人参茎叶皂甙对鸭禽流感疫苗的免疫增强作用和抗氧化功能的影响.docx

1、DOI：10.14083/j.issn.1001-4942.2017.03.025人参茎叶皂忒对鸭禽流感疫苗的免疫增强作用和抗氧化功能的影响杨金保，张琳2，李兆华，李禹涛3,吴媛媛3,刘红岩，吴家强2(1.山东畜牧兽医职业学院，山东潍坊261061；2.山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，山东济南250100；3.潍坊市农业科学院，山东潍坊261071；4,临沂新程金锣牧业有限公司，山东临沂276000)摘要:为探讨人参茎叶皂忒(GSLS)对鸭流感疫苗的免疫增强作用和抗氧化功能的影响,给鸭群饮水口服GSLS,同时接种食流感疫苗，通过检测血清抗AIV特异性HI效价

2、、免疫器官指数、淋巴细胞增殖转化指数、细胞因子和肠黏膜SlgA水平，评价GSLS的免疫增强作用；通过测定血清丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量，评价GSLS对机体抗氧化功能的影响。结果表明：在28和35日龄时，饮水口服中剂量GSLS组鸭血清抗AIV特异性H1效价显著高于对照组(P0.05),1份+GSLS组鸭血清抗AIV特异性HI效价显著提高(P0.05)；饮水口服GSLS能显著增强鸭脾脏和法氏囊指数(P0.05).显著提高受ConA刺激产生的脾淋巴细胞增殖转化指数，显著或不显著提高脾淋巴细胞上清中IFN-7(Thl)和IL-4(Th2)水平，显著提高鸭肠黏膜SlgA含量;饮水口服

3、中剂量GSLS组血清MDA和SOD含量分别显著低于和高于对照组(P）分泌水平（免疫后2周和3周）；收集空肠，刮取肠黏膜，进行肠道SI-gA浓度测定（免疫后1周和2周）。免疫器官指数和淋巴细胞增殖转化指数测定参照相关文献操作进行6-7oSIgAJL-4和IFN-7参照北京华英生物技术研究所试剂盒说明书进行操作。1.5数据处理试验结果以平均值士标准偏差表示，采用SPSS19.0统计软件进行LSD统计分析，以0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同浓度GSLS对鸭血清HI效价的影响不同浓度CSLS对鸭血清抗AIV特异性HI效价的影响结果见图1,可以看出，在28.35日龄时,与对照组相比，口服中剂

4、量GSLS能显著提高鸭血清抗A1V特异性HI效价（P0.05）o2.2口服GSIS对不同剂量疫苗免疫鸭血清HI效价的影响口服GSLS对不同剂量疫苗免疫鸭血清抗AIV特异性H1效价的影响结果见图2,可以看出，在免疫后2、3和4周时，与1份疫苗组相比,1份+GSLS组鸭血清抗AIV特异性HI效价显著升高（P0.05）；0.5份+GSLS组与0.25份+GSLS组血清抗AIV特异性HI效价显著下降（P0.05）。日龄（天）组间不同字母表示差异显著（P0.05）,下同。图1不同浓度GSLS对鸭血清抗AIV特异性H1效价的影响免疫后时间（周）1份图0.5份+GSLS1份+GSLS目0.25份+GSLS爬

5、0.75份+GSLS图2口服GSLS对不同剂量AIV疫苗免疫鸭血清抗AIV特异性III效价彩响2.3口服GSLS对鸭脾脏淋巴细胞增殖转化的影响口服GSIJS对鸭脾脏淋巴细胞增殖转化的影响结果见图3,可以看出，1份+GSLS组鸭脾脏淋巳细胞体外受ConA刺激产生的淋巴细胞增殖能力显著高于对照组（0.05）,而受LPS刺激产生的淋巴细胞增殖能力与对照组比较差异不显著2.4口服GS1S对鸭细胞免疫功能的影响口服GSLS对鸭细胞免疫功能的影响结果见表1,可以看出，1份+GSLS组鸭牌淋巴细胞体外受ConA刺激后血清IFN含量，在免疫后2周和3周，均显著高于1份免疫组（P（）.05）,在免疫后3周，显著

6、高于1份免疫组（F0.05）表1口服GSLS对鸭细胞免疫功能的影响（昭/mL）纵邸子2周3周1份1份+GSIS】份1份+GSLS128.55*1.89b132.1512.70a138.083.25b141.8713.15a1L-4(TH2)173.68110.60a180.6210.99a181.282.18b187.892.69a注:组间不同字母表示差异显著（P0.05）,下同。2.5口服GSLS对鸭免疫器官指数变化的影响口服GSLS对鸭免疫器官指数的影响结果见表2,可以看出，1份+GSLS组鸭脾脏指数和法氏囊指数显著高于1份疫苗组（0.05）。表2口服GSIS对鸭免疫器官指数变化的影响处理

