兔瘟疫苗的研究应用现状.docx

1、兔瘟痿苗的研究应用现状刘付敏.彭远义(西南大学动物科技学院.重庆北暗400715)兔病毒性出血症(RHD)俗称“兔瘟”，或称兔出血症，是由兔病扇性出血症病毒(RHDV)引起的兔的一种急性、高度接触性传染病，特征为呼吸系统出血、肝坏死、实质脏器水肿、瘀血及出血性变化。本病于1984年在我国江苏省的江阴县首次被发现，随后迅速蔓延至全国25个省、市、自治区。迄今亚洲的朝鲜、印度和黎巴嫩、美洲的墨西If、非洲的喀麦隆和欧洲的奥地利、比利时、捷克、丹麦、法国、德国、希腊、卢森堡、荷兰、波兰、西班牙，瑞典、瑞士及南斯拉夫等国也都有发生。本病常呈暴发性流行，发病率及病死率极高，对易感兔致病率达90%,病死率

2、高达100%,是危害养兔业的最严重的疾病之一。对RHDV感染至今尚无4效治疗药物，所能应用的治疗措施仅限于对症治疗和支持治疗。目前，各国都加大了RHDV疫苗的研究力度，以便能够对RHDV感染进行有效的预防和治疗。一、病原特性RHDV属杯状病毒科(CaUcivi-ride)兔病毒属(thegenuslagovius),RHDV为圆形边缘不很整齐，正二十面体立体对称，裸露无囊膜，外径为2550nm,-般为3234nm,芯幅在径约20nm。该病毒侵入细胞后先在细胞核内复制装配，然后再向胞质及胞外扩散。衣壳内为约7.5kb单链正RNA,具有两个基因组片段。含毒病料在-5C条件下可较长时间不失其毒力，将

3、“免瘟”肝病料保存于保存液中，置一5C冰箱内，经413d,人工感染家兔仍然发病死亡，说明“兔瘟”病毒保存413d尚存活。兔瘟病毒具有很强的血球凝集活性，并能被免疫血清的特异性所抑制，因此，这种特性可用于诊断的口的。RHDV是侵害多种组织细胞的泛嗜性病毒，它主要存在于病兔的肝、肾、血细胞的细胞质中，不见于细胞核内。以病兔的含毒肝脏组织,经肯霉素和链容素处理后，于厌气肉汤、血琼脂和沙氏培养基中培芥，皆无萌生长。培养物注射于健康的成年兔,13d内死亡。剖检所见病理变化与自然病例相同。病毒颗粒对乙酰、氯仿及低pH值有抗性，1%的机氧化钠、2%的甲轻和2%的漂白粉对本病毒有很好的消毒作用。二、RHDV疫

4、苗由于RHDV较难在家兔以外的实验动物、鸡胚、鸭胚以及多种原代细胞和传代细胞系上适应培养。而旦目前还未研究清楚兔瘟病毒存在儿个血清型，毒株间抗原性的差异也直接影响免疫效果oRHDV病毒核酸经灭活后失去传染力，但其核衣光作为主要抗原成分具有良好的抗原性，能使家免在72h开始建立免疫力。因此，用该类苗对兔进行预防注射和紧急接种，可有效地防治免瘟。(-)兔瘟组织灭活苗1984年5月扬州大学农学院王永坤等成功研制兔瘟组织天活苗，该疫苗效果可靠、安全，能有效地预防免瘟的发生。注射疫苗后，有极少数兔可出现哲时性停食或疼痛反应，但经l2d后即可恢复。自从王永坤等首先研制成功了兔瘟组织灭活疫苗以后，不少地方相

5、继就地采集死兔肝脏病料制作疫苗，作为扑灭兔瘟的应急措施。(-)兔瘟油乳剂灭活疫苗虽然兔瘟组织灭活疫苗对该病的预防发挥了一定作用，但组织灭活疫苗存在诸如在保存过程中易结块、病料组织悬液颗粒较大，易堵塞注射针头等问题。为此，1997年场州大学农学院又研制成功r兔瘟油乳削天活疫苗，经血凝抑制和攻毒试验结果表明，在含有相同抗原定制备的疫苗，兔瘟油乳剂灭活疫苗比兔瘟组织灭活苗免疫后血清HI抗体效价高，而且油乳剂灭活苗在体内免疫时间K。(三)兔瘟蜂胶组织灭活苗根据芥兔人员的普遍反映，普通组织灭活疫苗免疫时间短，需要多次注射免疫。兔瘟油乳剂灭活疫苗效果虽然比较理想，在机体内吸收慢，维持时间於，但可能会影响肉

6、质。蜂胶站一种广谱生物活性物质，对活细胞和机体无毒副作用，具有增强免疫，提高抗体效价的功能。2003年，宁康健、王慈等用病毒致死兔的肝组织，制成10%的兔瘟组织灭活苗和10%的兔瘟蜂胶组织灭活苗，用常规血凝抑制试验检测比较了注射兔瘟组织灭活苗和兔疽蜂胶组织灭活苗后兔体内抗体水平的消长情况，结果表明兔疯蜂胶组织灭活疫苗吸收快、产生效价高而持久，明显优于普通组织灭活苗。2002年，针对兔痕组织灭活苗的缺陷，张冰和孙德明等对兔痕组织灭活疫苗、白油佐剂灭活疫苗和蜂胶佐剂灭活疫苗进行了免疫效果比较，结果表明组织天活苗中的抗原成分在短时间内即能大髭地被组织吸收，刺激动物机体，因而产生较高抗体水平所需的时间

