细菌的检查与防治原则课件

1、细菌的检查与防治原则第七章第七章 感染病病原学诊断与预防感染病病原学诊断与预防教学目的教学目的: :掌握标本采集的原则、标掌握标本采集的原则、标本的处理方法及常用实验诊断技术。本的处理方法及常用实验诊断技术。细菌的检查与防治原则 细菌 真菌 病毒感染病感染病如何诊断？如何诊断？细菌的检查与防治原则标本的采集和送检六原则标本的采集和送检六原则遵守无菌操作遵守无菌操作选择不同采集时机和标本种类选择不同采集时机和标本种类尽早采集尽早采集在抗生素应用前采集在抗生素应用前采集正确的保存和运送正确的保存和运送直接关系到检测的准确性直接关系到检测的准确性作好标记作好标记, ,化验单核对化验单核对细菌的检查与

2、防治原则常见的临床标本常见的临床标本1）血液标本：正常人的血液是无菌的。采集血液标本主要用于病原体培养、核酸检测及血清中抗原抗体检测。2）呼吸道标本：上呼吸道有正常菌群的存在，进行普通培养无特别意义，仅在疑似化脓性扁桃体炎、白喉、百日咳患者及脑膜炎奈瑟菌带菌者的检查时，采集咽拭子、鼻咽拭子或化脓部位的分泌物，下呼吸道正常情况下无菌或仅有少量细菌侵入，但很快被清除。怀疑有支气管炎、肺炎及结核病的患者需采集下呼吸道标本，包括痰液、支气管灌洗液和气管镜毛刷等。采集下呼吸道标本应防止上呼吸道正常菌群的污染。3）尿液标本：正常人尿液是无菌的。但在前尿道有正常菌群和过路菌存在（大肠埃希菌、葡萄球菌），而后

3、者又是常见尿路感染的病原菌。因此正确的采集尿液，避免其他菌群的污染是尿液细菌检验正确与否的关键。一些抗菌药物和代谢产物通过尿液排泄，因此尿液标本必须在使用抗菌药物之前采集。女性月经期不易采集标本。常用的尿液细菌培养标本包括中段尿、肾盂尿、膀胱穿刺尿及晨尿。细菌的检查与防治原则常见的临床标本常见的临床标本4）脑脊液标本：正常人脑脊液是无菌的，从脑脊液中检出细菌均应作为病原菌看待。5）粪便标本：肠道内有种类和数量很多的正常菌群，因此粪便标本中包含有大量的正常菌群，通常需用选择培养基分离致病菌，此外菌群失调和菌交替症也可引起腹泻，因此对正常菌群的种类和比例的检查是不可或缺的。6）生殖道标本：正常的内

4、生殖器官是无菌的，但外生殖器可有正常菌群的存在，在菌群失调时也可发生真菌性阴道炎、细菌性阴道炎或尿道炎等疾病。 解剖结构的不同男性和女性生殖道采集的标本有：男性尿道、生殖道分泌物，前列腺液标本阴道后穹窿分泌物及经阴道后穹窿穿刺盆腔脓液外阴分泌物采用双套管的方式插入子宫腔吸取分泌物7）脓液、胸腹水及分泌物等其他标本。细菌的检查与防治原则致病菌的分离鉴定致病菌的分离鉴定药物敏感试验药物敏感试验涂片检查涂片检查-染色和不染色染色和不染色-分离培养分离培养生化试验生化试验血清学鉴定血清学鉴定动物试验动物试验明明确确诊诊断断初步诊断初步诊断分子生物学技术分子生物学技术病原菌抗原检测病原菌抗原检测EIA、

5、协同凝集试验、协同凝集试验、IF、CIE等等细菌的检查与防治原则涂片检查涂片检查不染色标本的形态检查：观察细菌的动力及运动等活体状况。常用的方法有悬滴法、压滴法，该法不能看清细菌的形态结构特征。染色标本的形态检查：1）染色的原理和染料2）常用染料：酸性、碱性、复合、单纯染料等3）染色方法：单染法、复染法（革兰染色、抗酸染色）、特殊染色细菌的检查与防治原则致病菌的分离鉴定致病菌的分离鉴定药物敏感试验药物敏感试验涂片检查涂片检查-染色和不染色染色和不染色-分离培养分离培养生化试验生化试验血清学鉴定血清学鉴定动物试验动物试验明明确确诊诊断断初步诊断初步诊断分子生物学技术分子生物学技术病原菌抗原检测病

6、原菌抗原检测EIA、协同凝集试验、协同凝集试验、IF、CIE等等细菌的检查与防治原则细菌的接种与分离培养细菌的接种与分离培养为了能鉴定和研究细菌，需要对细菌进行分离培养。大多数细菌可用人工方法培养，根据不同细菌给予适宜的培养条件，遵守实验操作的要求可以对细菌进行分离培养。1）无菌技术：细菌广泛存在于自然界中，如果环境或工作人员的皮肤、黏膜中的细菌混入检验标本或污染实验材料，将严重影响检验结果的正确性。另外，临床标本都是具有感染性的含有病原体的传染源，如处理不当，容易引起实验室感染和医院感染，甚至严重的传染病大流行，因此在细菌学检验时必须随时防止标本污染和病原菌扩散的操作，即无菌技术或无菌操作。