7、胸腺脾脏法氏囊1份4.88土0.67a0.870.14b1.660.13b1份+GSIS5.090.53a0.900.24a1.840.08a注：同列不同字母表示差异显著（P0.05）；在免疫后2周，饮水口服GSLS组鸭肠黏膜SIgA含量显著高于对照组（P图4口服GSIS对鸭肠黏膜SIgA含:变化2.7口服GSLS对鸭抗氧化功能的影响口服GSLS对鸭抗氧化功能的影响结果见表3,可以看出，饮水口服中剂量GSLS组鸭血清MDA浓度(MDA含量)显著降低(P0.05),SOD浓度(SOD活力)显著升高(P0.05)。衰3口服GSLS对鸭抗氧化功能的影响指标对照组高剂量组中剂量组低剂量组MDA(nmo

8、l/mL)6.220.72a6.460.82a5.420.63b6.210.49aS0D(U/mL)78.722.02b83.08”.77b92.633.47a82.142.08b3讨论与结论体液免疫应答是由机体B细胞产生的以抗体为主要效应分子的免疫应答,血清抗A1V特异性HI效价高低直接反映鸭抵抗流感病毒感染能力的高低。在家禽养殖业中，广泛采用给易感动物接种AI疫苗刺激机体产生特异性抗病毒抗体来防控AI发生。本研究结果表明，饮水口服中剂量GSLS能显著提高鸭血清抗AIV特异性HI效价,说明饮水口服GSLS能提高机体体液免疫应答，增强鸭群抗AIV感染能力，表现出良好的口服免疫增强作用。AI是一

9、种人畜共患传染性疾病，对鸭等易感动物采用抗体合格率来判定A1疫苗免疫合格的主要评判指标，而临床调研发现,抗体合格率不高已成为导致AI频发的重要因素之一。而本研究发现的口服GSLS能提高鸭群血清抗AIV特异性HI效价恰好证实其能提高抗体合格率，说明GSLS能作为一种免疫佐剂有效提高鸭群抗AIV感染能力。在兽用疫苗生产中，抗原剂量是影响疫苗免疫效果和关系疫苗生产成本的重要因素。低剂量抗原的疫苗不能诱导机体产生有效的免疫应答，血清特异性抗体效价低、抗体合格率低，仍然会造成传染病的频发;反之，高剂量抗原的疫苗会导致疫苗生产成本大幅增加，间接导致养殖成本增加，降低养殖利润免疫佐剂能增强机体对疫苗抗原的免

10、疫应答，具有降低疫苗抗原用量的效果，成为评价疫苗免疫佐剂的一个重要指标H。本研究结果表明,0.75份+GSLS组鸭血清抗AIV特异性HI效价与1份疫苗原组鸭血清抗A1V特异性HI效价相比，统计学显示差异不显著。疫苗抗原剂量减少0.25份,GSLS仍能刺激鸭群产生与1份疫苗抗原诱导机体产生相同水平的血清抗AIV特异性HI效价,说明饮水口服GSLS具有一定降低疫苗抗原用量的作用。淋巴细胞增殖指数是反映机体细胞免疫应答水平的指标之一。一般来说，淋巴细胞增殖转化能力高，机体的特异性细胞免疫应答能力则强。本研究结果表明，口服GSE能显著提高鸭脾脏淋巴细胞受ConA刺激后的淋巴细胞增殖转化指数，说明口服G

11、SLS能提高鸭群的细胞免疫应答水平,从而增强机体抵御病毒感染能力。细胞因子是免疫细胞受抗原或丝裂原刺激后产生具有清除机体病原体、调节免疫应答过程等作用的效应分子,是机体细胞免疫应答的主要效应分子，也是动物机体抗病毒感染中的重要辅助因素之一E,因此细胞因子分泌水平的高低反映机体细胞免疫应答能力的强弱。本研究结果表明，饮水口服GSLS能显著提高鸭脾脏淋巴细胞受ConA刺激后上清IFN-、（Thl）和IL-4（Th2）水平（P0.05）,说明饮水口服GSLS能增强机体的Thl和Th2型细胞免疫应答。而Thl和Th2型细胞免疫在抗病毒感染和调节体液免疫应答中均发挥一定作用，本研究结果证实GSLS是一种

12、比较理想的免疫佐剂。胸腺、脾脏和法氏囊是家禽的重要免疫器官，参与机体全身的体液免疫应答和细胞免疫应答，是动物免疫系统执行免疫功能的重要组织结构，其发育状况直接决定家禽机体免疫应答水平的强弱，免疫器官重量成为评价动物机体免疫应答水平的指标之一。免疫器官指数是免疫器官重量与其体重的比值,是衡量免疫器官发育状况方法之一，成为表征机体免疫应答水平高低的指标之一。一般来说，免疫器官指数越大，说明机体的免疫应答水平越强。本研究结果表明，饮水口服GSLS显著提高鸭群的脾脏和法氏囊指数（P0.05）,说明GSLS具有增强机体免疫功能的作用，与本研究发现的饮水口服GS任能提高鸭血清抗AIV特异性HI效价和细胞免

