大豆油(食用级)微生物限度检验操作规程

1、起草质量控制部签字/日期：审核财务部签字/日期：总经办签字/日期：质量保证部签字/日期：质量控制部签字/日期：注册申报部签字/日期：生产技术部签字/日期：设备工程部签字/日期：人力资源部签字/日期：研发部签字/日期：营销管理部签字/日期：行政部签字/日期：物流部签字/日期：副总审核质量副总经理签字/日期：常务生产副总经理签字/日期：营销副总经理签字/日期：批准质量副总经理签字/日期：分发董事长兼总经理财务部总经办质量副总经理常务生产副总经理质量保证部质量控制部注册申报部生产技术部设备工程部人力资源部研发部营销管理部行政部物流部原料1车间原料2车间注射液车间冻干车间软胶囊车间中药提取车间目的制定

2、大豆油（食用级）微生物限度检验操作规程，规范大豆油（食用级）微生物限度 的检验，确保准确、及时的检验大豆油（食用级）微生物限度，确保检验的规范性与 准确性。范围适用于大豆油（食用级）微生物限度的检验职责QC 主管：负责督促检验人员按本规程操作 生化组组长：负责对检验人员的操作进行指导与监督。 生化组检验人员：负责严格按照本规程对大豆油（食用级）微生物限度进行检验 内容1 物料 /产品代码、名称1.1 代码： PYF0571.2 名称：大豆油（食用级）2 标准依据2.1 STP03-QS-205500 “大豆油（食用级）质量标准”2.2中国药典3 仪器、工具3.1 锥形瓶500ml3.2 培养皿

3、90mm3.3 刻度吸管、乳胶头1ml3.4 量筒10ml3.5 锥形瓶200ml3.6 盐水瓶3.7 试管、试管架3.8 接种环3.9 酒精灯3.10 试管塞3.11 量杯、纱布3.12 生化培养箱3.13 电子天平3.14 洁净工作台3.15灭菌锅3.16 水浴锅3.17 剪刀4 试剂、试药100ml4.1 75%的乙醇溶液或 0.1%新洁尔灭溶液或 70%异丙醇4.2胰酪大豆胨琼脂培养基4.3 沙氏葡萄糖琼脂培养基4.4 胰酪大豆胨液体培养基4.5 麦康凯液体培养基4.6 麦康凯琼脂培养基4.7 聚山梨酯 804.8pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液5 环境、健康和安全( EHS )5.

4、1微生物限度检查应在不低于 D 级背景下的 B 级单向流空气区域内进行。5.2 在操作中注意酒精灯的使用，酒精灯中酒精的量不能超过装量的2/3。5.3 由于酒精灯或是 75%的乙醇溶液或是 70%异丙醇着火时，切忌用水扑灭，应采用 窒息法使其熄灭。6 准备6.1将纱布、量杯、滤杯用灭菌呼吸袋装好，经 121C 20分钟湿热灭菌后，经紫外消毒30 分钟后， 由洁净传递窗传入洁净区。应填写“仪器使用记录” (SMP04-QC-00080001)、 “紫外灯消毒记录”( SMP04-QC-00210001)。6.2将量筒、培养皿、弯头镊子、垫片于160C 180C干热灭菌2小时后，经紫外消毒30 分

5、钟后， 由洁净传递窗传入洁净区。应填写“仪器使用记录” (SMP04-QC-00080001)、 “紫外灯消毒记录”( SMP04-QC-00210001)。6.3 将熔化的胰酪大豆胨琼脂培养基、 沙氏葡萄糖琼脂培养基、 胰酪大豆胨液体培养基、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、待检大豆油(食用级)放入传递窗，经紫外消毒 30分钟后传入洁净区。应填写“仪器使用记录” (SMP04-QC-00080001)、“紫外灯消毒记录”( SMP04-QC-00210001)。6.4 开启洁净工作台的紫外灯，对工作台表面紫外消毒 30 分钟。填写“紫外灯消毒记 录” (SMP04-QC-00210001)

6、 。6.5 检查所用培养基、试剂应在使用有效期内。7 操作7.1 方法7.1.1关闭洁净工作台的紫外灯， 打开照明灯、 风机，填写“洁净工作台仪器使用记录”(S0P04-SB-00270001。用消毒纱布擦拭洁净工作台。点燃酒精灯，开启电子 天平，填写“仪器使用记录”( SMP04-QC-00080001)。7.1.2 在工作台上放置 3个胰酪大豆胨琼脂培养基平皿，监测洁净工作台的沉降菌。7.1.3 将工器具、培养基、装有大豆油(食用级)的碘量瓶用消毒液擦拭后，移入到洁净工作台上。7.1.4取无菌聚山梨酯80,加入相应体积的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，置45C 水浴，振摇，使溶解，制

