药物分析问答

1、药物分析问答鉴别试验的条件及方法验证 （一）溶液的浓度 溶液的浓度主要指被鉴别物质的浓度，其大小影响结果的判断。 （如化学法中要观察沉淀、颜色；UV法中max, A, E1%1cm)（二）溶液的温度 温度过高可使产物分解，导致颜色变浅，甚至观察不到结果。（三）溶液的酸碱度 使反应物处于活化状态、反应产物处于稳定和易观察状态。（四）试验时间 有机化合物的化学反应较慢，需要一定的反应时间和条件。鉴别方法的验证 专属性、耐用性一般杂质 指在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质，如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、砷盐、重金属等。特殊杂质 指在个别药物的生产和贮藏过程中引入的杂质

2、。药典中除纯度检查外，还包括有效性、均匀性、安全性检查氯化物检查法1）加HNO3目的 A、AgCl 不溶于HNO3可在HNO3中产生最好的乳化 浑浊； B、加速AgCI的产生； C、防止产生Ag20、Ag3PO4、 Ag2CO3因为 这些溶于HNO3这样就可以防止CO32-、OH-、 PO43-干扰。硫酸盐检查法（1）加HCI 要适量,防止BaCO 3 ,Ba 3（PO 4 ）2 等 的生成。2）本法适宜比浊浓度为0.10.5 mgSO4 2- /50 ml。 （3）BaCl2 试液浓度在10% 25% 范围内。 （4）供试液如需滤过，应先用盐酸使成酸性的蒸馏水洗净滤纸中硫酸盐。 （5）有色供

3、试品溶液的处理及其他注意事项与氯化物检查法相同。铁盐检查法硫氰酸盐法1）加HCl防止铁盐水解 2）加过硫酸铵 （NH4）2S2O8 氧化剂，氧化供试品中 F2+生成 Fe3+ ; 防止光线使硫氰酸铁还原或分解退色。 3）有干扰要排除。砷盐检查法1、 五价砷生成砷化氢的速度慢，加入还原剂酸性氯化亚锡与碘化钾将其还原为三价，可加快反应速度。2、氧化生成的碘与氯化亚锡反应生成碘离子，碘离子与锌离子反应生成稳定配离子，可加快反应速度。（减少生成物）3、氯化亚锡与碘化钾可抑制锑的干扰。4、醋酸铅棉花用于吸收硫化氢，应干燥。5、检砷时，只可改变供试液的量，而不能改变标准液的量。（与其他检查不一样）6、氢气

4、发生的速度过慢或过快，都会影响砷化氢的逸出速度，应控制条件。7、供试品为硫化物，亚硫酸盐，硫代硫酸盐等，因生成H2S，SO2与溴化汞生成硫化汞或汞干扰，应用硝酸先氧化为硫酸盐再反应。8、高铁盐应先还原为亚铁盐。因高铁盐要消耗还原剂，还能氧化砷化氢。9、强氧化剂或酸性下能产生强氧化剂者，先用硫酸分解。TLC和HPLC的比较1、 固定相和流动相HPLC:（1）线速度恒定或采用设定的梯度极性洗脱；（2）固定相和流动相性质影响峰形和分离度；（3）流动相选择受限；且要求较高；（4）定距洗脱色谱，并非所有组分均能被检测；（5）柱子反复使用。TLC:（1）薄层板各处流量不同；（2）吸附剂性质和流动相毛细管运

5、动情况影响色谱分离效率；（3）流动相选择限制小；（4）定时展开色谱，色谱图上所有组分均能被检测；（5）薄层板一次使用，分离过程不发生交叉污染，多样品同时 分离。2、样品的预处理HPLC:预处理复杂而严格TLC:样品预处理较简单3、进样HPLC:对溶样溶剂和样品浓度要求严格 可自动进样，每次一个样品TLC:溶样溶剂可以任意选择，点样体积是唯一需准确控制 的参数 可自动点样，每次多个样品b4、色谱分离4、色谱分离HPLC:（1）每次进样一个，分析和平衡时间长；（2）恒组分洗脱适于极性范围窄的样品；（3）梯度洗脱适于极性范围宽的样品并需要更多时间；（4）若组分吸附则无法检测且污染柱子；（5）反相色谱