13、疫应答水平结果相一致，说明GSLS是一种有效的口服免疫佐剂。动物机体的呼吸道、消化道和泌尿生殖道的黏膜中分布有丰富的免疫细胞，这些免疫细胞蛆成了机体黏膜免疫系统机体的黏膜免疫系统是病原微生物突破机体防御的主要屏障，也是机体免疫应答的重要组成部分,机体的体液免疫、细胞免疫应答都有黏膜免疫系统的参与。因此,黏膜免疫功能成为评价免疫佐剂的主要指标之一。SIgA是肠道黏膜免疫的主要效应分子，成为评价肠道黏膜免疫功能的指标从本研究结果可以看出，饮水口服GSLS后鸭群肠道SIgA含量显著高于对照组(P0.05),说明GSLS具有增强机体肠道黏膜免疫功能的作用，表现出定的黏膜免疫佐剂潜质。有研究发现，黏膜免

14、疫能激活机体黏膜免疫和系统免疫应答见。而本研究发现饮水口服GSLS组鸭群的体液免疫应答水平升高，该结果恰好说明饮水口服GS1S通过增强机体黏膜免疫功能来激活机体体液免疫应答，可能是GSLS发挥口服免疫佐剂作用的机制之一。此外,GSLS发挥免疫佐剂效应还可能与GSLS中皂忒单体的构效关系、皂忒对免疫细胞的刺激作用有一定关系。在正常状态下，动物机体内氧化与抗氧化过程保持动态平衡，当机体遭受病原微生物等外源性或内源性有害剌激时，氧自由基产生速度远超抗氧化系统的清除能力，过量氧自由基破坏正常组织和细胞功能,导致机体处于氧化应激状态，从而诱发动物出现多种疾病或加重疾病发展MDA是细胞膜多不饱和脂肪酸过氧

15、化物的降解产物，能反映机体脂质过氧化程度高低，成为表征机体过氧化损伤的指标之一。SOD是机体内一种自由基防御酶，能清除机体内的过氧化物，能反映机体抗氧化程度高低，成为表征机体抗氧化能力高低的指标之一”句。本研究结果表明,饮水口服GS1S能显著降低血清MDA水平，显著提高血清SOD水平，说明CSLS能够调节鸭群体内氧化与抗氧化动态平衡,维持鸭群肠道氧化还原状态，保持生物膜完整性，与相关资料报道的人参具有抗氧化功能相一致有研究发现，脂质过氧化能损伤机体免疫功能】。本研究结果说明，GSLS可能通过提高机体的抗氧化功能来增强机体免疫功能，可能是GS【S发挥免疫佐剂作用的机制之一O参考文献：1 丛立新.

16、禽流感病毒感染SPF鸭抗体消长规律及相关mi-croRNA表达研究D.长春：吉林大学,2012.2 王梅.四川省养替场鸭流感免疫程序调查及抗体水平监测D.雅安：四川农业大学，2013.3 黎PH,张铁军，刘素香，等.人参化学成分和药理研究进展：JL中草药，2009.40(1)：164-166.4SongXM,HuSH.AdjuvantactivitiesofsaponinsfromtraditionalChinesemedicinalherb、J.Vaccine,2009,27(36):4883-4890.5JShiW,WangYT,l.iJ,clal.Investigationofginse

17、nosidesindiffcrrnlpartsandagesofPanaxginsengJ.FoodChemistry,2007,102：664-668.6 ZhaiL,LiY,WangW,etal.EffectoforaladministrationofgiriNengstem-andleaf-saponins(GSLS)on(heimmunerc-sponsstoNewcaMllediseasevaccineinchickensJ.Vaccine,2011,29(31)：5007-5014.7 王俊峰，陈胧南，温超，等.合生素对肉鸡生长性能、免疫器官指数、血消免疫指标及肠道萌群的影响Jh动

18、物营养学报.2010.22(1)：163-168.8 物汉春.动物免疫学M.第二版.北京：中国农业大学出版社.2004.9 李金华，叶伟成.王一成，等.雏鸭禽流感母源抗体消长动态测定J.浙江畜牧瞄2008(2)：1-2.10 才学鹏，景志忠.邱国庆.动物疫苗学M.第二版.北京：中国农业科学技术出版社.2009.11 AguilarJC,RodriguezEG.Vaccineadjuvantsrevisiteen!enlogy-,2000,35(11)：805-814.15 李彦伸.戴建君，庾庆华.黏膜免疫佐剂的研究进展：J.中国畜牧兽废.2007,34(12)：86-90.16 SunJH,HuS,SongXM.Adjuvantefleclsofproto;)anaxadiolandpmlopanaxatriolsaponinsfromginsengrootsontheimmuneresponsestoovalbumininmiccJ；.Vaccine,2007,25(6)：1114-1120.17 郑良焰，陈龙，徐家华，等.H9亚型禽流感病成感染引起MD(：K细胞