7、2）接种工具和场所：接种针和接种环是细菌学实验室必需的工具接种罩、无菌工作台、无菌室、生物安全柜是为了达到无菌技术要求而建立的细菌接种场所。细菌的检查与防治原则细菌的检查与防治原则培养基培养基培养基培养基（culture medium）供细菌生长用的，由人工方法将多种营养物质根据细菌的需要组合成的混合营养基质。细菌的检查与防治原则常用培养基种类常用培养基种类（culture medium）特殊培养基特殊培养基基础培养基基础培养基营养培养基营养培养基选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基细菌的检查与防治原则培养基的制备过程培养基的制备过程 称量 溶解 调PH 过滤 分装 灭菌 质量检验 保存细

8、菌的检查与防治原则细菌的分离接种法细菌的分离接种法平板划线接种（使标本中混在的多种细菌在培养基表面分散生长，形成各自菌落。便于根据菌落特征，挑取单个菌落进行纯培养）细菌的检查与防治原则细菌的分离接种法细菌的分离接种法平板划线接种平板划线接种细菌的检查与防治原则细菌的分离接种法细菌的分离接种法平板划线接种平板划线接种细菌的检查与防治原则第二次划线区第三次划线区待分离标本涂布点第一次划线区平板划线接种平板划线接种细菌的检查与防治原则细菌的分离接种法细菌的分离接种法斜面接种（用于已获得的单个菌落的移种、纯种培养细菌和保存菌种及观察细菌的某些特性）细菌的检查与防治原则细菌的分离接种法细菌的分离接种法液

9、体接种法（用于增菌培养）细菌的检查与防治原则细菌的分离接种法细菌的分离接种法穿刺接种法:此法主要用于半固体培养基、明胶及双糖管的接种。用接种针取细菌少许，从半固体培养基中央，平行于管壁垂直刺入，接近管底但不可接触管底，然后接种针沿原路退出 细菌的检查与防治原则细菌的分离接种法细菌的分离接种法测定牛乳、饮水和尿液等标本细菌数时常用此方法。 常用于纸片法药物敏感性测定，也可用于被检标本中的细菌计数。 细菌的检查与防治原则细菌的培养方法细菌的培养方法1）普通培养法 ：是指需氧菌或兼性厌氧菌等在普通大气环境下的培养条件，又称需氧培养法。将已接种过的培养基,置35培养箱内18-24小时, 即可于培养基上

10、生长.少数生长缓慢的细菌,需培养3-7天直至一个月才能生长.为使培养箱内保持一定湿度,可在其内放置一杯水.培养时间较长的培养基,接种后应将试管口塞棉塞后用石腊凡士林封固,以防培养基干裂.2）二氧化碳培养法 ：某些细菌,如布氏杆菌和脑膜炎奈瑟菌等需要在含有10%二氧化碳的空气中才能生长,尤其是初代分离培养要求更为严格.将已接种的培养基置于二氧化碳环境中进行培养的方法即二氧化碳培养法,常用方法有以下几种:(1) 二氧化碳培养箱 可将已接种的培养基直接放入箱内孵育,即可获得二氧化碳环境.(2) 烛缸法 将已接种的培养基,置于容量为2 000ml的磨口标本缸或干燥器内.缸盖或缸口处均需涂以凡士林,然后

11、点燃蜡烛直立置入缸中,密封缸盖.待燃自行熄灭时,容器内约含5-10%的CO2 容器置37培养.(3) 重碳酸钠-盐酸法 每升容积的容器内,重碳酸钠与盐酸按0.4g与3.5ml的比例,分别将两种药各置一器皿内(如平皿内),连同器皿置于标本缸或干燥器内,盖严后使容器倾斜,两种药品接触后即可产生二氧化碳.细菌的检查与防治原则细菌的培养方法细菌的培养方法3）厌氧培养法 目前常用的厌氧培养方法有厌氧罐法,气袋法及厌氧箱三种.(1) 厌氧罐法 是目前应用较广泛的一种方法,共分为以下几种.抽气换气法:该法适用于一般实验室,其特点是较经济并可迅速建立厌氧环境.标本接种后,将平板放入厌氧罐,拧紧盖子,用真空泵抽

12、出罐中空气,使压力真空表至-79.98KPa,停止抽气,充入高纯氮气使压力真空表指针回0位,连续反复3次,最后在罐内-79.98KPa的情况下,充入70%的N2 ,20%H2 ,10%CO2 (有人改用20%CO2 及80%H2 ,亦可获得好结果).罐中需放入冷催化剂钯粒,可催化罐中残余的O2 和H2 化合成水.同时罐中应放有美蓝指示管,美蓝在有氧的环境下呈蓝色,无氧时为红色.临用前首先将美蓝煮沸使变成无色,放入罐中先呈浅蓝色,待罐中无氧环境形成,美蓝即可持续无色.气体发生袋法:气体发生袋系由锡箔密封包装,其中含有两种药片,一种为含枸椽酸和重碳酸氢钠的药片,另一种是含有硼氢化钠的药片.前者遇水

13、放出二氧化碳,后者可释放氢.使用时在袋的右上角剪一小口,灌进10ml蒸馏水,立即放入含有钯粒,指示剂及平板培养基的厌氧罐中,拧紧盖子经2-3分钟后,可感到盖子微热并有少量水蒸气出现.密封后1小时左右罐中的O2 的含量可低于6.2pH4.4（）（+）（指示剂红色）（指示剂黄色）细菌的检查与防治原则M - 甲基红（methyl red）实验葡萄糖葡萄糖丙酮酸丙酮酸乙酰甲基甲醇乙酰甲基甲醇 甲基红甲基红 -葡萄糖葡萄糖丙酮酸丙酮酸 甲基红甲基红 +- +细菌的检查与防治原则细菌的生理生化特征检测细菌的生理生化特征检测 碳水化合物的代谢试验碳水化合物的代谢试验 五、五、V-P试验试验 【原理原理】 某

