仪器分析实验指导书

1、实验四 反相高效液相色谱法测定水产品中土霉素和四环素残留量一、 实验目的1. 了解反相高效液相色谱的组成与分离原理；2. 了解高效液相色谱仪的基本操作；3. 掌握HPLC定性、定量方法；4. 了解水产品样品的前处理方法。二、 实验原理在反相键合相色谱法中使用的是非极性键合固定相。它是将全多孔(或薄壳)微粒硅胶载体，经酸化处理后与含烷基(C8、C18)或苯基的硅烷化试剂反应，生成表面具有烷基或苯基的非极性固定相。反相色谱的分离机制有多种，但多倾向于吸附色谱的作用机制。吸附色谱的作用机制认为，溶质在固定相上的保留是疏溶剂作用的结果(即所谓的疏溶剂理论)。根据疏溶剂理论，当溶质分子进入极性流动相时，

2、即占据流动相中相应的空间而排挤一部分溶剂分子；当溶质分子被流动相推动与固定相接触时，溶质分子的非极性部分(或非极性分子)会将附着在非极性固定相上的溶剂膜挤开，直接与非极性固定相上的烷基官能团相结合(吸附)形成缔合络合物，构成单分子吸附层，而极性部分暴露在溶剂中。这也就是说溶质分子和固定相之间的“结合”，是由于溶质和极性溶剂之间的斥力造成的，而不是非极性溶质和非极性固定相之间的微弱的非极性作用力的缘故。这种疏溶剂斥力作用中可逆的，当流动相极性减弱时，这种疏溶剂斥力下降，会发生解缔，并将溶质分子释放而被洗脱下来。所以，流动相的极性越强，缔合作用就越强。显然，烷基键合固定相对每种溶质分子缔合作用和解

3、缔作用之差，就决定了溶质分子在色谱过程中的保留值。三、 仪器与试剂HPLC色谱仪（DAD检测器）、分析天平（0.0001g）、均质器、固相萃取仪、高速离心机等。乙腈：色谱级；土霉素、四环素：标准品；磷酸氢二钠、磷酸、高氯酸、甲醇、EDTA-2Na、正己烷：分析级；水：超纯水；微孔滤膜：0.45m。四、 实验步骤1、 色谱条件色谱柱：反相C18柱；检测器：PDA、检测波长355nm；柱温：37；流速：1.0mL/min；进样量：30L；流动相：乙腈：磷酸二氢钠（0.01mol/L）=26：74。2、 标准溶液的配制0.01mol/L磷酸二氢钠溶液：称取1.56g（准确至0.01g）磷酸二氢钠（N

4、aH2PO4·2H2O）溶于蒸馏水中，定容至1000mL，以磷酸调pH至2.5，经微孔滤膜（0.45m）过滤后备用。土霉素、四环素标准溶液：分别称取土霉素、四环素各0.01g，分别用于0.01mol/L磷酸二氢钠溶液中，定容至100.0mL，此标准溶液每毫升含土霉素、四环素100g。土霉素、四环素标准使用溶液：移取上述标准溶液10.0mL，定容至100.0mL，得土霉素、四环素浓度分别为10g/mL的标准使用溶液。以上述标准溶液配制系列标准使用浓度：0.05、0.10、0.20、0.25、0.50、1.0g/mL。此标准使用溶液需现配现用。3、 样品处理鱼去鳞、去皮沿背脊取肌肉；虾去

5、头、去壳取可食肌肉部分；蟹、甲鱼等取可食部分；样品切为不大于0.5×0.5×0.5cm的小块后混匀。称取5.000g±0.001g样品，置于50mL离心管中，加入0.5%高氯酸溶液10mL（水溶性蛋白含量高的样品，用1.0%高氯酸溶液），用均质器均质30s，于震荡器上振荡提取30min，以4000r/min离心10min，取上清液于50mL试管中，向离心管中的残渣再加入0.5%高氯酸溶液5mL，重复操作一次，合并上清液。加入1mL正己烷，振荡1min后，离心，除去正己烷相；再加入1mL正己烷，振荡1min后，离心，除去正己烷相。水相用ODS-C18柱（预先用5mL

