2020年生物科技行业CLSI临床微生物试验室标准解读

1、（生物科技行业）CLSI临床微生物实验室标准解读20XX年XX月多年的企业咨询豉问经验.经过实战验证可以落地机行的卓越管理方案，值得您下载拥有CLSI临床微生物实验室标准解读CLSI2010更新CLSI临床微生物实验室标准解读第三辑2010年CLSI药敏试验的更新中国医学科学院北京协和医学院杨启文王辉美国临床和实验室标准化研究所（TheClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,CLSI）是壹个国际性、跨学科、非营利的、致力于发展操作标准的教育组织。其抗菌药物敏感性试验小组委员会（SubcommitteeonAntimicrobialSusceptibili

2、tytesting）每年组织该领域专家和药厂代表等对药敏相关文件M100进行壹次修订。目前我国的临床微生物实验室均以CLSI文件作为药敏指导文件进行试验操作和报告，本文将CLSIM100-S20（2010年）的主要更新点总结如下：壹、主要格式的更新：下表显示了壹些在M100-S19（2009年）中位于最后的附录在M100-S20（2010年）文件中新的命名、编号和位置。表1.M100-S20的格式更新二、表1和表2介绍内容中的更新M100-S19中的名称M100-S20名称/位置附录A（ESBLs的筛选和确证试验）补充性表格2A-S1/表2A的最后附录G（碳富酶烯酶的筛选和确证试验）补充性表格

3、2A-S2/表2A的最后附录B（金黄色葡萄球菌的筛选试验）补充性表格2C-S3/表2c的最后附录C（凝固酶阴性葡萄球菌的筛选试验）补充性表格2C-S4/表2c的最后附录D（肠球菌的筛选试验）补充性表格2D-S5/表2D的最后附录E（M敏结果的确证建议）附录A/M100-S20的最后，术语表前附录F（药敏试验的质控菌株）附录B/M100-S20的最后，术语表前（1）修订了“非敏感”的定义：M100-S20中对“非敏感”的定义是由于耐药菌株缺失或稀少因而仅确立了敏感性解释标准。当药物对菌株的MIC高于或抑菌圈直径低于此折点时需报告为非敏感。非敏感且不意味着菌株携带某种耐药机制。有可能MIC高于敏感

4、折点的菌株缺乏耐药机制且且属于野生菌株，只不过其出现于敏感性折点确立后。对于“非敏感”的菌株，菌株鉴定和药敏结果需被再次确认。（2）对“使用头抱曝吩的折点仅用于预测对其他头胞菌素的敏感性”增加注释：在M100-S20中，头抱曝吩的折点仅可用于预测菌株对口服药物，包括抱羟氨节，头抱泊肠，头抱氨节和氯碳头胞的敏感性。旧的数据认为头抱曝吩的结果能够预测某些其他头抱菌素的敏感性可能仍然正确，但目前的数据尚不能支持此论点。在M100-S20的第26页增加第VII部分来描述筛选试验且总结他们的局限性以及对应的确证试验。该部分总结了肠杆菌科菌、金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肠球菌和肺炎链球菌的耐药表型

5、初筛试验和对应的确证试验。（4）在表1和1A的警告框内，M100-S20将头霉素类药物加入脑脊液分离菌株中不能常规报告的抗菌药物列表中。在M100-S19中，口服抗菌药物、第壹代和第二代头胞菌素（除外静脉用头抱吠辛）、克林霉素、大环内酯类、四环素类和氟唾诺酮类被列为脑脊液分离菌株中不能常规报告的抗菌药物，因为这些药物不是脑脊髓感染的选择药物，在M100-S20中，头霉素类药物（如头抱西丁、头抱美嘎和头抱替坦）也被纳入此类药物。三、肠杆菌科菌相关的更新（1）修订了头抱睡咻、头抱曝肠、头抱他咤、头抱睡肢、头抱曲松和氨曲南的折点，且在折点后增加了对应的用药方案。I修订折点的原因在CLSI文件M100