6、法常用。TLC:（1）同时分析多个样品，方便灵活；（2）适于各类物质的分离；（3）正相色谱占主导；（4）对复杂样品分离能力好。定量分析方法的特点（一）容量分析法（滴定法）的特点 仪器廉价易得； 操作简单、快速； 测定结果准确（RSD0.2%）； 方法耐用性高； 仪器普通易得； 专属性较差。紫外-可见分光光度法（200 nm760 nm) 1. 朗伯-比耳定律 A = Ecl 灵敏度高，可达10-4g/ml 10-7g/ml 2. 特点 准确度高，RSD为2% 5 % 仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用 范围广。 专属性差荧光分光光度法灵敏度高，可达10-10g/ml 10-12g/ml 在低

7、浓度进行测定，防止F与C不成正比及自熄灭作用 1. 特点 用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减 灵敏度高，但干扰因素多。 制备荧光衍生物，可提高其灵敏度和选择性。 用样品量少，操作简单，方法快速，应用范围较广。苯巴比妥特殊杂质检查酸度乙醇溶液的澄清度 中性或碱性 物质取本品1.0g，置分液漏斗中，加氢氧化钠试液10ml溶解后，加水 5ml与乙醚25ml，振摇1min，分取醚层，用水振摇洗涤3次，每次5ml，取醚液经干燥滤纸滤过，滤液置105恒重的蒸发皿中，蒸干，在105干燥至恒重，遗留残渣不得超过3mg。维生素A第一法 第二法测定对象 维生素A醋酸酯 维生素A醇方法 直接取样，测定

8、皂化提取，测定溶剂 环己烷 异丙醇lmax 328 nm 325 nm测定波长 5个 4个换算因数 1900 1830气相计算一）内酰胺类抗生素聚合物 分子排阻色谱法分离原理：凝胶色谱柱的分子筛机制。固定相：葡聚糖凝胶（sephadex）和聚丙烯 酰胺凝胶（sepharose）流动相：水溶液或缓冲液（可加适量有机溶 剂30）流 速：0.51.0ml/min自身对照外标法： 利用特定条件下-内酰胺类抗生素可以缔合成与高分子杂质有相似色谱行为的缔合物，在Kav0处表现为单一的色谱峰。以药物自身为对照品，测定其在特定条件下缔合时的峰响应指标，然后改变色谱条件，测定样品，记录样品色谱图中Kav0处的高

9、分子杂质峰的响应指标，按外标法计算，即得样品中高分子杂质相当于药物本身的相对含量。2）Molisch反应 具有五碳糖或六碳糖的氨基糖苷类抗生素经酸水解后，在盐酸（或硫酸）作用下脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，加入 萘酚（红紫色）或蒽酮（蓝紫色）（3）Elson-Morgan反应 药物水解产生的N-甲基-L-葡萄糖胺（衍生物）在碱性溶液中与乙酰丙酮缩合成吡咯衍生物，再与对二甲氨基苯甲醛的酸性醇溶液反应，生成樱桃红色缩合物。4）麦芽酚反应链霉素的特征反应 链霉素在碱性溶液中，链霉糖经分子重排使环扩大形成六元环，然后消除N-甲基葡萄糖胺，再消除链霉胍，生成-甲基-羟基-吡喃酮（麦芽酚），该化合物与Fe3+

10、在弱酸性溶液中形成红紫色配位化合物。（5）坂口反应链霉胍的特有反应 链霉素的水解产物链霉胍与NaBrO2反应得产物1；8-羟基喹啉（-萘酚）也和NaBrO2反应得产物2。产物1和产物2再相互作用生成橙红色化合物。凝胶色谱法：利用凝胶的分子筛作用，让药物分子自由的进入到凝胶颗粒内部，而高分子杂质被排阻的原理进行的。故此大分子则先流出色谱柱，小分子后出峰而得以分离。制剂检查分为： a、杂质检查 b、剂型检查 c、安全性检查2、含量均匀度检查法 片剂、胶囊剂或注射用无菌粉末,每片（个）标示量不大于25mg取供试品10片（个）,照各品种项下规定的方法,分别测定每片（个）以标示量为100的相对含量X求其