6、甲醇、2mL5.0%乙二胺四乙酸二钠溶液、5mL实验用水洗过）预处理，用10mL蒸馏水洗去杂质，以5mL甲醇洗脱，收集洗脱液，40水浴中氮气吹干，用甲醇定容至1.0mL，以微滤膜过滤，滤液备用。4、 测定1） 开机按照正确开机方式，分别开启工作站、高效液相色谱仪和检测器，并联机，预热；用流动相冲洗系统和进样环，待基线稳定。2） 建立分析方法先配置系统，empower节点中选择系统配置，建新项目和方法。3） 进样分析按照浓度有低到高的顺序测定标准系列溶液，在相同的实验条件下分别分析标准溶液和样品溶液，进样量均为30L。4） 关机测定完毕后，用100%甲醇清洗色谱柱和进样环，按照操作步骤先关闭电脑

7、后关高效液相设备，并清洗所用玻璃仪器。五、 结果处理1、 由土霉素、四环素的标准色谱图对土霉素、四环素进行定性分析。2、 根据土霉素、四环素的色谱峰面积绘制标准工作曲线。3、 有标准工作曲线和样品中土霉素、四环素的峰面积，计算滤液中的土霉素、四环素的浓度。4、 样品中土霉素、四环素的含量按下式计算：式中：X样品中抗生素含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； c样品溶液中抗生素含量，单位为微克每毫升（g/mL）； m样品质量，单位为克（g）； V样品溶液体积，单位为毫升（mL）。六、 注意事项1、 样品制备后一定要微滤后才能进样；2、 流动相进入仪器前一定要微滤和超声脱气；3、 仪器要先充分预热

8、、再用流动相冲洗系统，待基线稳定后再进样。七、 思考题1、 流动相使用前为什么要脱气？2、 内标法和外标法定量法的优缺点是什么？实验五 HPLC法测定果汁中有机酸的含量一、 实验目的1、 了解饮料样品的前处理方法；2、 掌握果汁中有机酸种类的HPLC定性、定量方法。二、 实验原理样品经处理、离心后，样液经0.45m滤膜抽滤，以(NH4)2HPO4-H3PO4缓冲溶液（pH=2.7）为流动相，用高效液相色谱法在C18色谱柱上分离，于210nm处经紫外检测器检测。有机酸在两相中分配分离，按照其碳原子数由少到多的顺序从色谱柱中洗脱下来，用峰高或峰面积标准曲线测定有机酸的含量。三、 仪器与试剂HPLC

9、色谱仪（DAD检测器）、移液器、固相萃取仪、高速离心机等。(NH4)2HPO4、H3PO4、乙醇：分析级；柠檬酸、酒石酸、苹果酸：标准品；水：超纯水；微孔滤膜：0.45m。四、 实验步骤1、 色谱条件色谱柱：C18；检测器：PDA、检测波长210nm；柱温：30；流速：1.0mL/min；进样量：20L；流动相：0.01mol/L磷酸氢二氨，用1.0mol/L磷酸调至pH=2.70，临用前超声波脱气。2、 有机酸标准储备液的制备：称取柠檬酸、酒石酸各0.5000g；丁二酸0.1000g；用超纯水溶解后，定溶至50mL。柠檬酸、酒石酸的浓度分别为10.0mg/mL，丁二酸为2.0 mg/mL，此

10、液为标准储备液。3、 有机酸标准使用液的制备：取5.00mL标准储备液于50mL容量瓶中用超纯水稀释至刻度。柠檬酸、酒石酸的浓度分别为1.0mg/mL，丁二酸为0.2 mg/mL。4、 样品处理：准确吸取5.00mL试样（若试样中含二氧化碳应先加热除去；若试样中含有人工合成色素应先加入聚酰胺粉于70水浴中加热脱色，样液在3000r/min下离心10min，再取上清液），加入0.2mL 1mol/L磷酸，用超纯水稀释至10mL，经0.45m滤膜过滤，滤液供分析用。5、 测定（1）开机按照正确开机方式，分别开启工作站、高效液相色谱仪和检测器，并联机，预热；用流动相冲洗系统和进样环，待基线稳定。（2