6、-S20的第17页有壹个关于折点如何建立的简短注释。本段话参考的是CLSI关于折点发展的指南性文件：M23-体外药敏试验标准和质量控制参数的发展。简单地说，修改折点涉及微生物学、药理学和临床数据的系统性回顾。公认的专家，制药业赞助商和监管机构参和这壹过程，其中包括CLSI药敏试验小组委员会每年俩次的在公开会议讨论。若为新的药物建立原始折点，对照的临床试验数据是必需的。然而在修改折点时，虽然对照临床试验是可取的，但在处理快速变化的细菌耐药机制和“老”的药物时这些试验往往且不可行。因此，小组委员会必须依赖于由发表的文献资料、专家意见和共识所支持的最佳实践。流行病学、临床实践以及任何折点修订的监管影

7、响必须予以考虑。折点需要修订是由于不断变化的耐药机制和细菌菌群分布，不断进步的科学增进了人们对临床反应药理学因素的认识以及“最佳治疗”被临床医生所接受。在临床实践中常规使用的许多药物折点源于25年前的临床操作，而这些操作以今天的监管和质量保证标准来见是不可接受的。不论在美国和欧洲，不断评估和更新折点已得到了微生物学家、临床医生和监管机构的普遍认同。例如，2007年通过的美国食品和药物管理法修正案（FDAAA）规定FDA更新折点，且且美国FDA已经在2009年作出回应，为行业印发指导文件，以在系统性抗菌药物产品和药敏试验设备中更新药敏试验信息标记。M100-S20修订后的折点能更好地反映抗菌药物

8、在以目前推荐方案治疗由菌株引起的感染时的真实疗效。对产ESBL菌株的研究结果发挥了重大作用。最初CLSI推荐进行ESBLs筛选及确证测试，且规定对于产ESBL的菌株，将青霉素，头抱菌素和氨曲南的药敏结果由敏感改为耐药，这条规定基于以下几点：1）研究观察到某些产ESBL菌株，之上药物的MIC有升高但仍然在敏感区间（使用旧的折点）；2）有限的临床观察发现，对于产ESBL菌株引起的感染，病人预后较差。ESBL试验建议是处理壹个新型耐药机制的短期解决方案。随后，更多的耐药机制被发现（例如，新型的ESBLs和AmpC酶），且且越来越多的菌株被发现产多种酶导致ESBL的检测更加复杂。之上事实以及人们对头抱

9、菌素类和单环B内酰胺类的PK-PD因素对治疗效果决定作用的认识导致折点的变更。折点修订后，ESBLs筛选和确证试验将不再是决定治疗策略所必需。当菌株产多种酶时（如当菌株同时产ESBLs和AmpC酶时将导致假阴性的结果）ESBL表型检测和确证试验的准确性将降低，而在当前，产多种酶的菌株已非常普遍。菌株的MIC和临床预后的相关性强于菌株携带的耐药机制。CLSI认为，新的折点将为病人治疗提供更合理的信息且降低临床实验室工作的不确定度和工作量。n新折点和旧折点的比较对于肠杆菌科菌，头胞菌素和氨曲南的折点修订如下（作为比较，也列出旧的折点）:表2.M100-S20MIC折点更新（ug/ml）:抗菌药物旧

10、(M100-S19)新(M100-S20)敏感中介耐药敏感中介耐药头抱睡咻<816>32<12>4头抱曝肠<816-32>64<12>4头抱嘎曲<816-32>64<12>4头抱曲松<816-32>64<12>4头抱他呢<816>32<48>16氨曲南<816>32<48>16表3.M100-S20纸片扩散法折点更新（mm）:抗菌药物旧(M100-S19)新(M100-S20)敏感中介耐药敏感中介耐药头抱睡咻>1815-17V14NANANA头抱

11、曝肠>2315-224>1623-25V22头抱嘎曲>2015-19<14>2522-24V21头抱曲松>2114-20V13>2320-22V19头抱他呢>1815-17V14>2118-20V17氨曲南>2216-21V15>2118-20V17NA=未确定和头抱睡咻修订后MIC折点相关的抑菌圈直径折点尚未确立。初步的研究且没有确立明确的抑菌圈直径折点，且且头抱嘎咻的纸片扩散法试验可能需要使用壹种改变含药剂量的新型纸片。另外，以下药物对肠杆菌科菌的折点也被重新评估但没有被修改（这些药物的纸片扩散法折点也没有被修改）:表4,M