14、些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步脱羧成乙酰甲基甲醇，产生丙酮酸，丙酮酸进一步脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为二乙酰，后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为二乙酰，二乙酰与培养基中的精氨酸所含的胍基发生反应，二乙酰与培养基中的精氨酸所含的胍基发生反应，生成红色化合物，称生成红色化合物，称VP（+）反应。）反应。 与甲基红试验一起使用，甲基红试验阳性，则与甲基红试验一起使用，甲基红试验阳性，则V-P试验阴性。反之也如此。试验阴性。反之也如此。细菌的检查与防治原则VPVP试验试验葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲

15、醇二乙酰红色红色OH-+含胍基化合物（）（+）细菌的检查与防治原则 VP试验葡萄糖葡萄糖丙酮酸丙酮酸乙酰甲基甲醇乙酰甲基甲醇 二乙酰二乙酰红色化合物红色化合物 + 胍基化合物胍基化合物葡萄糖葡萄糖丙酮酸丙酮酸 乙酰甲基甲醇乙酰甲基甲醇 - - +细菌的检查与防治原则细菌的生理生化特征检测细菌的生理生化特征检测 蛋白质和氨基酸的代谢试验：不同细菌分解蛋白质能力不同，蛋白质和氨基酸的代谢试验：不同细菌分解蛋白质能力不同，可用于鉴别细菌。可用于鉴别细菌。 一、苯丙氨酸脱氨酶试验一、苯丙氨酸脱氨酶试验 【原理原理】 细菌具有苯丙氨酸脱氨酶，能将培养基中的苯丙氨细菌具有苯丙氨酸脱氨酶，能将培养基中的苯丙

16、氨酸脱氨变成苯丙酮酸，加入三氯化铁试剂与苯丙酮酸脱氨变成苯丙酮酸，加入三氯化铁试剂与苯丙酮酸螯合后变为绿色酸螯合后变为绿色 。 主要用于鉴定变形杆菌属、摩根菌属、普罗威登菌属细菌，均为强阳性，肠杆菌科其他细菌均为阴性。细菌的检查与防治原则细菌的生理生化特征检测细菌的生理生化特征检测蛋白质和氨基酸的代谢试验蛋白质和氨基酸的代谢试验二、氨基酸脱羧酶试验二、氨基酸脱羧酶试验 【原理原理】 氨基酸脱羧酶试验原理：氨基酸脱羧酶试验原理：具有氨基酸脱羧酶的细菌，能分解氨基酸使其脱羧生成胺（赖氨酸尸胺，鸟氨酸腐胺，精氨酸精胺）和二氧化碳，使培养基变碱。使指示剂显示出来。最常测定的氨基酸有三种：赖氨酸、鸟氨酸

17、、精氨酸。 结果：结果：对照管应呈黄色，测定管呈紫色（指示剂为溴甲酚紫）为阳性，若测定管呈黄色为阴性。若对照管呈现紫色则试验无意义，不能作出判断。（对照管只有葡萄糖没有氨基酸）。 应用：应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。如沙门菌属中除伤寒和鸡沙门菌外，其余沙门菌的赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶均为阳性。志贺菌属除宋内和鲍氏志贺菌外，其他志贺菌均为阴性。阴性阳性细菌的检查与防治原则细菌的生理生化特征检测细菌的生理生化特征检测 蛋白质和氨基酸的代谢试验蛋白质和氨基酸的代谢试验 三、精氨酸双水解酶试验三、精氨酸双水解酶试验【原理原理】 原理：原理：精氨酸经两次水解，先生成瓜氨酸和氨，瓜氨酸又在瓜氨酸酶的作用下

18、，形成鸟氨酸、氨及二氧化碳。鸟氨酸又在鸟氨酸酶的作用下生成腐氨和二氧化碳，酸碱指示剂转为碱性指示为阳性。 精氨酸可通过双水解和脱羧酶两个途径进行分解，两个途径可单独进行或同时进行。如培养基的PH指示剂急剧变碱，可能是双水解途径，如PH变化弱而慢，且不形成氨，可能是以脱羧酶途径分解的，但仅从培养基PH变化来确定何种途径并不可靠，如欲鉴别应作气相色谱分析。细菌的检查与防治原则细菌的生理生化特征检测细菌的生理生化特征检测 蛋白质和氨基酸的代谢试验蛋白质和氨基酸的代谢试验 四、尿素酶试验四、尿素酶试验原理：原理：具有尿素酶的细菌能分解尿素产生氨，使培养基呈碱性，酚红指示剂变为红色。 变形杆菌、摩根、雷