11、）建立分析方法先配置系统，empower节点中选择系统配置，建新项目和方法。（3）进样分析按照浓度有低到高的顺序测定标准系列溶液，在相同的实验条件下分别分析标准溶液和样品溶液，进样量均为20L。（4）关机测定完毕后，用100%甲醇清洗色谱柱和进样环，按照操作步骤先关闭电脑后关高效液相设备，并清洗所用玻璃仪器。五、 结果计算1、 由柠檬酸、酒石酸的标准色谱图对柠檬酸和酒石酸进行定性分析。2、 根据柠檬酸、酒石酸的色谱峰面积绘制标准工作曲线。3、 有标准工作曲线和样品中柠檬酸、酒石酸的峰面积，计算滤液中的柠檬酸、酒石酸的浓度。4、 样品中柠檬酸、酒石酸的含量按下式计算：式中：X试样中有机酸的含量，

12、单位为毫克每升（mg/L）；c由标准曲线或线性回归方程中求得样液中某有机酸的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；V1试样的最后定容体积，单位为毫升（mL）；V试样为用于分析的试样体积，单位为毫升（mL）。六、 注意事项1、 样品制备后一定要微滤后才能进样；2、 流动相进入仪器前一定要微滤和超声脱气；3、 仪器要先充分预热、再用流动相冲洗系统，待基线稳定后再进样。七、 思考题流动相使用前为什么要脱气？高效液相色谱原理简介高效液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法（正相与反相）、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。 1液固色谱法 使用固体吸附剂，被分离组分在色谱柱上

13、分离原理是根据固定相对组分吸附力大小不同而分离。分离过程是一个吸附解吸附的平衡过程。常用的吸附剂为硅胶或氧化铝，粒度510m。适用于分离分子量2001000的组分，大多数用于非离子型化合物，离子型化合物易产生拖尾。常用于分离同分异构体。 2液液色谱法 使用将特定的液态物质涂于担体表面，或化学键合于担体表面而形成的固定相，分离原理是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。分离过程是一个分配平衡过程。 涂布式固定相应具有良好的惰性；流动相必须预先用固定相饱和，以减少固定相从担体表面流失；温度的变化和不同批号流动相的区别常引起柱子的变化；另外在流动相中存在的固定相也使样品的分离和收集复杂

14、化。由于涂布式固定相很难避免固定液流失，现在已很少采用。现在多采用的是化学键合固定相，如C18、C8、氨基柱、氰基柱和苯基柱。 液液色谱法按固定相和流动相的极性不同可分为正相色谱法(NPC)和反相色谱法(RPC)。 正相色谱法：采用极性固定相(如聚乙二醇、氨基与腈基键合相)；流动相为相对非极性的疏水性溶剂(烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物(如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。 反相色谱法:一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶

15、剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物。反相色谱法在现代液相色谱中应用最为广泛，据统计，它占整个HPLC应用的80%左右。 随着柱填料的快速发展，反相色谱法的应用范围逐渐扩大，现已应用于某些无机样品或易解离样品的分析。为控制样品在分析过程的解离，常用缓冲液控制流动相的pH值。但需要注意的是，C18和C8使用的pH值通常为2.57.5（28），太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱落。有报告新商品柱可在pH 1.510范围操作。 正相色谱法与反相色谱法比较表 正相色谱法 反相色谱法 固定相极性 高中 中低 流动相极性 低中 中高 组分洗脱次序 极性小先洗出 极性大先

16、洗出 从上表可看出，当极性为中等时正相色谱法与反相色谱法没有明显的界线（如氨基键合固定相）。 3离子交换色谱法 固定相是离子交换树脂，常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架，在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基（称阳离子交换树脂）或季氨基（阴离子交换树脂）。被分离组分在色谱柱上分离原理是树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换，根据各离子与离子交换基团具有不同的电荷吸引力而分离。 缓冲液常用作离子交换色谱的流动相。被分离组分在离子交换柱中的保留时间除跟组分离子与树脂上的离子交换基团作用强弱有关外，它还受流动相的pH值和离子强度影响。pH值可改变化合物的解离程度，进而