12、100-S20MIC折点（ug/ml）头抱西丁折点不修改是因为当前数据支持现有的折点。PK-PD评估表明，推荐的药物剂量在目标范围内。头抗菌药物旧(M100-S19)新(M100-S20)敏感中介耐药敏感中介耐药头抱吠辛（肠外）<816>32<816>32头抱叱肠<816>32<816>32头抱替坦V1632>64V1632>64头抱西丁<816>32<816>32抱替坦的折点未改变是因为没有足够的数据支持。头霉素类不被ESBLs水解且且头霉素的敏感结果不会由于ESBLs的确证试验阳性而改为耐药。头抱叱曲折点没

13、有修改是基于临床试验数据和PK-PD评估。临床试验证实了对于产ESBL但头抱叱曲敏感（MIC&8gg/ml）的菌株感染的病人，头抱叱曲是有疗效的。PK-PD评价结果表明，头抱口的肘日剂量超过3克（即每8小时1克或每12小时2克）能够使头抱叱肠的药物浓度达到评估折点时所使用的目的暴露标准。数据回顾显示，没有必要修订现行的头抱吠辛（注射）折点，但需注意现行折点只适用于每8小时1.5克或更高的给药剂量。对于壹般不在美国使用或销售的头抱菌素，如头抱孟多，头抱尼西，头抱哌酮和拉氧头抱，其折点没有重新评估。因此，当测试这些药物对大肠杆菌、克雷伯菌属和奇异变形杆菌的抗菌活性时，需要进行ESBLs筛选

14、和确证试验。X于ESBL确证试验阳性的菌株，这些药物的敏感结果均需报告为耐药。注射用头抱曝吩不再在美国使用。由于和肠杆菌科相关，口服头抱曝吩主要用于尿路感染的治疗。头抱曝吩的敏感性结果可代表其他几种FDA批准用于治疗尿路感染的口服药物的活性，包括头抱羟氨节，头抱泊肠，头抱氨节和氯碳头抱。故M100-S20将头抱曝吩由检测/报告A组转至U组。W使用新折点的报告原则：当使用经修订的折点则没有必要进行ESBL初筛和确证试验来报告结果以指导病人治疗。决定是否为感染控制或流行病学目的进行ESBLs确证试验应和传染病医生，药剂师以及感染控制委员会的医务人员进行讨论决定。新的折点应和各单位的实验室报告相关人

15、员共同讨论。传染病医生，药剂师和其他了解抗菌药物治疗的医务人员应教导其他医生关于折点修订的情况以及如何用新折点指导药物使用。重要的是，那些使用药敏结果指导治疗决策的医生须知道，新的折点适用于美国FDA批准的给药方案（如M100-S20表2A所列）。这些反映了来自制药X公司处方信息或产品标签的成人标准治疗剂量。各医疗机构的药物剂量和药物调整政策需重新评估以保证和CLSI推荐折点相壹致，因为临床医生不太可能要求实验室的常规报告上注明给药方案。W修订后折点和ESBL的关系不是所有的产ESBLs菌株使用新修订的折点均检测为耐药。修订后的头抱菌素和氨曲南折点都关注于MIC和药代动力学而不是耐药机制。正如

16、前所示，某些ESBL水解某些头抱菌素的能力强于其他药物，从而导致某些药物（如头抱曝肠）对产酶菌株的MIC明显高于其他药物（如头抱他咤）。另外，不同菌株的产酶量是有差异的，因此当产酶量多时MIC会升高。当使用经修订的折点则没有必要进行ESBL初筛和确证试验来报告结果以指导病人治疗。某种耐药机制能够导致不同强度的耐药性，如ESBL对头抱菌素和氨曲南。这些差异能够导致不同的MIC。例如，壹些产ESBL菌株用修订后折点对头抱他呢敏感但对头抱曲松耐药。同样，另壹个产ESBLs菌株可能对头抱曲松敏感而对头抱他呢耐药。目前建议，这些头胞菌素的敏感结果在报告时不改为耐药，因为研究表明，MIC是产酶菌株感染治疗

