pcr污染防治手册

1、PCR污染防治手册为什么要如此査视防治PCR污染？聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)是一科选择性体外廿增DNA或RNA片 段的方比。护增过程中，廿增的DNA A量是呈描數上升的。PCR严扬的浓皮一般为10必拷 贝/ml,而Img人墓因组DNA才含1.41064#贝的单拷贝基因片段，因此後得PCR犷增反 应的敛感性非常爲。正是由于PCR反应具冇强大的护增效率也导欢其及易污快，圾微量的 PCR广杨污杀便可导欢假阳性结果。A应用HPV分禮忒和盒的过程中，主要存A両个活杂 源：1标本间的交又污染；2.PCR护增广杨的污杀。其中以笫二个污快源为呆为常见,通 过下

2、而一个例子便可认枳到PCR产杨污染的严重性。A 100ml的反应管中可产生10以桂贝 个分子，若将这些分子A个标准典林皿克游泳迪C50m25 m 2mJ内种祥后，0ml稀 诽液含冇400拷贝的廿增分孑，远远超过了 PCR护增反应检测散个桂贝的圾限。因此，一 定要注意严杨戎紆厉缺的问题.对临廉卖聆玄尤应如此。二. PCR污染的来涼对f HPV分世检测忒和盒来说，污杂的来源主要是PCR犷增产扬的污杀.常见的污杂 涂役冇两种'一是牝津肤话掾,疫吨气与液体面岸擦肘就可形成气洽胶，A椽作肘比较剧热 地桂动反应管，开盖肘.哌样肘及受污染的迸.眸枪的反复吸择都可形成气谆胶而活染。据计 算一个徐胶颍粒

3、可含4800051 因而由其凌成的污染赴一个值得特别重视的问題。二是PCR*杨的粘帶话無，此类污杂多是因为没冇严烙連守分区规定.侵成PCR产肠廿散刊 择岛抽提戎PCR卖睑玄。卖瞼丸衣.手套.移液枪.枪头.枪头盒和洪管架都是常見的粘 费污杂源。活杂发生时，这些地方是重点怀融的地方。三、PCR污染的追廉如果不恒发生丸*怀疑有丙快发生.可以沒计一个简单的小实验以确认污染源。用HPV的PCR护增糸统护熠如下棋核：A：水作为阴性对腮，如系此管廿增出阳性，则可以判岌为试!己经污染戎者是谕胶 污染。B:阳性样品作为阳性对腮，睑证卖验是否成功。GX:所要檢卷的地方，用无苗水浚泡过的灭苗栉筌擦拭可融污染源，0.

4、1ml去离子水 淡泡居作为按板。常见的谓要检杳的地方为各个卖睑台面.移液枪.枪头.枪头盒.式管標. 冰錯内.冰錯把手.水浴锅.轴提的相关比剖以及相关人员的办公桌。如果经过上述追球卖殓.仍不能杏找列确切污杀源，则污快可能是由杳中PCR产物 的气谆胶凌成的，此肘就应该灵换卖瞼场所，若条件不允许.可以卷圭内加裝紧外灯管昭射 过夜且彻底通风并停止几天的卖睑。叫 PCR汚鎌的预陆迸.行PCR #作肘.攧作人员应该产烙連守一些撫作规程，釆大程度地阵低可能出现的 PCR丙染或社绝活染的出观。1划分撫作区：实睑操作在三个不同的区城内进行，PCR的的处理和后氏理要农不同的隔 青区内进行.呆晟本的一个虑刪就旻PC

5、R护增及杂交检测区的奈西是為于污染源，绝对不 可以带到祈而个区去。A：样岛制备区.色杨护增撰板的制备;B： PCR加样区.包括反应液的配制和PCR护增；C： PCR护增及杂交检测区杂交操作过程心这个地方兜成。分区的注克爭顼：冬工作区要有一定的隔窗.操作乐材专用，要冇一定的方向性。如：标本制备一PCR护 增产分析产场处理。样芫的保存应孩亦上述工个区以外单独的区威。各个区城的肠品及衣服必须严格運守单向的虑则。各个区城必须要1乙单独的实睑农.实睑对必须嶽上手套。每个区城要冇勺己单独的实睑设备。以下是常见的分区方丸：PCR扩 増及朵 交检测 区tPCR加样 区I样品制备区1缓冲间t缓冲间缓冲间-VVP