19、氏普罗维登、克雷伯为阳性（）（+）尿素氨培养基变碱性红色细菌的检查与防治原则细菌的生理生化特征检测细菌的生理生化特征检测 蛋白质和氨基酸的代谢试验蛋白质和氨基酸的代谢试验 五、吲哚试验五、吲哚试验原理：原理：有些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚。吲哚本身无色，不能直接观察结果，但可与吲哚试剂中的对位二甲氨基苯甲醛形成红色的玫瑰吲哚，而呈现红色被肉眼识别。 肠杆菌科细菌的鉴定；大肠杆菌、产酸克雷伯为阳性细菌的检查与防治原则吲哚试验吲哚试验（）（+）色氨酸色氨酸吲哚（靛基质）吲哚（靛基质）玫瑰吲哚（红色）玫瑰吲哚（红色）+二甲基氨二甲基氨基苯甲醛基苯甲醛细菌的检查与防治原则吲哚（i

20、ndol）试验色氨酸吲哚玫瑰吲哚 细菌的检查与防治原则细菌的生理生化特征检测细菌的生理生化特征检测 蛋白质和氨基酸的代谢试验蛋白质和氨基酸的代谢试验 六、硫化氢试验六、硫化氢试验原理：原理：有些细菌可分解培养基中含硫氨基酸或含硫化合物，而产生硫化氢气体，硫化氢遇铅盐或低铁盐可生成黑色沉淀物。 沙门菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属、腐败假单胞菌为阳性细菌的检查与防治原则硫化氢试验硫化氢试验（）（+）含硫氨基酸硫化氢黑色硫化物+铁离子或铅离子细菌的检查与防治原则细菌的生理生化特征检测细菌的生理生化特征检测 蛋白质和氨基酸的代谢试验蛋白质和氨基酸的代谢试验 七、明胶液化试验

21、【原理】 某些细菌具有明胶酶，能分解明胶为多肽，多肽进一步分解为氨基酸，使明胶失去凝固力。 沙雷菌、普通变形杆菌 、奇异变形杆菌、阴沟肠杆菌等可液化明胶，肠杆菌科其他细菌很少液化明胶。细菌的检查与防治原则细菌的生理生化特征检测细菌的生理生化特征检测碳源和氮源利用试验碳源和氮源利用试验 一、枸橼酸盐利用试验 【原理】 细菌能利用铵盐和枸橼酸盐作为唯一氮源和碳源时，则可在枸橼酸盐培养基上生长，并分解枸橼酸盐为碳酸盐，使培养基变为碱性，指示剂（溴麝香草酚蓝）由绿色变为深蓝色者为枸橼酸盐（柠檬酸盐）利用试验阳性，若细菌不能利用枸橼酸盐作为碳源时，则细菌不能生长，培养基不变颜色（仍为绿色），为橼酸盐利用

22、试验阴性。 用于肠杆菌科的鉴定：克雷伯菌属、沙门菌属常为阳性细菌的检查与防治原则C -枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验利用枸橼酸盐生长 +不能利用 - - +细菌的检查与防治原则IMViC试验试验 大肠埃希菌 + + - - 产气杆菌 - - + +细菌的检查与防治原则细菌的生理生化特征检测细菌的生理生化特征检测呼吸酶类试验一、氧化酶试验 【原理】 原理：氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C氧化，再由氧化型细胞色素C使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物。试剂：1盐酸四甲基对苯二胺或1盐酸二甲基对苯二胺。方法：常用

23、方法有三种；1）菌落法：直接滴加试剂于被检菌菌落上。2）滤纸法：取洁净滤纸一小块，沾取菌少许，然后加试剂。3）试剂纸片法：将滤纸片浸泡于试剂中制成试剂纸片，取菌涂于试剂纸上。结果：细菌在与试剂接触10秒内呈深紫色，为阳性。为保证结果的准确性，分别以铜绿假单胞菌和大肠埃希菌作为阳性和阴性对照。应用：主要用于肠杆菌科细菌与假单胞菌的鉴别，前者为阴性，后者为阳性。奈瑟菌属、莫拉菌属细菌也呈阳性反应。 注意事项：1）试验时应避免接触含铁物质，以免出现假阳性。2）试剂在空气中易于氧化，故应经常更换新试剂。细菌的检查与防治原则细菌的生理生化特征检测细菌的生理生化特征检测呼吸酶类试验呼吸酶类试验 二、过氧化

24、氢酶试验 【原理】 有些细菌具有过氧化氢酶，能分解过氧化氢，释放出初生态氧，生成氧分子而出现气泡。 用于革兰阳性球菌的鉴别，葡萄球菌和微球菌为阳性，链球菌和肠球菌为阴性，肠球菌多假阳性。 注意事项： 1）做触酶试验不宜用血琼脂平板上的菌落，因红细胞内含有触酶，会出现假阳性反应。 2)做此实验一定要用阳性及阴性菌株做对照。细菌的检查与防治原则细菌的生理生化特征检测细菌的生理生化特征检测呼吸酶类试验呼吸酶类试验三、硝酸盐还原试验三、硝酸盐还原试验 （1）原理：硝酸盐还原反应包括两个过程：一是在合成过程中，硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨，再由氨转化为氨基酸和细胞内其他含氮化合物；二是在分解代谢过程中，硝酸

25、盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体。能使硝酸盐还原的细菌从硝酸盐中获得氧而形成亚硝酸盐和其他还原性产物。但硝酸盐还原的过程因细菌不同而异，有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐，如大肠埃希菌；有的细菌则可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；有的细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮，如假单胞菌等。硝酸盐还原试验系测定还原过程中所产生的亚硝酸。 （2）培养基：硝酸盐培养基。 （3）试剂：甲液（对氨基苯磺酸0.8g+5mol/L醋酸lOOml；乙液（-奈胺0.5g + 5mol/L醋酸lOOml）。 （4）方法：被检菌接种于硝酸盐培养基中，于35培养l4d.将甲、乙液等量混合后（约0.1m1）加入培养