17、影响其与固定相的作用。流动相的盐浓度大，则离子强度高，不利于样品的解离，导致样品较快流出。 离子交换色谱法主要用于分析有机酸、氨基酸、多肽及核酸。 4离子对色谱法 又称偶离子色谱法，是液液色谱法的分支。它是根据被测组分离子与离子对试剂离子形成中性的离子对化合物后，在非极性固定相中溶解度增大，从而使其分离效果改善。主要用于分析离子强度大的酸碱物质。 分析碱性物质常用的离子对试剂为烷基磺酸盐，如戊烷磺酸钠、辛烷磺酸钠等。另外高氯酸、三氟乙酸也可与多种碱性样品形成很强的离子对。 分析酸性物质常用四丁基季铵盐，如四丁基溴化铵、四丁基铵磷酸盐。 离子对色谱法常用ODS柱（即C18），流动相为甲醇-水或乙

18、腈-水，水中加入310 mmol/L的离子对试剂，在一定的pH值范围内进行分离。被测组分保时间与离子对性质、浓度、流动相组成及其pH值、离子强度有关。 5排阻色谱法 固定相是有一定孔径的多孔性填料，流动相是可以溶解样品的溶剂。小分子量的化合物可以进入孔中，滞留时间长；大分子量的化合物不能进入孔中，直接随流动相流出。它利用分子筛对分子量大小不同的各组分排阻能力的差异而完成分离。常用于分离高分子化合物，如组织提取物、多肽、蛋白质、核酸等。高效液相色谱仪标准操作规程1 目的 建立高效液相色谱仪（Waterse2695-2998 Alliance）标准操作规程，为了使操作者操作高效液相色谱仪（Wate

19、rse2695-2998 Alliance）更规范，保证结果更精确。2 范围 适用于高效液相色谱仪（Waterse2695-2998 Alliance）标准操作规程。3 职责 操作者。4 程序41 开机411打开Alliance电源开关，仪器进入自检状态。412 打开检测器，“STATUS”闪烁，4分钟后“LAMP”亮，仪器正常。413 点击menu/Status，进入“STATUS”界面，按direct function，选择dry prime后，选择“A/B/C/D”四个泵，点击“Enter”，管道快速充满液体。414 打开电脑，点击“Empower”登陆，输入帐户“system”，密码“

20、manager”，进入“Empower Pro”。415 在配置系统中新建一项目。416 点击“运行样品”，选择“项目”，3分钟后仪器进入运行界面。42 样品检测421 点击“编辑”，编辑仪器方法并保存方法名。422 点击“新建方法组”，编辑方法组名。（要求方法组与仪器方法同名）423 标识样品名、进样品/进标准品、样品位置、进样体积、运行时间后，于“file”中保存参数。424 点击“准备”，仪器显示“准备进样”后，点击进样。425 点击鼠标右键，选择“波长”和“正好运行时间”，保存参数。43 数据处理431 点击“浏览项目”，于“进样”栏中双击所选的样品名，进入“通道”栏，双击所选的样品名

21、，进入样品数据主窗口。432 选择波长，点击“提取色谱”后，积分或以处理方法向导处理数据，保存处理方法后，于“file”“保存”中保存“全部”。44 打印报告441于所选“浏览项目”结果栏中，选择已处理好的数据（如果没有，点击更新），点击右键，选择预览报告。442 选择报告方法，确定后，进入报告预览状态。45 关机451 关闭检测器。452 停泵后，移动光标于Alliance“degasser”中，点击Enter，选择“ off”。453 关闭“ Power”。454 关闭运行窗口及数据处理窗口，最后关闭 Empower窗口，关闭电脑。HPLC操作注意事项1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用

22、前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。 2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然 后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。7.堵塞导致压力太大，按预柱混合器中的过滤器管

23、路过滤器单向阀检查 并清洗。清洗方法；以异丙醇作溶剂冲洗：放在异丙醇中间用超声波清 洗；用10稀硝酸清洗。8.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。9.要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。10.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。 实验六 气相色谱法测定植物油脂肪酸含量一、实验目的1、 了解气相色谱的组成与分离原理；2、 了解气相色谱仪的基本操作；3、 掌握气相色谱法定性、定量方法。二、实验原理气相色谱法是利用色谱柱中装入担体及固定液，用载气把欲分析的混合物

