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文档简介

1、血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳目的目的了解电泳技术的一般原理，学习醋酸纤维薄膜电泳的操作实验原理实验原理 带电粒子（为胶体粒子）在电场中向与自身带相带电粒子（为胶体粒子）在电场中向与自身带相反电荷的电极移动，称为电泳。反电荷的电极移动，称为电泳。 不同物质由于带电性质不同，因而在一定的电场不同物质由于带电性质不同，因而在一定的电场强度下移动的速度不同。强度下移动的速度不同。 以氨基酸为例：以氨基酸为例：qU= mv212 在某种pH下，某一AA可显电中性，即带着相等的正负离子（呈兼性离子），此时若在电场中，这一AA既不向正极移动，也不向负极移动，这一pH值被称为这一AA的

2、等电点，以PI表示，AA是一种典型的两性电解质。 一个混合的蛋白质样品由于各蛋白质的等电点不同，在相同的pH溶液中所带的电荷性质不同，电荷的数目不同，在电场中各种蛋白质泳动的速度和方向也不相同。从而使蛋白质混合样分离开来。 溶液的pH值：溶液的pH值决定了带电颗粒的解离程度，也决定了物质所带净电的多少。对蛋白质和氨基酸等两性电解质而言，pH值离等电点越远，颗粒所带净电荷越多，泳动速度也越快，反之越慢。因此，分离某一蛋白质混合物时，应选择一种能扩大各种蛋白质所带电荷量差异的pH值，以利于各种蛋白质的分离。 为使电泳过程中溶液的pH值恒定，必须使用缓冲溶液。本次实验使用的是巴比妥-巴比妥钠缓冲溶液

3、。pH为8.6。醋酸纤维电泳的特点醋酸纤维电泳的特点优点：简单、快速、定量等，区带清晰，灵敏感度高，优点：简单、快速、定量等，区带清晰，灵敏感度高，便于保存和照相。便于保存和照相。缺点：较聚丙烯酰胺电泳分辨率低。聚丙烯酰胺电泳缺点：较聚丙烯酰胺电泳分辨率低。聚丙烯酰胺电泳有两重效用：电泳和分子筛。有两重效用：电泳和分子筛。实验步骤1. 平衡选择质地均匀的膜条浸透在缓冲液中10分钟左右，取出用滤纸吸干多余的水份。2. 点样识别出光泽面与无光泽面，平放于滤纸上，在无光泽面距膜一端2cm处用点样器点样。点样一定要均匀。这是实验成败最关键的一步。这是实验成败最关键的一步。. 电泳点样一面朝下，放入电泳槽中，点样端放在阴极 ，调节电流，电泳时间45-60分钟左右或在点样处点一点溴酚兰作为指示。电流强度为：0.7mA/cm膜宽，每片膜宽约2cm左右。每个电泳槽大概放十片膜，因此电流为0.4-0.6mA左右，电压为90-120mV。 .染色 电泳完毕后将膜条取下放在染色液中染色6分钟。染色液为氨基黑10B。.漂洗 将膜条从染色液中取出放置漂洗液中，漂洗数次至条带清晰为止。漂洗液(100mL): 45mL 乙醇或甲醇. 5mL冰醋酸, 水50 mL.结果分析各蛋白

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