26、基内，立即观察结果。 （5）结果：出现红色为阳性。若加入试剂后无颜色反应，可能是：硝酸盐没有被还原，试验阴性；硝酸盐被还原为氨和氮等其他产物而导致假阴性结果，这时应在试管内加入少许锌粉，如出现红色则表明试验确实为阴性。若仍不产生红色，表示试验为假阴性。 若要检查是否有氮气产生，可在培养基管内加一小倒管，如有气泡产生，表示有氮气生成。 （6）应用：本试验在细菌鉴定中广泛应用。肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐；铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等假单胞菌可产生氮气；有些厌氧菌如韦荣球菌等试验也为阳性阳性阴性细菌的检查与防治原则细菌的生理生化特征检测细菌的生理生化特征检测DNA酶试验酶试验 【原理】

27、 DNA酶可使DNA长链水解成几个单核苷酸，组成寡核苷酸链。DNA长链可被酸沉淀，而水解后形成的寡核苷酸则溶于酸，故于DNA琼脂平板上加入盐酸后，可在菌落周围形成透明环。金黄色葡萄球菌、沙雷氏菌、变形杆菌阳性 细菌的检查与防治原则细菌的生理生化特征检测细菌的生理生化特征检测 抑菌试验抑菌试验1Optochin敏感试验 (1)原理：Optochin(奥普托欣)是盐酸乙基氢化羟基奎宁的商品名。对肺炎链球菌有特异抑制作用，其作用机制可能是干扰叶酸生物合成作用，而对其它链球菌则无此作用。(2)方法：用棉拭子将待检菌的肉汤培养物均匀涂布于血琼脂平板上，贴上一张含5g奥普托欣纸片，置烛缸或二氧化碳孵箱，3

28、5 孵育1824h，观察结果。(3)结果：抑菌圈直径大于14mm为敏感，小于或等于 14mm为阴性。(4)应用：主要用于肺炎链球菌（敏感）与其它链球菌（耐药）的鉴别。细菌的检查与防治原则 2杆菌肽敏感试验 (1)原理：A群链球菌对杆菌肽几乎是100%敏感，而其它群链球菌对杆菌肽通常耐药。故此试验可对链球菌进行鉴别。(2)方法：用棉拭子将待检菌的肉汤培养物均匀涂布于血琼脂平板上，稍干后贴一张含0.04U的杆菌肽纸片，置35 孵育1824h，观察结果。(3) 结果：抑菌圈直径大于10mm为敏感，小于10mm为耐药。(4)应用：主要用于A群与非A群链球菌的鉴别。从临床分离的菌株中有5%15%非 A群

29、链球菌也对杆菌肽敏感，如6%的B群链球菌、7.5%的C群链球菌和G群链球菌等。细菌的检查与防治原则细菌的生理生化特征检测细菌的生理生化特征检测抑菌试验抑菌试验3 O/129试验(1)原理：原理：O/129（2，4二氨基二氨基-6，7-二异丙基喋啶）能抑制弧菌属、发光杆菌属和邻单胞菌属细菌生二异丙基喋啶）能抑制弧菌属、发光杆菌属和邻单胞菌属细菌生长，而气单胞菌属和假单胞菌属细菌则耐药。长，而气单胞菌属和假单胞菌属细菌则耐药。(2)方法：用棉拭子将待检菌菌悬液均匀涂布于碱性琼脂平板上，将方法：用棉拭子将待检菌菌悬液均匀涂布于碱性琼脂平板上，将10g/片及片及150g/片的片的O/129诊断纸诊断纸

30、片贴于平板上，置片贴于平板上，置35孵育孵育1824h，观察结果。，观察结果。(3)结果：出现抑菌圈者表示敏感，无抑菌圈者为耐药。结果：出现抑菌圈者表示敏感，无抑菌圈者为耐药。(4)应用：主要用于弧菌属、邻单胞菌属与气单胞菌属的鉴别，弧菌属和邻单胞菌属菌为敏感，气单胞应用：主要用于弧菌属、邻单胞菌属与气单胞菌属的鉴别，弧菌属和邻单胞菌属菌为敏感，气单胞菌属菌为耐药。其它菌属有发光杆菌属为敏感，假单胞菌属为耐药。菌属菌为耐药。其它菌属有发光杆菌属为敏感，假单胞菌属为耐药。4、新生霉素敏感试验、新生霉素敏感试验原理：表皮葡萄球菌对新生霉素敏感；腐生葡萄球菌对新生霉素耐药原理：表皮葡萄球菌对新生霉素

31、敏感；腐生葡萄球菌对新生霉素耐药培养基：培养基：MH琼脂琼脂方法：同纸片法药敏方法：同纸片法药敏 5ug/片片结果：抑菌环直径结果：抑菌环直径16mm敏感；敏感；16mm耐药耐药意义：区别表皮葡萄球菌与腐生葡萄球菌意义：区别表皮葡萄球菌与腐生葡萄球菌细菌的检查与防治原则细菌的生理生化特征检测细菌的生理生化特征检测其他试验其他试验1、凝固酶试验：、凝固酶试验： 【原理原理】致病性葡萄球菌可产生两种凝固酶。一种是结合凝固酶，结合在细胞壁上，使血浆中的纤维蛋白原变成纤维蛋白而附着于细菌表面，使细菌发生凝集：可用玻片法测出。另一种是分泌至菌体外的游离凝固酶。作用类似凝血酶原物质，可被血浆中的协同因子激