24、带入色谱柱，在一定的温度与压力条件下，各气体组分在载气和 固定液薄膜的气液两相相中的分配系数不同，随着载气的向前流动，样品各组分在气，液两相中反复进行分配，使脂肪酸各组分的移动速度有快有慢，从而可将各组分分离开,然后进行分别测定。氢火焰离子检测器分析原理，又称火焰离子化检测器,气相色谱法常用的检测器，是利用有机化合物在氢火焰中化学电离进行检测的检测器。当被测试样组分的分子进入氢火焰时,由于燃烧生成离子,并在电场中作定向移动而形成离子电流,经电子放大后在仪表上显示。三、仪器与材料1、仪器气相色谱仪氢火焰离子化检测器氮气、氢气、空气毛细管色谱柱DB-23。2、试剂(1)石油醚(沸程3060)分析纯

25、(2)苯(3)无水甲醇（分析纯、色谱纯）(4)甲醇钠：0.5mol/L甲醇钠溶液：以无水甲醇（分析纯）配制。(5)正己烷（色谱纯）（6）无水硫酸钠（7）脂肪酸标准(SIGMA)：脂肪酸混合标准3、气相色谱条件进样器温度：270检测器温度：270。四、方法1、甲酯化硫酸甲醇催化法:(1) 取25mg纯化的栝楼籽油至特福纶试管（具塞玻璃试管）中，先后加入1mL甲苯和2mL1N硫酸甲醇溶液，往特福纶试管充氮气盖好盖子，充分振摇，置于水浴中甲酯化。甲酯化的条件为：80oC条件下反应1h。甲酯化反应结束后冷却到室温。(2) 加入1mL生理盐水和2mL正己烷，充分振荡，1500rpm的速度离心10min，

26、重复操作一遍。(3) 取上层液于一装有2mL蒸馏水的干净试管（尖头）中，振摇，静置。取上层液于一加有无水硫酸钠的试管中，再度摇匀，然后将液体小心转移到一干净的具塞试管中。碱催化法:(1) 取25mg纯化的栝楼籽油至特福纶试管（具塞玻璃试管）中，先后加入1mL甲苯和2mL 0.5mol/L甲醇钠溶液，往特福纶试管充氮气盖好盖子，充分振摇，置于水浴中甲酯化，在 50oC温度下反应1h，中间轻摇数次。甲酯化反应结束后冷却到室温。(2) 加入1mL饱和盐水和2mL正己烷，充分振荡，1500rpm的速度离心10 min。重复操作一遍。(3) 取上层液于一装有2mL蒸馏水的干净试管（尖头）中，振摇，静置。

27、取上层液于一加有无水硫酸钠的试管中，再度摇匀，然后将液体小心转移到一干净的具塞试管中。2、色谱分析：脂肪酸甲酯采用带有火焰离子检测器的GC-6890气相色谱仪进行（岛津公司，日本)，数据采集和接收采用N2010色谱工作数据系统进行（中国智达信息技术公司）。脂肪酸的分离采用DB-23毛细管柱进行(60m×0.25mm i.d., 0.25m膜厚度, 安捷伦科技有限公司, 美国)。色谱条DB-23件为：柱箱温度初始温度为100oC，100oC保持3min，以20oC/min 的速率上升到190oC，190oC保持10min，然后以5oC/min的速率程序上升到215oC，215oC保持6

28、min，最后以10oC/min的速率升温到230oC，230oC保持5min。载气为氮气，进样采用分流方式，进样口温度和检测器温度均保持在270oC。脂肪酸通过与标准脂肪酸混合物比较鉴定。3、结果计算在有微处理机的情况下，用归一化计算法则可自动打印出峰面积和各种脂肪酸占总脂肪酸的百分比。归一化计算法不能直接计算脂肪酸的总重量及各种脂肪酸的实际含量。五、思考题：（1）脂肪酸分析前为什么要进行衍生化（甲酯化）？气相色谱法基础简介气相色谱法（GC）是英国生物化学家 Martin A T P等人在研究液液分配色谱的基础上，于1952年创立的一种极有效的分离方法，它可分析和分离复杂的多组分混合物。目前由