7、成含 0.1% (ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠- 蛋白胨缓冲液。取本品10ml，加入预热45T含0.1% ( ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白 胨缓冲液至100ml，置45E水浴，振摇，使溶解，制成1:10供试液。再吸取上述 1:10供试液1ml，加入预热的稀释液至10ml，置45 T水浴，振摇，使溶解，制成 1:100的供试液。7.1.5需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数检查7.1.5.1需氧菌总数检查7.1.5.1.1分别吸取制备好的1:10、1:100的供试液各1ml，置直径90mm的无菌平皿中， 注入15ml20ml温度不超过45C熔化的胰酪大豆胨琼脂培

8、养基，混匀，凝固， 倒置培养。每个稀释级每种培养基制备 2 个平皿。7.1.5.1.2阴性对照：取含0.1% (ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲 液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15ml20ml温度不超过45°C熔化 的胰酪大豆胨琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。每种培养基制备 2 个平 皿。7.1.5.2 霉菌和酵母菌总数检查7.1.5.2.1分别吸取制备好的1:10、1:100的供试液各1ml，置直径90mm的无菌平皿中， 注入15ml20ml温度不超过45C熔化的沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固， 倒置培养。每个稀释级每种培养基制备 2个平皿

9、。7.1.5.2.2阴性对照：取含0.1% (ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲 液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15ml20ml温度不超过45C熔化 的沙氏葡萄糖琼脂培养基， 混匀，凝固，倒置培养。每种培养基制备 2个平皿。7.1.5.3将环测平皿置30C35C的培养箱中倒置培养23天，逐日点计菌落数，填写“沉 降菌测试记录” (STP04-QC-00590001)。将检查需氧菌总数平皿于 30 C 35C 的培养箱中倒置培养5天，检查霉菌及酵母菌总数平皿于 20C 25C的培养箱 中倒置培养 7天，逐日点计菌落数，填写“微生物观察标签”(SMP04-QC-

10、00220012)、“生化培养箱仪器使用记录”(S0P04-SB-00330001。7.1.6 控制菌检查(大肠埃希菌)7.1.6.1 供试品组7.1.6.1.1取1:10的供试液10ml，接种至100ml胰酪大豆胨液体培养基中，混匀,3035C 培养 1824 小时后。填写“生化培养箱仪器使用记录” (SOP04-SB-00330001)。7.161.2取上述培养物1ml接种至100ml麦康凯液体培养基中，4244°C培养2448小 时。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，3035C培养1872 小时。7.1.6.2阴性对照组取含0.1%( ml/ml)聚山梨酯80

11、的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml，接 种至100ml胰酪大豆胨液体培养基中，混匀,3035C培养1824小时，同7.1.6.1 法操作。7.1.6.3阳性对照组取1:10的供试液10ml，接种至100ml胰酪大豆胨液体培养基中再加入 1ml不 大于100cfu/ml的大肠埃希菌菌液，混匀，3035C培养1824小时，同7.1.6.1 法操作。7.2 判断标准7.2.1法定标准：需氧菌总数w 1000cfu/ml，霉菌和酵母菌总数w 100cfu/ml; 内控标准：需氧菌总数w 500cfu/ml，霉菌和酵母菌总数w 50cfu/ml。7.2.2 控制菌检查(大肠埃希菌)：若麦康凯琼

12、脂培养基平板上有菌落生长，应进行分 离、纯化及适宜的鉴定试验，确证是否为大肠埃希菌；若麦康凯琼脂培养基平板 上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判供试品未检出大肠埃希 菌。7.2.3 环境监测：沉降菌菌落数应不得过 1cfu。8 结束8.1 检测结束后，整理洁净工作台，将洁净工作台上的物品经传递窗传出洁净区。填写 “洁净工作台仪器使用记录”( SOP04-SB-00270001)。8 . 2用消毒纱布擦拭洁净工作台，关闭风机，关闭照明灯，打开紫外灯消毒半小时。 8.3将检测使用的工器具清洗干净后，晾干备用。8.4整理相关仪器使用记录和检验记录。9 清洁9.1 实验结束后，应对操作台与传递窗、地面或墙壁等进行适当的清