32、活变为凝血酶样物质，而使纤维蛋白原变成纤维蛋白，从而使血浆凝固，可用试管法测出。致病性葡萄球菌；金黄色葡萄球菌多阳性细菌的检查与防治原则细菌的生理生化特征检测细菌的生理生化特征检测 其他试验其他试验3、CAMP试验： 【原理】B群链球菌能产生CAMP因子，可促进葡萄球菌的B-溶血素溶解红细胞的活性，因此在两菌（B群链球菌和葡萄球菌）的交界处溶血力增加，出现矢形（半月形）的溶血区。在链球菌中，只有B群链球菌CAMP试验阳性，故可作为特异性鉴定。【方法】 ：在羊血或马血琼脂平板上，先以-溶血的金黄色葡萄球菌划一横线接种。再将待检菌与前一划线作垂直接种，两者应相距1cm，于35孵育1824h，观察结

33、果。每次试验应做阴阳性对照。 金葡金葡B链链细菌的检查与防治原则4、胆汁溶菌试验：、胆汁溶菌试验： 【原理原理】胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌，可能是由于胆汁降低细胞膜表面的张力，使细胞膜破损或使菌体裂解；或者是由于胆汁加速了肺炎链球菌本身自溶过程，促使细菌发生自溶。主要用于肺炎链球菌与甲型链球菌的鉴别，前者阳性，后者阴性。 方法方法 1）平板法：取10去氧胆酸钠溶液一接种环，滴加于被测菌的菌落上，置3530min后观察结果。 2）试管法：被检菌培养物2支，各0.9ml，分别加入l0去氧胆酸钠溶液和生理盐水（对照管）0.1ml，摇匀后置35水浴1030min，观察结果结果：结果：平板法以“菌落消失

34、”判为阳性；试管法以加胆盐的培养物变透明，而对照管仍“混浊”判为阳性。 应用：应用：主要用于肺炎链球菌与甲型链球菌的鉴别，前者阳性，后者阴性。 细菌的检查与防治原则毒素测定毒素测定 1、内毒素的检测对注射液和生物制品采用家兔发热法，即将可疑标本注射进家兔的静脉中，观察有无发热反应；对临床标本采用鲎试验。鲎系海边栖生的一种大型节肢动物,属蜘蛛纲。其多功能血细胞(变形细胞)的溶解物中含有凝固酶原和凝固蛋白原，在极微量内毒素(0.0005vg/ml)存在时，可激活凝固酶原使凝固蛋白成凝胶状态。本试验即利用此原理测定血液或其他样品中的微量内毒素。 细菌的检查与防治原则毒素测定毒素测定 1、外毒素的检测

35、1）生物学检测：选用敏感动物，根据可疑毒素的作用特点进行接种。2）免疫学测定：双向琼脂扩散、琼脂扩散法、酶联免疫吸附试验、反向血凝等。3）毒素编码基因的测定：可用探针杂交、PCR等测定一些外毒素的编码基因。细菌的检查与防治原则抗原测定抗原测定 1、凝集试验 1）玻片法凝集试验： 2）胶乳凝集法： 3）协同凝集试验： 4）反向间接血凝试验细菌的检查与防治原则细菌的检查与防治原则细菌的检查与防治原则细菌的检查与防治原则 2、荚膜肿胀试验：有荚膜的肺炎球菌，当与相应的抗血清反应时荚膜将明显增宽。 3、免疫荧光技术 1）直接法 2）间接法 4、其他方法：酶联免疫吸附试验、放射免疫、发光免疫测定等细菌的

36、检查与防治原则2022-2-2866免疫荧光技术细菌的检查与防治原则2022-2-2867酶联免疫吸附测定细菌的检查与防治原则基因检测基因检测通过基因型对微生物进行鉴定的方法日渐得到人们的认可。与传统的表现型方法检测相比，基因鉴定更具有特异性，并且使不同生命体之间的差异更加量化、标准化。常用技术有核酸杂交、核酸扩增和生物芯片。1、细菌种属的鉴定常采用DNAG+Cmol含量测定、全细胞DNA-DNA杂交和16SrRNA同源性分析等技术。其中16SrRNA具有高度保守性，适合用于细菌的分类和鉴定。2、细菌种属特异基因某些基因为细菌种特有或属共有，通过对这些基因的检测可以鉴定细菌的种或属。细菌的检查

37、与防治原则血清学检测血清学检测当细菌通过各种途径感染免疫功能正常的机体时，机体免疫系统经过免疫应答产生抗体和致敏淋巴细胞及细胞因子。用免疫学方法可以测定这些抗体的滴度，用于感染的辅助诊断。（一）特异性抗体测定1、直接凝集试验2、胶乳凝集试验（二）非特异性凝集素的测定1、冷凝集试验由肺炎支原体感染引起的原发性非典型性肺炎患者的血清中常含有较高的寒冷红细胞凝集素，简称冷凝集素，它能与患者自身红细胞或“O”型人红细胞于4条件下发生凝集，在37时又呈可逆性完全散开。 2、异嗜性凝集试验传染性单核细胞增多症患者血清中常可出现一种能凝集异种动物（如绵羊）红细胞的抗体，称为嗜异性抗体，这种异嗜性凝集反应称为

