焦炉工人外周血淋巴细胞HSP72表达特征(一)

1、焦炉工人外周血淋巴细胞 HSP 72表达特征 (一)【关键词】焦炉逸散物；多环芳烃；苯并 (a)芘；热休克蛋白72;影响因素， 摘要：目的研究焦炉工人外周血淋巴细胞热休克蛋白72(HSP72)表达特征及其影响因素。方法选取某焦化厂焦炉工人267人和对照30人，蛋白印迹(Westernblot)法检测外周血淋巴细胞HSP72的表达，高效液相色谱法测定作业环境空气中苯并(a)芘B(a)P浓度。收集研究对象个人信息。结果炉顶工、炉侧工外周血淋巴细胞HSP72 表达水平 (G±SG)(120±04，7130±037显)著高于对照组 (085±034，)炉侧工显著

2、高于炉底工(101±03，5)差异有统计学意义(P005)。不同作业环境B(a)P浓度与相应作业区工人外周血淋巴细胞HSP72表达水平呈二项式分布 (R2=09999)。 Logistic 分析显示， 与对照组相比， 焦炉逸散物暴露引起淋巴细胞 HSP72 表达阳性的调整 OR为131，其中炉顶工、炉侧工调整 OR分别为149和269。多元线性回归 分析显示，在低暴露水平下(炉底工、对照组)，吸烟指数和饮酒是HSP72表达水平升高的抑制因素(B分别为-00001和-005, P005)。结论焦炉逸散物可诱导外周血淋巴细胞HSP72表达升高，但高暴露剂量为焦炉逸散物对 HSP72 表达

3、有抑制作用。低暴露水平下吸烟和饮酒对 HSP72表达有抑制作用。关键词：焦炉逸散物；多环芳烃；苯并(a)芘；热休克蛋白72 ;影响因素ExpressivecharactersofHSP72inperipheralbloodlymphocyteofcokeovenworkers Abstract：ObjectiveToinvestigateheatshockprotein72(HSP72)levelsinperipheralbloodlymphocytesofcokeove nworkersandinfluencefactors.MethodsTwohundredsixtysevencokeov

4、enworkersandthirtycontrols withoutoccupationalPAHsexposurewereinvestigated.Benzo(a)pyrene B(a)p concentrationsintheambientairwereassayedbyhighperformanceliquidchromatography(HPLC).HSP 72levelsinperipheralbloodlymphocytesweremeasuredbyWestemBlot.Personalinformationwascoll ectedbyquestionnaire.Results

5、HSP72levelsinoven-top，oven-sideworkers(120±，047130± 037)weresignificantlyhigherthanthatincontrol(085± 034，P0.05)，andHSP72levelsinoven-sideworkersweresignificantlyhigherthanthoseinoven-bottomworkers(101，P005)±. 035B(a)p concentrationsandHSP72levelsindifferentexposedgroupsshowedbin

6、omialdistribution(R2=09999). ThelogisticregressionanalysisshowedthatthecokeovenworkershadsignificantlyhigherriskinHSP72ri sing(adjustOR=131)thancontrol，andtheadjustORofoven-top，oven-sideworkerswererespectively149and269.Multiplelinearregressionresultpresentedthatinthel owerexposuregroup(oven-bottomwo

7、rkersandcontrol)，smokinganddrinkingwereinhibitingfactorst oHSP72expression(theregressioncoefficientwererespectively-00001and-005，P005).ConclusionThe cokeovenemissionscaninducetherisingofHSP72expression.Butthehighdosecokeovenemissionssho wedinhibitiontoHSP72.Smokinganddrinkingplayedaninhibitionalrole

8、inHSP72expressioninlowerex posuregroup.Keywords：cokeovenemission;polycyclicaromatichydrocarbons;benzo(a)pyrene;heatshockprotein72;influenc efactor热休克蛋白是生物体细胞在一系列应激因素作用下产生的具有高度保守性的一组细胞保护 性蛋白质， 在生理状态下， 它们主要发挥细胞内功能1， 其中热休克蛋白 70(heatshockprotein70，HSP70) 家族与细胞保护之间的关系最密切，它在机体细胞耐受形成、 机体免疫调节、 遗传物质保护、 基因调控、

9、细胞增殖分化、肿瘤发生开展等过程中起重要作 用2, 3。HSP70家族主要有诱导型的 HSP72和结构型的 HSP73两个亚型4, 5，在应 激过程中特别是染毒过程中，主要为 HSP72 表达变化 6。本研究旨在通过分析焦炉工人 外周血淋巴细胞 HSP72表达特征，探讨焦炉逸散物对HSP72表达的影响，为焦炉工人的健康监护和预防保护提供理论依据。1 对象与方法11 对象选取某焦化厂 267 名工人为研究对象，均为男性。根据作业环境和工作地点分为炉 顶工 80 人，炉侧工 64 人，炉底工 123 人(含电工、瓦工、钳工、带运工、仪表工等)。30 名对照选自 2km 外的某医院医护人员和管理人员