6、CR扩増及杂交检测区1缓冲间样品制备及PCR加样区1缓冲间图一图二PCR扩増及 朵交检测区样品制备区、十走廊PCR加样区图四图三2、卖睑操作的注意事顼：A:就一次性手套，若不小心陇上反应液，立印灵换手套；B:使用一次性吸头，严禁与PCR产杨分析圭的吸头混用，吸头不要长对间暴玄于空气中， 避免气滋胶的污杀；C:濺免及应液飞戒，幻开反应管肘为避免此种情况，开孟祢稍富心收集液体于管底。若不 小心滅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用种酸掠拭桌面；D:操作射设立阴阳性对腮和空自对照，即可殓证PCR反应的可紊性，又可以协助判斷廿 增糸统的可信性；E:尽可能用可林换或可离庄处理的加样森，由于加样森呆汆易受广

7、杨气渝肤戎标本DNA的 厉染，呆好使用可辱换或爲庄戍理的加挥森。如没有这种特球的加至*应絞常的擦洗 轮外表及枪管内。3、严格对PCR产杨的丈理：PCR产肠包扌舌杂交产杨，諡读数结束后，杂交产肠农PCR产肠应该用一次性密诃彖森（竝 奴篆、勺封袋丿裝好后丢齐戎者側至1 mol/LHCI恋液或1:25的84请春液中，浚泡半小肘 以上后冉行丢弃。如果冇产场减在了桌面或乐具上，应立即用1 mol/LHCI恋液农1:25的 84询春液擦拭。4、垠据实验室伶况建立兜孚的四常PCR防治制度并产格执行丰心人为，制度轨行了才能达到它应冇的效果，根据卖瞼室宾际恃况建立和度后必须严 烙轨行，绝对不能因为图方便放松警惕

8、。五、PCR活染后的处理1. 如果是段具的污杀，可以对可疑"用lmol/L盘酸戎者1:25的84诡卷液擦拭农诜泡。 如果台面丙染，可能的话用柴外灯照射过夜。2. 如栗赴战刘河染请更换洪和.但忒刑活染一般伴随舟森具污杂.务必冬找出污柴源并及 对处理。3. 对于彼污染的区域，黃好灵换卖睑场所，可能的话应加裝茶外対感鉗过夜，丈右.不行也 处须加飛通凤几夭，幷停止实裱后检测是召还有污摇。六.卖缺蛮卖例：1 w分区侑况：卖殓空分成两个区，类彼图二所承。因为条件所限，没冇设.1.圾冲区，但而个区相隅较 远，可以冇敗避免汽溶胶的传樁。2、规章制度：A:建期蛊测：使用棉签涂抹的方比.一个月一次定期监

9、測.监测地点为：越净台来而. 超净台内枪（包朽枪吸孔内和轮体人 超净台枪头盒、超净台内常用PE管架及PCR管架， 冰箔冰柜把手（两台八冰錯内部（每个冰錯？个棉签包扌舌冰箱内部表面和随机的冰箔内忒 剂盒人 常用洪和试刘盒.式剖表而。抽堤桌而.轴提区枪（包据枪浹孔和枪体八 轴提区常 用试管架.抽灵区枪头盒.水浴锅水.谢水浴锅氷.相关式睑人员办公圭來而.亂标.键盘。 需要做的工作：决弭指戈人员葺月进行一次蛊测。备次JL測燥写麹豪表C見附表丿。B:畅浇：产格单向场流，只尢许从A区（择品制备及PCR加样区丿到B区CPCR护增及杂 交 楼测区丿的物吕流动。B区任何物吕（PCR管架、PE管需）进入A区询必须