38、【血清的异嗜性凝集反应】3、费梅毒螺旋体血清试验4、外斐试验细菌的检查与防治原则致病菌的检验程序致病菌的检验程序标本标本直接涂片染色镜检直接涂片染色镜检分离培养与鉴定分离培养与鉴定病原菌抗体检测病原菌抗体检测 其它检测其它检测形态、结构、形态、结构、染色性染色性涂片涂片镜检镜检菌落菌落特征特征生化生化鉴定鉴定药敏药敏试验试验血清学血清学鉴定鉴定直接凝集反应直接凝集反应协同凝集协同凝集免疫荧光免疫荧光对流免疫电泳对流免疫电泳酶免疫测定酶免疫测定免疫印迹免疫印迹细菌代谢产物细菌代谢产物（气相色谱）（气相色谱）细菌核酸细菌核酸（PCR）噬菌体分离噬菌体分离细菌素测定细菌素测定分子生物学技术分子生物学

39、技术动物动物试验试验细菌的检查与防治原则细菌的鉴定细菌的鉴定1、传统表型鉴定法 通过平板上分离获得的单个菌落，观察菌落特点、染色观察形态、生理生化特征、血清凝集试验和抗生素的抗菌谱等表型特征，根据细菌双歧索引表或表格法将细菌鉴定到种的水平。2、细菌表型数值鉴定 在细菌的鉴定过程中有许多生理生化特征需要观察，随着生化反应管的微型化、生化反应结果计算机化，形成了细菌表型数值鉴定系统，通过编码技术将生化反应的符号模式转换成数学模式，同时将标准菌株的生化反应也转换为数学模式，给每种细菌的反应模式赋以一组数码，编成数码检索本。通过对未知菌生化反应结果转录成数字编码，查阅数据库或数码检索本，将数字编码转换

40、成细菌名。不同的鉴定系统有不同的生化反应，需要建立不同的反应鉴定系统。细菌的检查与防治原则数字编码鉴定 【具体内容】： 是将鉴别细菌的各种生化反应微量化与综合系列化，将各种生化反应培养基分装在微量板或微量管内，组成系列试剂；操作时，把持检细菌纯培养物接种于每个微量孔或微量管内，经一定温度和时间培养后，再加入指示剂或直接根据顔色变化得出生化反应结果，将结果进行编码。号码编出后，输入电脑或通过编码本，找出与该号码相对应的细菌名称，便可作出初步鉴定。细菌的检查与防治原则2022-2-28733、细菌细胞构成物质的分析 细菌细胞的构成成分中有许多成分比较固定，如脂肪酸、单糖、酶等。可以用不同的技术方法

41、进行分析，得到细菌的鉴定。细菌的检查与防治原则菌群分析菌群分析正常情况下肠道菌群在体内与外部环境保持着动态平衡，并对人体健康起着重要作用。如果这种平衡在某些情况下被打破，便形成肠道菌群失调（ID），其表现为肠道菌群在种类、数量、比例、定位和生物学特性上的改变。菌群分析是肠道菌群失调的主要检查方法，定性分析以直接涂片法为主，定量检查以需氧菌和厌氧菌培养为主。1、直接涂片通过显微镜观察革兰染色粪便涂片的菌群像，估计细菌总数、球菌与杆菌的比例，革兰阳性菌与阴性菌的比例及有无特殊形态的细菌增多。2、培养法是通过接种一定重量新鲜粪便于各种不同的培养基上，对生长出来的菌落进行菌种鉴定及计数，对肠道菌群各菌

42、种进行定量培养。将每种细菌的数量与参考值进行比较，或计算双歧杆菌 /肠杆菌（B/E）值，即可评估肠道菌群的状况。 B/E 1，表示肠道菌群组成正常。B/E1，表示肠道菌群失调，此值越低，提示菌群失调越严重。细菌的检查与防治原则预防预防 感染病的预防措施分为： 1）疫情未出现时的预防措施； 2）疫情出现后的防疫措施； 3）治疗性预防措施 一、预防性措施（疫情未出现之前的经常性预防工作）（一）环境控制：维护生态平衡，改善饮用水条件，实行饮水消毒；搞好粪便、污水排放和垃圾无害化处理工作；建立健全医院及致病性微生物实验室的规章制度，防止致病性微生物扩散和院内感染；贯彻食品卫生法及消毒、杀虫、灭鼠工作。

43、（二）预防接种：将生物制品接种到人体内，使机体产生对感染性疾病的特异性免疫力，提高人群免疫水平，预防感染性疾病的发生与流行。1、预防接种的种类细菌的检查与防治原则 是指以免疫原物质接种人体，使人体产生特异性免疫，免疫原物质包括 处理过的病原体或提取的病原体成分及类毒素作用作用：特异性预防：特异性预防1）人工自动免疫）人工自动免疫 artificial active immunity主要生物制品：主要生物制品：死疫苗：将免疫原性强的活菌株灭活制成，或提取菌体成分制成死疫苗：将免疫原性强的活菌株灭活制成，或提取菌体成分制成多糖体菌苗。优点：勿需减毒，生产过程简单，含防腐剂，易于保多糖体菌苗。优点：