17、预后的最佳指标。V修订后折点和AmpC的关系和产ESBLs菌株壹样，且非所有产AmpC酶菌株用修订后折点将测试为耐药。这是因为除了克雷伯菌属和壹些大肠杆菌外，大多数肠杆菌科细菌均低水平产染色体AmpCB-内酰胺酶，头抱菌素的MIC较低且处于敏感范围（使用新折点）。然而，最常见的AmpC酶介导的耐药是因为产高水平AmpC酶突变株的选择（“去阻遏突变体”）从而灭活头抱菌素类继而导致耐药。壹个例外是头抱叱曲，其不容易被AmpC酶灭活。在所有情况下，建议将检测结果和报告结果壹致。如果菌株高产AmpC酶合且孔通道缺失，也可能对碳青霉烯类、青霉素类和头胞菌素类均耐药。目前CLSI不推荐任何检测肠杆菌科菌中

18、AmpC酶的试验。壹些AmpC酶的表型检测试验已公布但目前这些实验仍未充分评估，因此尚未被CLSI推荐。正如ESBLs检测试验，CLSI不推荐AmpC酶检测试验以进行治疗决策。决定是否为感染控制或流行病学目的进行AmpC检测应和传染病医生，药剂师以及感染控制委员会的医务人员进行讨论决定。由于没有检测产AmpC酶表型的标准化方法，这些方法的局限性，必须传达给那些使用这些结果的人员。VI修订后折点在商品化药敏系统中的应用若满足以下条件则可在商品化药敏系统中使用修订后折点：1）药敏系统的最低药物测试浓度需能容纳修订的折点浓度；2）有壹套体系可使用修订的折点来解释MIC结果（例如，能够修改软件系统中的

19、折点或手工解释药敏结果）和3）需进行实验室内验证。此策略也在CLSI的M100-S20第18页指出：“通过和传染病医生和药房部门以及治疗和药剂业及感染控制委员会的医务人员进行讨论，临床实验室可推行修订的折点”。对于纸片扩散法，壹旦CLSI在M100文件中公布了其新的折点，临床实验室即可采用。如果药敏系统包含的抗菌药物浓度足以使用CLSI折点解释药物敏感性，那么，实验室经过适当的验证后即可使用CLSI折点解释和报告药敏结果。表5.M100-S20中新增的药敏质控范围四、葡萄球菌属相关的更新（1）澄清对苯隆西林耐药金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌的结果报告原则：在M100-S20中，对于苯隆西林

20、耐药金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌（MRS）,6内酰胺类药物，如青霉素类、6内酰胺/网酰胺酶抑制剂复合药物、头抱类（除外新型的有抗MRSA活性的头抱菌素，如ceftaroline和ceftobiprole）和碳青霉烯类体外可能敏感但临床无效，因此除了有抗MRSA活性的新型头抱菌素外，其他B内酰胺类药物的结果均需报告为耐药或不报告。（2）修改将金葡菌和凝固酶阴性葡萄球菌寄送至参考实验室确认的建议：建议将万古霉素MIC>8ng/m的金黄色葡萄球菌和MIC>32（1g/m的凝固酶阴性葡萄球菌寄送至参考实验室确认。（3）MRSA菌株的扩展定义：MRSA指表达mecA或其他甲氧西林耐药机

21、制（如青霉素结合蛋白对苯嘎西林亲和力改变，修饰的金葡菌，MOD-SA）的金黄色葡萄球菌。（4）对于对青霉素敏感可是可能产6内酰胺酶的葡萄球菌，6内酰胺酶测试试验的局限性进行了扩展讨论：对于青霉素MICV0.12ug/m£抑菌圈直径。29mm葡萄球菌需进行诱导性B内酰胺酶试验。然而，青霉素敏感的金葡菌很少，对青霉素敏感的菌株仍多产诱导性6内酰胺酶。因此对于严重感染，实验室应首先进行青霉素的MIC检测，而后再进行诱导性6内酰胺酶试验。（5）澄清了当头抱西丁和苯嘎西林同时被用于测试金葡菌或路登葡萄球菌，当其中壹个试验耐药时的报告建议：当头抱西丁和苯嘎西林同时被用于测试金葡菌或路登葡萄球菌时