10、经过丈理（1:100丿 的84请春液谀逸半小对丿。冬区物芫单找使用.不允许交又使用。席要做的工作：A.输 AB甫处理（84沒池斤洗涤）C:人浇：抽堤.PCR以及B区必须要冇单独的卖睑服，进入A. B両区进行卖絵必须穿上各 fl的卖聆服.不允许将卖睑服哮刊另一个区。fix：如果遗入一个区不是为了卖絵，可以不 穿卖睑服.但绝对不允许穿另一个区的实验服遗入儿 实睑服両周洗涤一次，但切记而个区 的衣服不要疫同一牝洗，分成両次洗，可以这周洗涤这个区的下周冼涤另一个区的。需要做笛工作：推走-厲轮一厲洗涤衣服.冬人f人負贵。D:余螯规穩：1.实验肘必须戴橡肤手套农薄强手套；轴提来面卖睑完成后用84擦洗；PC

11、R 卖睑泓每天（实睑量少的话可减少丿阮上用紧外照射；如采在卖脸过程中发现有样芫C包括 轴提询和轴提居丿农PCR产扬必须立即用84擦洗；心B区如果手接融过来而戎者其它有 可能污杀有PCR产肠的地方（枪.Luminex仪丢等丿必须尽快洗手；走期处理：冬区枪每 周用1： 25的84荫舂液擦洗（不需要拆开，主要是枪体和吸择孔内丿。冬区洪管架每周用b 25的84请泰液擦洗。各桌而每周用1： 25的84请春液擦洗。冰錯把手及外表每周用1： 25的84请拳液擦洗。水浴锅及帰水浴锅每周换一次水。扣关工作人员办公来毎周用1： 25 的84请春液擦洗務要做的工作：A、令絵（特射是杂交检测丿，发现倉产畅减出立即集洗

12、。B为洗手。U PCRD、夬排描龙人员事眉榛洗指丈位覺。E. PCR余检左做丸卖绘肝开烹卄。E:PCR产输处理：准务保埠袋，毎次的PCR产物（包杨杂交产杨和PCR产賜）丢齐祈必须用 保*扎好后再丢齐；杂交检测试脸区准备可以裟保鮮篆并冇盖子的竝及稲，使用过的枪头 一律札好后丢弃；屯冰旁边.的冰錯为PCR；*%临肘存放区'产禁PCR产物开羞存放，定期 （一个月）请理。壽要做笛工作：A：产格操作.把PCR产输作为高危险畅县小心处理。B：指龙日朗请理PCR产输。F：发生污拯斤的弦ja：如果怀硬有污染发生，执行监測程序.对于重点怀賤对象可以多作几 份。找到污快源后来而一用84擦洗后柴外照射一个庇

13、上，枪一用84擦洗（拆开丿后米 外照射过夜，枪头盒.洪管架一 8 4擦洗后柴外腮射过夜.枪头一丢齐，忒刘一丢齐"衣杨 -用84没泡后洗涤干净。冰缶把手-84按冼后柴外照射过夜。冰箱内部-84擦洗如果污 染产重的话流水冲洗后84擦洗，式和盒-84擦洗或流水冲洗。处理兜后执行蛊测程序松杳 污快侑况OPCR污染悄况蛊测表窝脸q期 式脸人员序号编号屯点试睑结果备注1超净台桌面2超净台枪枪沒孔内和枪体3超净台枪头盒4超净台内EP管襟及PCR管架5冰錯把手6冰柜杷手7冰錯内部18冰錯内部29冰錯常用试刘洪和盒10冰柜内部111冰柜内部112冰柜常用试刘洪和盒13PCR试褰面14柚提桌面15抽提区枪色杨枪吸孔和枪体16抽提区家用试管襟17抽提区枪头盒18水浴锅水19沸水浴锅水20次脸人员1办必盘来面21次睑人员1亂标.键盘22次脸人员2办公圭桌而23次脸人员2亂标.键盘24式脸人n 3办4牡無而25式脸人员3氯标.键盘26式脸人员4办4电無而27式脸人员4氯标.键盘28式脸人员5办4垫無而29式脸人员5氯标.键盘30阳性对照31阴性对照试能方和 准备1.5 ml EP管.年管加入