44、勿需减毒，生产过程简单，含防腐剂，易于保存；缺点：免疫效果较差，接种量大。存；缺点：免疫效果较差，接种量大。活疫苗：由免疫原性强而毒力弱的活菌株制成。优点：能在体内活疫苗：由免疫原性强而毒力弱的活菌株制成。优点：能在体内增殖，刺激机体时间长，接种量小，接种次数少。缺点：易污染，增殖，刺激机体时间长，接种量小，接种次数少。缺点：易污染，需冷藏保存。需冷藏保存。类毒素类毒素亚单位疫苗亚单位疫苗DNADNA重组疫苗重组疫苗核酸疫苗核酸疫苗治疗性疫苗治疗性疫苗细菌的检查与防治原则免疫血清：用毒素免疫动物取得的含特异性免疫血清：用毒素免疫动物取得的含特异性抗体的血清，主要用于治疗，也可紧急预防。抗体的血

45、清，主要用于治疗，也可紧急预防。2 2）人工被动免疫）人工被动免疫 artificial passive immunity 以含抗体的血清或制剂接种人体，使人体获得现以含抗体的血清或制剂接种人体，使人体获得现成的抗体而受到保护。获得特异性免疫，作用及时。成的抗体而受到保护。获得特异性免疫，作用及时。作用：作用：治疗，紧急预防治疗，紧急预防主要生物制品免疫球蛋白（丙种球蛋白、胎盘球蛋白）由人免疫球蛋白（丙种球蛋白、胎盘球蛋白）由人血液或胎盘提取的丙种球蛋白制成，具有一定血液或胎盘提取的丙种球蛋白制成，具有一定的抗体种类和水平。的抗体种类和水平。 被动自动免疫：用于疫情发生时，机体无免被动自动免疫

46、：用于疫情发生时，机体无免疫保护者的一种免疫方法。兼有被动及主动免疫保护者的一种免疫方法。兼有被动及主动免疫的长处，但只能用于少数感染性疾病。疫的长处，但只能用于少数感染性疾病。细菌的检查与防治原则预防性措施2、计划免疫 计划免疫是根据传染病疫情监测结果和人群免疫水平的分析，按照科学的免疫程序，有计划的使用疫苗对特定人群进行预防接种，最终达到控制和消灭相应感染性疾病的目的。计划免疫的程序是根据有关感染性疾病的流行病学特征、免疫因素、卫生设施等条件，由国家对不同年（月）龄儿童接种何种疫苗作统一规定。免疫程序的内容包括：初种起始月龄、接种生物制品的间隔时间、加强免疫时间和年龄范围。（三）预防接种效

47、果考核预防接种效果考核包括：免疫学效果评价:观察接种者免疫指标的变化状况流行病学效果评价：不良反应观察；试验组与对照组的发病率对比分析。（四）防护措施：在某些疾病的流行季节，对易感者采取一定的防护措施，以防止受感染。（五）携带者的检查措施：许多感染性疾病均有携带者，其危害程度不同，平常应按各地区的病种流行情况，在该地采取有目的地检查携带者：通过普通检查发现；从恢复期患者、密切接触者中追踪发现病原携带者；对特殊职业，如托幼机构、饮食行业、水厂工作人员定期检查。（六）健康教育：经常性的健康教育，养成良好的卫生习惯对预防感染性疾病非常重要。细菌的检查与防治原则防疫性措施（疫情出现后，采取的防止扩散、

48、尽快平息的措施）（一）对患者的措施（关键在在发现、早诊断、早报告、早隔离）1、早发现、早诊断2、传染病报告：疫情报告是国家的法定制度，迅速、全面、准确地做好传染病报告是每个医务工作者的法定职责。1）报告的种类 法定报告的病种有：甲类传染病：鼠疫、霍乱；乙类传染病：传染性非典型肺炎、艾滋病、病毒性肝炎、脊髓灰质炎、人感染高致病性禽流感、麻疹、流行性出血热、狂犬病、流行性乙型脑炎、登革热、炭疽（肺炭疽）、细菌性和阿米巴性痢疾、肺结核、伤寒和副伤寒、流行性脑脊髓膜炎、百日咳、白喉、新生儿破伤风、猩红热、布鲁氏菌病、淋病、梅毒、钩端螺旋体病、血吸虫病、疟疾、甲型流感（251）丙类传染病：流行性感冒、流

49、行性腮腺炎、风疹、急性出血性结膜炎、麻风病、流行性和地方性斑疹伤寒、黑热病、包虫病、丝虫病、手足口病，除霍乱、细菌性和阿米巴性痢疾、伤寒和副伤寒以外的感染性腹泻病 （101）其他传染病：卫生部决定列入乙类、丙类传染病管理的其他传染病（乙类：甲型流感；丙类：手足口病）省级人民政府决定按照乙类、丙类管理的其他地方性传染病和其它暴发、流行或原因不明的传染病 细菌的检查与防治原则防疫性措施2）报告人：凡从事医疗、保健、卫生防疫工作人员均为法定报告人。 报告方式：传染病疫情信息实行网络直报，没有条件实行网络直报的医疗机构，在规定时限内将传染病报告卡报告及时报至属地有直报能力的乡镇卫生院、社区卫生服务中心或县（区）级疾病预防控制机构，由其代为直报，同时，应对报出的报告卡进行登记，每月至少与代报单位核对1次，并签字确认乡镇卫生院和社区卫生服务中心医疗机构负责收集和报告本区域内卫生室、个体诊所、个体开业医生传染病信息军队医疗卫生机构向社会公众提供医疗服务的，发现传染病疫情时，应当按照规定向属地的县级疾病