29、于使用了高效能的色谱柱，高灵敏度的检测器及微处理机，使得气相色谱法成为一种分析速度快、灵敏度高、应用范围广的分析方法。如气相色谱与质谱（GCMS）联用、气相色谱与Fourier红外光谱(GCFTIR）联用、气相色谱与原子发射光谱（GCAES）联用等。气相色谱也有一定的局限：在没有纯标样条件下，对样品中未知物的定性和定量较为困难，往往需要与红外光谱、质谱等结构分析仪器联用；沸点高、热稳定性差、腐蚀性和反应活性较强的物质，气相色谱分析比较困难。商品化的制备气相色谱仪有填充柱、毛细管柱和制备气相色谱仪等三种。需要说明的是，先进的气相色谱仪往往兼具填充柱、毛细管柱，分析、制备等多种功能。本实验使用的是

30、毛细管柱气相色谱仪。1. 气路系统1载气瓶， 2 空气瓶， 3 氢气瓶， 4 减压阀， 5 净化管， 6 稳压阀， 7 负压稳压阀， 8 针型阀， 9 压力表， 10 FID，11 干燥管， 12 分流器， 13 毛细管柱， 14 净化室， 15 稳流阀。2.进样系统3. 分离系统 4. 温控系统5、检测器检测器是气相色谱仪的重要部件，其作用是将色谱柱分离后各组分在载气中浓度或量的变化转换成易于测量的电信号，然后记录并显示出来。其信号及大小为被测组分定性定量的依据。 火焰离子化检测器是以氢气和空气燃烧的火焰作为能源，利用含碳有机物在火焰中燃烧产生离子，在外加的电场作用下，使离子形成离子流，根据

31、离子流产生的电信号强度，检测被色谱柱分离出的组分。气相色谱注意事项a. 先通载气，后通电；先关电，后关载气。当连续使用或做精细分析时,晚上最好不关载气，可适当调低入口压强至0.1MPa，保证系统内的正压状态。当TCD高温运行结束后, 应关热导控制器和温度控制器半小时后才能关载气，以保护传感器元件不被高温氧化；b. 当第一次使用气瓶减压阀时，请将减压阀原出口接头取下，用附件箱中的接头(CF8.470.080)替代。用3×0.5软管连接减压阀、净化管及仪器，减压阀和净化管接头连接处必须保证不漏气；c. 开气源时，气瓶开关阀应开足，减压阀开关旋至最松，查看减压阀的压力表应压力足够，然后逐渐

32、调减压阀，仪器正常运行时, 使减压阀低压测压强输出为：载气在0.50.6MPa之间； 氢气、空气在0.30.4之间。若压力过大会损坏仪器内部阀件，甚至引起净化管炸裂；若压强过小，稳压阀不能正常工作，须调至规定范围内；d. 仪器的载气稳压阀出厂时已校至0.4Mpa，一般情况下用户不要自己调整，以免流量表不准确，若调动，载气流量需重新校正；e. 接入检测器的色谱柱必须事先经过严格老化，其老化温度低于固定相的最高使用温度，高于分析样品时的温度，老化时间应长于36h，并通以适当的流量,以避免分析时固定相流失引起检测器污染和基线漂移。若用柱箱老化色谱柱，柱出口不能接在检测器上，应使其出气排出仪器外；f.