22、，只要其中壹个耐药，即可报告“苯嘎西林耐药”(6)增加利奈嘎胺纸片扩散法和MIC法的“耐药”解释标准：在M100-S20中，30u利奈嘎胺纸片的纸片扩散法耐药折点为v20mmMIC法的耐药折点则为。8ug/ml。(7)进壹步讨论耐酶青霉素类的交叉敏感性：假如检测青霉素酶稳定的青霉素类药物，苯嘎西林是优先选择的抗菌药物，其结果能够用于预测其他青霉素酶稳定的青霉素类药物，邻氯西林，双氯西林，氟氯西林，甲氧西林和奈夫西林。(8)强调了对于苯隆西林MIC在0.5-2gg/ml的非表皮葡萄球菌的其他凝固酶阴性葡萄球菌中进行附加试验的建议：苯嘎西林折点可能会高估了壹些凝固酶阴性葡萄球菌的耐药性，因为壹些非

23、表皮的凝固酶阴性葡萄球菌在苯嘎西林MIC为0.5-2ug/ml时且不携带mecA基因(苯嘎西林耐药折点为。0.5g/ml)。因此，对于WMlC梅0.5-2gg/ml的非表皮葡萄球菌的其他凝固酶阴性葡萄球菌引起的严重感染，推荐检测mecA或PBP2a或采用头抱西丁纸片扩散法。五、其他菌种相关的更新对于铜绿假单胞菌，M100-S20删除壹条建议：“在治疗铜绿假单胞菌感染时推荐联用另壹种抗菌药物(如氟唾诺酮类药物或氨基糖昔类药物)”。对于不动杆菌属：将黏菌素和多粘菌素从实验报告C组中删除。对于肠球菌，修改进行6内酰胺酶试验的建议：由产6内酰胺酶导致的肠球菌耐青霉素和氨节西林非常罕见，因此肠球菌的6内

24、酰胺酶不必常规检测。对于6溶血链球菌，修改有关青霉素和其他6内酰胺类药物的交叉敏感性的评论：对于A、B、C、G群6溶血链球菌，若青霉素敏感，可认为菌株对氨节西林、阿莫西林、阿莫西林-克拉维酸、氨节西林-舒巴坦、头抱嘎咻、头抱叱肠、头抱拉定、头抱曝吩、头抱曝肠、头抱曲松、头抱嘎肠、亚胺培南、厄他培南和美罗培南敏感。另外对于A群链球菌，青霉素敏感可认为对头抱克罗、头抱地尼、头抱丙烯、头抱布坦、头抱吠辛、头抱泊肠和头抱匹林敏感。对于草绿色链球菌，删除以下建议：“若菌株对青霉素敏感则可认为对其他6内酰胺类药物敏感”。且澄清表2H-2中所涵盖的菌株：草绿色链球菌包括以下5个菌群，每个菌群包含几个菌属：可

25、变链球菌群、唾液链球菌群、牛链球菌群、咽峡炎链球菌群(以往的米勒链球菌群)和mitis链球菌群。咽峡炎链球菌群包括小菌落A、C、F、G群B溶血链球菌。对于脑膜炎奈瑟氏菌，在头抱曝肠和头抱曲松间加“or”。六、关于药敏质控的更新M100-S20中新增的药敏质控总结如表5:七、关于药敏试验操作的更新(1)在进行稀释法药敏试验时，操作人员需要了解制备抗生素母液所需的溶解液和稀释液，M100-S20文件中增加了对三种抗菌药物母液制备所需溶解液和稀释液的注释：Besifloxacin的溶解液为甲醇，稀释液为水；Fidaxomicin的溶解液为二甲基亚碉，稀释液为水；Razupenem的溶解液和稀释液均为pH7.2,0.01mol/L磷酸盐缓冲液。M100-S20在表5B中总结了复合药物药敏试验的母液配置原则：对于阿莫西林-克拉维酸，母液中阿莫西林和克拉维酸的浓度比应为2:1;对于氨节西林-舒巴坦，母液中氨