实验一 显微镜的结构与使用

1、医学免疫学实验指导实验一 显微镜的结构与使用由长沙达尔锋生物科技有限公司整理【文章介绍】实验是映证理论，对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段。BioRike博瑞克系统的介绍了14个实验项目，每个实验说明实验目的，实验原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，希望广大师生能够从中有所收获。 BioRike简介：BioRike（中文简称“博瑞克”）是长沙达尔锋生物科技有限公司旗下的产品品牌,由旗下专业的生命科学实验室BioRike博瑞克研发和生产。BioRike是一家致力于生命科学和生物技术领域的高科技实验室，专门从事以Elisa试剂盒、抗体、细胞因子、免疫检测试剂盒等免疫学产品

2、为主的生物试剂的研发与销售。【实验目的】1.熟悉光学显微镜的结构和成像原理。2.掌握普通光镜的使用方法，尤其是油镜的正确使用。3.了解暗视野、相差显微镜的原理和使用方法。【实验用品】1.器材：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸。2.标本：细菌革兰染色玻片标本、普通变形杆菌24h内培养液、啤酒酵母新鲜培养的活标本。【内容和方法】一、普通光学显微镜的结构和使用方法微生物是肉眼看不见而必须借助于光学或电子显微镜将其放大数百乃至数万倍才能观察到的微小生物，因此显微镜是认识和研究微生物最重要和最基本的工具之一。因此，掌握其使用方法是进行微生物研究的基本技能。1.普通光镜的基

3、本结构普通光镜无论其外观形状如何，它都由两大部分组成，即机械装置部分和光学系统部分。机械部分包括镜座、镜臂、载物台及台上的标本推进器、镜筒、物镜转换盘以及升降调节器等，其主要作用是支撑、固定镜头、调节物象焦距、搁置和移动标本。光学系统包括反光镜、聚光器、物镜和目镜。它的作用是收集光源并聚集于标本上，然后通过透镜放大成像映与眼帘，是肉眼本不能分辨的物体得以清楚观察（图1-1）。图1-1 光学显微镜的结构光学系统是光学显微镜的核心部分，而物镜又是其中最重要的部件。一般的光镜配有3-4个物镜，有10倍的低倍镜、40倍的高倍镜和100倍的油浸镜（有的配有一个4倍的物镜头）。标本的放大主要靠物镜。为了使

4、用方便，常用红、黄、蓝、白的色圈分别标记物镜倍数。另外，在镜头上还刻有一些符号和数值，低倍镜上刻有10/0.25、160，10指放大倍数，0.25指镜口率（N.A），160表示镜筒长度（mm）。高倍镜刻有40/0.65和160/0.17，40为放大倍数，0.65指镜口率，160表示镜筒长度，0.17则表示使用时所要求盖玻片的厚度。油镜上刻有100/1.25和160/0.17，该数值也表示放大倍数、镜口率、镜筒长度、盖玻片厚度，除此之外，油镜头上还常刻有一个“油”或“oil”字。2.普通光镜的使用方法（1）对光和调焦：首先将显微镜平置于实验台上，转动物镜转换器使低倍镜与镜筒垂直到位（听到“咔”声

5、即可），然后将反光镜凹面对着光源翻动，侧面观察聚光器明亮或从目镜观察视野明亮即说明对光完成。如果此时虽对光较好却是也不够明亮时，应检查聚光器的光圈是否打开，聚光器是否升至最高。对好光后即将标本置于载物台上的标本夹中（注意标本面向上），先用低倍镜观察。用粗调节器调出物像后，再用细调节器调出清晰物像。在换高倍镜观察时，由于高倍镜视野范围比低倍镜小，故须先将观察内容移至视野中央后再换之。有时显微镜存在偏心现象，此时要记住其偏心的方向和距离。（2）油镜的原理、使用、保护在免疫学中主要使用的是油镜。油镜是因为在使用时需用香柏油等作介质而得名。光学显微镜的放大倍数与玻璃透镜的大小有关。油镜的透镜小，镜孔也

6、小，观察时由于聚光器聚集的光源要通过载玻片、空气，才能进入物镜中。玻璃与空气的折光率不同，会产生折射，使一部分光线失掉，进入物镜的光线减少，致使观察视野暗淡，物像不清。如果使用折射率与玻璃相近的油介质，即可减少折射，增加视野亮度，提高分辨率。如图1-2所示。图1-2油镜头使用原理 最常用的油介质为香柏油和石蜡油，其折光率分别为1.515和1.46，与玻璃的折光率1.52相近似（空气为1）。故可达到上述减少折射，增加光亮度的效果。使用油镜时应先将集光器升至最高，光栅增至最大。转开物镜镜头，在玻片上加一滴镜油，再转换油镜头。眼从侧方看，调节粗调节器，使镜头浸入镜油中，以轻轻接触玻片为止(注意勿压碎

7、玻片)。眼看目镜，调节粗调节器缓慢下降载物台，看到物像，立即停止，改用细调节器调出清晰物像。观察结束后，应用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭油镜头，再用于擦镜纸擦去残存二甲苯。下降集光器，竖起反光镜，将物镜镜头摆成“八”字型，对号送入镜盒内。二、暗视野显微镜和相差显微镜简介观察暗视野显微镜和相差显微镜实物或图片。暗视野显微镜是将普通光学显微镜换装上特制的暗视野聚光器或者在普通光镜聚光器上加一个中央遮光板改装而成。使用暗视野聚光器或光板，光线不能通过聚光器的中心部位透入物镜；而只能从周边斜射经标本反射进入物镜，因此视野背景是暗的，标本成为亮点。使用暗视野显微镜可检查不经染色，在普通显微镜下不易看清的活体微生物，如活的细菌、螺旋体等，它的缺点是不能观察生物体的内部结结构。相差显微镜也称相衬显微镜。相差显微镜具一个特殊的由环状光圈和聚光镜组合的转盘聚光镜和一组特别的相差物镜（内装相位板），能使直射光和绕射光产生干涉，改变其光相与振幅，形成明暗差，增强观察物体的立体感，并使细胞的内部构造清晰，因而可观察活体微生物的形态及某些内部细微结构。【注意事项】1.取送显微镜时动作要轻，一只手托镜座，一只手持镜臂，防止反光镜、目镜、物镜等脱落损坏。2.油镜用后一定要擦洗，以防止油干影响其使用寿命。注意擦镜时一定要用专用擦镜纸。