11、均值X 标准差S 100- X =A生物制品(biologicals) 以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料，应用传统技术或现代生物技术制成，用于人类疾病的预防、治疗和诊断的制品ChP2010 根据生物制品的用途分类预防类： 细菌类疫苗、病毒类疫苗、联合疫苗治疗类 抗毒素及免疫血清、血液制品、细胞因子及DNA重组技术制品和单克隆抗体诊断类 体内诊断类、体外诊断类根据材料、制法或用途分类：（一）疫苗类药物（二）抗毒素及抗血清类药物（三）血液制品（四）重组DNA制品生物制品的质量要求1. 安全性 使用安全，副作用小。生物制品不应存在不安全因素，否则使用后不仅收不到应有的效果，反而会对使用者

12、造成危害。2. 有效性 使用后能产生相应的效力 预防制品使用后，对控制疫情、减少发病应有明显作用，治疗制品用后应产生一定的疗效；诊断制品用于疾病诊断，结果应该可靠。3. 可接受性 制品的生产工艺、储运条件、成品的药效、稳定性、外观、包装、使用方法和价格是可接受的。鉴别试验免疫双扩散法（double immunodiffusion assay）可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散，彼此相遇，在比例适当处形成沉淀线。根据沉淀线的有无、形状和位置对抗原或抗体进行定性分析，也可用于抗体的半定量检测。2. 免疫电泳法（ immunoelectrophoresis） 将供试品通过电泳分离成区带的各抗原

13、，然后与相应的抗体进行双向免疫扩散，当两者比例合适时形成可见的沉淀弧。 将沉淀弧与已知标准抗原、抗体生成的沉淀弧的位置和形状进行比较，即可分析供试品中的成分及其性质。 ChP2010收载的人血白蛋白和冻干人免疫球蛋白均采用此法3. 免疫印迹法（蛋白质印迹）（ immunoblotting） 以供试品与特异性抗体结合后，抗体再与酶标抗体特异性结合，通过酶学反应的显色，对供试品的抗原特异性进行检查。 ChP收载的重组人促红素注射液（CHO细胞）和注射用重组人干扰素1b等。4. 免疫斑点法（Dot Immunobinding Assay, DIBA ） 原理与免疫印迹法相同，但具体操作有所不同。 C

14、hP2010收载的注射用重组人干扰素2a等，均用此法。 固相酶联免疫斑点技术（ enzyme linked immunospot assay, ELISPOT ）5. 酶联免疫法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA) 安全检查对象菌毒种和主要原材料半成品（包括原液）成品内容过敏性物质检查杀菌、灭活和脱毒检查残余毒力和毒性物质检查外源性污染的检查免疫分析方法免疫分析方法放射免疫分析 放射性同位素标记的抗原（简称“标记抗原”）和非标记抗原（标准抗原或待测抗原）同时与数量有限的特异性抗体、之间发生竞争性结合（抗原抗体反应）。竞争结合反应免疫放射测定(IRM

15、A)放射核素标记在抗体上，与待测抗原结合后，用一定手段将多余抗体除去，测定复合物的放射性，其活度与待测抗原呈正相关酶联免疫分析Enzyme Immunoassay，EIA以酶作为标记物的免疫测定方法。将待测物或抗体与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。（1）直接法：用于测抗原 将待测抗原直接包被到固相载体上，孵育洗涤后加入酶标记特异抗体，孵育洗涤出去未结合的酶标记抗体后，加入底物。(2) 间接法 用于测定抗体。先将抗原包被，洗涤后加待检血清，充分漂洗后加入酶标记的抗抗体，洗后即可供显色观察。(3) 夹心法 包被抗体 待测抗原 酶联抗体只适用于二价或二价以上较大分子抗原的检测，不适用于半抗原等小分子。(4) 竞争法 可测抗原或抗体，以测抗原为例用抗体包被，加一定量的标记抗原和待检抗原混合物，两者竞争与板上的抗体结合，显色后与加未标记抗原的对照组比较，试验孔颜色显著低于对照孔者为阳性孔，待检抗原含量越高，颜色越浅，此法适于小分子抗原或半抗原的检测。(5) ABS-ELISA（Avidin Biotin syste