33、 用氢气作燃烧气的检测器工作温度应不低于120，并且应达到该温度才可点火，否则会因燃烧后生成的水汽积水，严重影响检测器的使用寿命和性能，关机时也应先关辅助气，待氢气、空气压强降至零，火熄灭后方可降温；g. 稳流阀使用中不宜将流量调得过小(接近零)，以免损环其阀针，刻度旋钮调节时不要太快，并认准每次是一种旋向(顺或反时针)，以保证流量的重复性；h. 通电使用中不能拆接任何电气部件，若需维修，必须关电后再操作，并且应搞清楚毛病后再进，轻易不要随便拆换元器件，以免扩大故障范围；i. 汽化室用进样密封片，在注射1020次后，应及时更换，以免漏气。进样垫使用前应先在苯或酒精中浸泡清洗半小时，然后在220

34、下烘干备用；j. 仪器工作间及气源室所有管线必须确保不漏气，而且通风良好，以免气体泄漏时发生爆炸。主机常见故障及排除方法故 障 现 象原 因排 除 方 法按下电源开关，无显示，风扇叶不转1. 1.电源插头、插座不好2. 2.总保险管坏(220V、10A)1. 1.检修插头、插座2. 2.打开后盖，换保险管按下总电源开关，有显示，但风扇叶不转1. 1.电机轴被缠住 2. 2.电机引线压断3. 3.电机损坏 1. 1.去除缠丝2. 2.接通连线 3. 3.更换电机 按下总电源开关，有显示，风扇转，但听不到交流接触器吸合的“叭”声，或吸合又断，升温不加热1. 1.过温保护电路动作2. 2.某一铂电阻

35、断路或短路3. 3.实际温度高于保护温度值(320)1. 1.检查保护电路2. 2.更换铂电阻 3. 3.降低温度后再开机  升温未到预定值即停止加热，实时温度值下降1. 1.工作温度超过保护温度1. 1.重新设置柱箱设置正确，但不加温1. 1.过温熔丝断2. 2.温控主板或固态继电器坏1. 1.更换熔丝2. 2.查出损坏元件更换或交厂家修理 温度设置正确，但某一路启动后不加热1. 1.该路加热器损坏2. 2.该路加温电子部件损坏1. 1.更换加热器2. 2.检查温控主板和固态继电器板，更换坏元件各路温度控制不稳定1. 1.电源不稳定，220V电源线接头处有松动2. 2.交流接触器触

36、头太脏，接触不可靠1. 1.检查线路，排除故障2. 2.检修交流接触器或更换 柱头压力表指示值突然变化 1. 1.流量改变 2. 2.进样垫漏气 3. 3.柱担体板结1. 1.检查气源，载气管路，载气路阀件，压力表等2. 2.更换进样垫3. 3.更换色谱柱氢气或空气压力表指示值突然变化1. 1.气瓶开关阀或接头某处漏气2. 2. 气阻变化3. 3. 接头处漏气1. 1.查出漏气处作相应处理，换气瓶或重接接头2. 2.检查气阻,排除故障3. 3.重新连接注射针头插不下去1. 1. 汽化室散热器旋得过紧2. 2. 柱头装歪3. 3. 柱入口填得太满  1. 1. 散热器旋松到适

37、度2. 2. 重新对正装柱3. 3.柱入口应留出5060mm空间不装担体，填入硅烷化玻璃棉出峰保留时间不断变化1. 1.仪器启动时间未到2. 2.温度不稳3. 3.流量不稳4. 4.色谱柱不稳定1. 1.到时间后再进样2. 2.检查温控部分及铂电阻3. 3.检查载气流量及相应调节部件4. 4.重新老化柱子或更换峰面积(或峰高) 忽大忽小，保留时间不变1. 1.进样垫漏2. 2.注射器漏3. 3.色谱柱部分失效 1. 1.更换进样垫2. 2.更换进样针3. 3.更换色谱柱 热导检测器常见故障及排除方法    故障现象   &#

38、160;原    因    排除方法揿下电源开关TCD控制信号灯不亮1. 1.发光二级管烧坏 2. 2.恒流不输出1. 1.更换发光二极管2. 2.检查整个恒流源，并排除调零不起作用1. 1.记录仪接线有错2. 2.桥路引线断3. 3.调零电位器坏4. 4.铼鸽丝元件开路或严格不匹配1. 1.重新对记录仪接线2. 2.重新接通引线3. 3.更换调零电位器4. 4.更换元件工作正常时控制器保护灯亮桥流过大，漏气，温度过高 减小桥流，排除漏气，降低温度  恒温操作时基线单方向飘移

