL ，以配制好的母液稀释即可。计算：取 0.2 M pH=7.2 的缓冲液mL，用蒸馏水定容至100 mL 即可。3、实验结果：检验所配制的缓冲溶液与预期pH 值是否相符合。4、本卷须知（ 1溶液要用带塞的试剂瓶盛装。（ 2每瓶试剂必须标明名称、规格、浓度和配制日期的标签。（ 3配制硫酸、磷酸、硝酸、盐酸等溶液