10、，均为男性，无有毒作业接触史。12 方法121 调查方法由调查员采用面对面询问的方式采集研究对象根本信息，填写调查表。内容包 括性别、年龄、工龄、吸烟、饮酒、职业史、既往病史、生活环境、生活习惯、身体状况等 信息。吸烟指数=吸烟支数/d X烟年限，吸烟指数100为吸烟。122作业环境苯并但)芘B(a)b测定采用个体采样方法进行采样。分别选取炉顶、炉侧、炉 底、辅助作业区 (行政办公楼、回收车间、机电作业区)和对照区工人各 2 名，随身携带个体采样器(德国HSF513型)，流量2L/min连续采样6h,每个工作区重复测定 2次。采用高效液 相色谱法(Varian-Prostar高效液相色谱仪，美

11、国Varian公司)检测B(a)P芘浓度。123淋巴细胞别离及处理肘静脉采血5ml，肝素抗凝，加淋巴细胞别离液(上海试剂二厂)，2000r/min离心20min，吸取淋巴细胞层，生理盐水清洗，07%氯化氨裂解红细胞，离心分离淋巴细胞。加冰冷的细胞裂解液，4C裂解 1h,1000r/min离心5min，取上清，按DCproteinassay试剂盒(美国BIO-RAD公司)方法进行总蛋白定量。调节蛋白浓度为1mg/ml,取1001加等体积2X十二烷基磺酸钠(SDS)100y,l 94C变性10min，用于HSP72的测定。124HSP72测定蛋白印迹(Westernblot)法7测定HSP72取1

12、0卩样品和高分子量蛋白 maker 进行电泳和转膜 (Mini-PROTEAN3 型垂直电泳槽、 PowerPAC3000 型电泳仪、小型 Trans-Blot 转印槽，(美国BIO-RAD公司)5%脱脂奶粉封闭，37C振荡1h;兔抗人HSP72单克隆抗体(1: 40000,美国stressgen公司)4 C孵育过夜，磷酸盐缓冲液 (PBS清洗15min , 3次；辣根过氧 化物酶标记的羊抗免 1gG(1: 10000 ,美国KPL公司)，37C孵育1h, PBS洗清15min , 3次； 电化学发光剂(英国Amersham公司)显色，KodakX-OMAT2000自动冲片机洗片，扫描，gel

13、pro32 分析软件进行定量分析。HSP72表达水平用HSP72灰度值与对照样品灰度值的比值表示。13统计分析应用SPSS100软件进行统计分析。 单因素方差分析比拟年龄、 工龄组间差异，x2 检验比拟吸烟、饮酒组间差异。 HSP72 对数转换后呈正态分布，用几何均数 ±标准差 (G±SG) 表示，多元协方差分析控制年龄、性别、工龄、吸烟、饮酒等因素的影响，比拟组间差异。Logistic回归分析不同暴露等级引起HSP72升高阳性的危险度。2 结果21 一般情况267名焦炉作业工人年龄为 21354854岁，平均(3734 ± 58岁；工龄为117 2910岁，平均

14、(1602 ± 71年；现暴露水平接触时间129年，平均(1182 ± 76年，吸烟人数182人，占6816%，饮酒人数 132人，占4943%。30名对照年龄为 25614336岁，平均(3603±557) 岁；工龄为 1422510 年，平均 (1512±697年) ，现暴露水平接触时间为125 年，平均(1097 ± 87年0)；吸烟人数 17人，占 5667%；饮酒 10人，占 3333%。炉顶、炉侧、炉底工人 及对照各组年龄、现暴露水平接触时间、吸烟率、饮酒率比拟差异无统计学意义(P005)。炉底和炉顶工人工龄差异有统计学意义(P00

15、5)。22作业环境苯并(a)芘检测结果炉顶、炉侧、炉底工作区B(a)P浓度分别为(035 ± 002)010 ± 000) 和(0045 ± 0007)卩g/m3分别是对照(002 ± 000)卩g/m3勺175, 5, 225倍，呈现炉顶 炉侧 炉 底对照区的趋势。23焦炉工人外周血淋巴细胞HSP72表达水平231淋巴细胞HSP72表达水平(表 1)由表1可见，炉顶工、炉侧工淋巴细胞HSP72表达水平显著高于对照组，差异有统计学意义(P005)，炉侧工显著高于炉底工，差异有统计学意义(P005)，炉顶工与炉侧工比拟，差异无统计学意义(P005)。以各不同作业场所 B(a)P浓度均值与该作业区工人 HSP72表达几何均数进行曲线拟合，呈二项式分布，R2为09999，显示HSP72表达呈现随着BaP浓度的升高而先升高后下降的趋势。表1焦炉工人外周血淋巴细胞HSP72表达水平略注：a与对照组比拟，P005； b与炉底工比拟，P005232暴露组别对HSP72表达水平的