39、1. 1.气路系统漏气2. 2.启动时间不足1. 1.探漏并排除2. 2.等至规定时间恒温操作时，基线无规则漂移  1. 1.载气不稳或漏气2. 2.检测器被固定相污染3. 3.色谱柱被污染4. 4.仪器安装位置不适宜（附近有热源等温度变化大的设备或出口有大风）5. 5.色谱柱固定相关流失6. 6.记录仪故障1. 1.探漏并排除2. 2.用升温或气吹清洗检测器3. 3.更换色谱柱4. 4.合理安排仪器位置，不要让气流直吹TCD出口5. 5.在色谱柱脱离检测器的情况下充分老化后使用6. 6.排除记录仪故障基线噪音  1. 1.导线接触不良，调零或桥流电位器

40、接触不良2. 2.接地不良3. 3.检测器及其出口管道有异物4. 4.进样品的密封垫不干净或扎针次数太多5. 5.载气流速太高6. 6.皂沫流量计接在出口处，而液面过高，不断有气泡出现1. 1.检查主机各接头处更换电位器2. 2.检查主机及记录仪接地3. 3.加大载气流量，吹走异物，必要时拆下清洗4. 4.清洗或更换进样器密封垫5. 5.合理选择载弋流量6. 6.测流量后，挪开流量计 灵敏度太低，保留值正常1. 1.电流设定太小2. 2.注射器漏气或堵塞3. 3.进样口密封垫漏气1. 1.重新设定电流2. 2.更换注射器3. 3.旋紧螺帽或更换密封垫灵敏度低，保留值也不对 

41、1. 1.柱温因某种原因变化2. 2.载气流速变化1. 1.排除故障，重新升温2. 2.检查钢瓶压力，检查气路的漏堵处并排除峰高值值不重复1. 1.进样技术问题2. 2.漏气3. 3.柱温还未平衡4. 4.进样量太大，超过了柱子容量及检测器线性范围5. 5.柱温控制不良1. 1.提高进样技术2. 2.勤换进样垫3. 3.等到柱温恒定再进样4. 4.减小进样量或对样品进行稀释5. 5.检查温控 氢火焰检测器常见故障及排除方法故 障 现 象原 因排 除 方 法点不着火1. 1.稳压阀关死2. 2.离子头之前有大的漏气3. 3.喷嘴堵塞4. 4.氢气太小5. 5.空气太大或太小1. 1.调整稳压阀(

42、氢气)2. 2.试漏、排除漏气3. 3.用坏注射器蕊或记录笔通针通喷嘴4. 4.选择适当的氢气5. 5.选择适当的空气点火后基线噪音大1. 1.氢气太大，离子头收集极积水， 2. 2.低噪音电缆线或高频插头插座电缆插头绝缘性下降，受潮或污染1. 1.减小氢气，待离子头温度上升后再点火2. 2.用酒精擦洗接头,并用电吹风吹干点火后进样不出峰1. 1.增益太小，记录仪衰减太大2. 2.无极化电压3. 3.火焰过高或过低4. 4.收集极与放大器没接通5. 5.火焰熄灭6. 6.汽化室漏气7. 7.微量注射器坏，无样品进注入1. 1.选择合适的衰减和增益2. 2.检查极化电压并修理3. 3.选择适当流

43、量比4. 4.检查、修理低噪音电缆线5. 5.重新点火6. 6.更换密封垫7. 7.更新按下增益切换开关(108)后，记录仪指针卡死1. 1.记录仪零点不对 2. 2.放大器零点漂移。   3. 3.±15V电源有一组坏，不起稳压作用4. 4.运算放大器坏 5. 5.记录仪插头未插好1. 1.将记录仪信号插座两点短路，调节记录仪零点2. 2.重新调节放大器零点, “增益切换”开关置108，调节屏蔽盒内微调电位器使之与记录仪零点相重合(一般情况下用户不宜调整)3. 3.检查±15V电源是否正常,并进行检修4. 4.检查运算放大器输出端6脚，判别输出是否正常,若为运放损坏，更换5. 5.插好记录仪插头再进行试验。记录仪笔卡向一边,调零不起作用。1. 1.基流补偿回路中的稳压管坏。  2. 2.小型密封电磁继电器触点不动作或接触不良