AYL-S7-335 粪便标本细菌学检验标准操作规程3.0

1、编写者：沈继录审核者： 批准人： 文件发放范围：微生物组文件年度审核审核者：审核者：审核者：审核者：日期：日期：日期：日期：粪便标本细菌学检验标准操作规程1目的规范粪便标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。2适用范围粪便培养。3标本3.3.1 标本类型 粪便、直肠拭子。3.2 标本采集3.2.1 自然排便采集 自然排便后，挑取其脓血、黏液部分23 g，液体粪便取絮状物23 ml，盛于灭菌容器内，或置于保存液(运送培养基)、增菌培养基中送检。3.2.2 直肠拭子 如不易获得粪便时，或排便困难病人及婴儿，可用直肠拭子采取，即以无菌棉拭用保存液或生理盐水湿润后，插入肛门内45 cm（幼儿

2、 23 cm)轻轻转动取出，插入卡一布(CaryBlair)运送培养基内或无菌容器内送检。3.2.3 粪便标本应该立即送检，室温保存不能超过2小时，如不能及时送检可以放人磷酸盐甘油(pH 7 0)或转运培养基，但不能超过24小时。培养艰难梭菌的标本保于-20以下。培养沙门菌和志贺菌的标本应放置磷酸盐甘油溶液中保存。保存弯曲杆菌和弧菌的标本，需加CaCl2(100mgL)试剂。3.3 标本拒收标准 3.3.l 粪便标本放置时间超过2小时。3.3.2 送检的粪便标本混有尿液。33 3直肠拭子未置于运送培养基中。 4试剂、仪器4.1 革兰染液、氧化酶试剂、麦康凯平板、SS平板、TCBS平板及相关生化

3、试剂等。4.2 VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡(GNI+)、革兰阴性细菌药敏卡(GNS)、革兰阳性菌鉴定卡(GPI)、革兰阳性细菌药敏卡(GPS)、真菌鉴定卡(YBC)、药敏纸片、ATB板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、C02培养箱等。4.4诊断血清。5细菌鉴定和药敏质控参见质量管理程序。6检验步骤接收标本后，立即对标本进行编号、登记。6.1 涂片检查 粪便标本因各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辨是否为病原菌。因此，粪便标本一般不作涂片检查。只有怀疑霍乱弧菌及菌群失调所致腹泻时，才作直接涂片检查(观察动力和菌群比例)。

4、6.2 培养6.2.1 沙门志贺菌培养 参见沙门菌属检验标准操作规程、志贺菌属检验标准操作规程。6.2.2 致病性大肠埃希菌培养 参见致病陛大肠埃希菌检验标准操作规程。6.2.3 霍乱弧菌培养 参见霍乱弧菌检验标准操作规程。6.2.4 副溶血弧菌培养 参见副溶血弧菌检验标准操作规程。6.2.5 小肠结肠炎耶尔森菌培养 参见耶尔森菌属检验标准操作规程。6.2.6 空肠弯曲菌培养 参见弯曲菌属检验标准操作规程。6.2.7 金黄色葡萄球菌培养 参见葡萄球菌属检验标准操作规程。6.2.8 艰难梭菌培养 取水样或黏液样粪便立即接种于环丝氨酸头孢西丁果糖琼脂(简称CCFA)平板上，并将粪便作102106稀

5、释后定量接种。35厌氧环境下培养48小时后，选择粗糙型黄色菌落，移种于葡萄糖庖肉培养基作毒素测定；同时制涂片，悬滴检查动力、革兰染色及生化鉴定。6.2.9 真菌培养 参见分枝杆菌属检验标准操作规程。6.2.10 气单胞菌和邻单胞菌的培养 参见气单胞菌属检验标准操作规程和邻单胞菌属检验标准操作规程。6.2.11 结核分枝杆菌培养 参见分枝杆菌属检验标准操作规程。7操作流程粪便或肛拭 根据临床需求需氧培养 分离致病性大SS，XLD或HE平板 分离弯曲菌 分离弧菌 肠埃希菌O15735培养1824h 观察菌落特征 Campy-BA平板，35 TCBS平板 山梨醇麦涂片，染色 微需氧培养48 h 康凯平板双糖铁或三糖铁 观察菌落特征 观察菌落特征及、 涂片、染色 涂片、染色血清学鉴定 血清学鉴定仪器或手工细菌 仪器或手工