7、短，而佐剂灭活疫苗由于佐剂的作用，抗原成分释放缓慢，产生高水平抗体所需的时间要长，所以佐剂疫苗产生抗体持续的时间长。此外佐剂疫苗不需要特殊的保存条件，室温卜,存放半年一般不失效、旦免疫注射过程中不会发生针头堵塞而组织灭活疫苗须在4C8C条件下保存，R易疝结成块，使注射困难。2002年，侯艳红、钱碟6等采用超滤浓缩技术制备纯化的鸡法氏囊活性肽（分子量IkDa以F,主要成分为法氏囊活性肽），以不同的剂址肌肉注射45日於母兔，同时颈部皮F接种兔瘟灭活疫苗，观察法氏囊活性肽对免瘟疫苗免疫效果的影响。结果表明：纯化的法氏囊活性肽能够加快兔瘟抗体产生的速度，缩短诱生抗体时间，提高抗体水平，延长抗体维持时间

8、。（四）兔瘟H9组织灭活疫苗由于制苗用的易感兔，其来源日益困难，价格昂贵，使人工发病家兔制造兔瘟组织灭活疫苗困难重重。由于兔瘟病毒的不同毒株对家兔致病力的强弱，及凝集人“O”型红细胞的作用，有明显的差异。为提高疫苗的免疫效果和降低生产成本，周学利、朱传民等重新筛选毒株研制兔瘟疫苗，发现兔瘟病毒H9毒株对家兔有强大的致病力及较高的血凝价，并获得了免疫谱广、致病性强、抗原性好的RHDV-H9毒株，使制苗用易感兔的死亡率由58%提高85%以上，加入佐剂制成了高效、价廉的兔瘟疫苗。（五）兔瘟联苗1. 兔瘟、巴氏杆菌二联苗。兔瘟、兔巴氏杆菌病是传染快、流行广、发病急、死亡高、危害性大的家兔毁灭性传染病。

9、为了控制该病的发生和流行，降低家兔发病死亡，保护养兔业的健康发展。四川省井研县自】991年以来，应用自己研制的兔瘟、巴氏杆菌二联苗对该县家兔进行了免疫试驶，在全县开展田间试验，取得了显著的经济、社会效益。实践证明该疫苗不论是预防免疫，还是紧急免疫，都对兔瘟和巴氏杆菌病有较好的免疫效果。二联苗紧急接种对健康兔或初发病的兔免疫效果较好，能获得坚强免疫力，而对发病已出现症状或典型症状的家兔免疫效果较差，而时还有加速家兔死亡的情况发生。二联苗安全性好,预防免疫怀孕兔无流产征兆和流产,奶兔也未发现不良反应和死亡.商品幼兔在断奶后重新加免一次，可获得终身免疫。2. 免瘟、巴氏杆菌病、鲍氏校茵病三联灭活苗。

10、免瘟、巴氏杆菌病、魏氏梭函病是由不同的病原微生物引起的兔的三种传染病。由于这三种病发病率和致死率较高，对养兔业威胁极大。许兰菊、张书松等用人工感染兔瘟病兔的肝、脾、肾及从患急性巴氏杆萌病和魏氏梭菌性肠炎病兔分离的细菌制成氮氧化铝甲醛灭活苗（兔三联苗）。在流行兔瘟、巴氏杆菌病、魏氏梭菌病的兔场试用该疫苗免疫家兔，在免疫后7d至8个月内能有效地预防这几种传染病。在兔场每隔4-6个月用兔三联苗进行一次免疫接种，井结合严格消毒等综合措施，即可有效地防止免瘟、兔巴氏杆菌病及兔魏氏梭菌病的发生。兔三联苗价格低廉，便于贮存、运输及使用。吴强、刘洪斌等研制了兔瘟、巴氏杆菌病、魏氏梭菌病三联浓缩疫苗，该疫苗浓缩

11、后每只家兔每次只需接种1ml,不仅免疫效果未受影响，而且还具有使用方便、副作用小等优点。3. 兔盘、巴氏杆菌、魄氏枚菌、波氏杆菌四联苗。丁勇于1999年成功研制了兔疽、巴氏杆埔、魏氏梭菌、波氏杆菌四联苗，该联苗克服了联苗混合时各基础苗的含敢不足及生产髭低等缺点。同时安全叮察，免疫性能好，免疫持技期达半年以上。四联苗具有简化免疫程序，一次性完成商品肉免应免疫苗，既省力、省财，又减少应激次数等优点，利于推广应用。三、兔瘟疫苗的使用本病尚无特效药物治疗，预防接种是防止兔瘟的最佳途径，但是在家兔生产过程中，尽管家兔已接种了免瘟疫苗，但在规定的免疫期内仍发生兔瘟或抗体监测时达不到应有的抗体水平，共至右发

12、生整个兔群暴:发兔瘟的情况。（-）导致兔瘟疫苗免疫失败的主要原因1. 过早或过晚免疫导致兔瘦丸疫失畋。忽视家免个体的差异，采用同一个免疫程序来进行免疫容易导致免疫失败。如仔兔出生后体内有较高水平的母源抗体，对有母源抗体保护的仔兔实施接种免疫，常被母源抗体所中和，免疫效果不佳。同样，如果首免时间过晚，在母源抗体消失后再接种疫苗，则会出现免疫空白期，造成未免疫时已感染，错过r免疫的最佳时间。2. 兔瘟保护期短.按说明书剂量首免后25d才能产生保护力，保护时间仅为20d,仔兔75日龄后，抗体水平迅速下降，如不及时二免，抗体效价很快低于正常值。这就是免疫后仍然发生兔瘟的-个重要因素。3. 疫苗保存和使

13、用不当。日前市售的多为兔瘟组织灭活苗，是一种均匀的混悬液，应当低温保存，保存温度在15C以上或冷冻都易造成疫苗效价降低。必须进行皮下接种，不可饮水或饲料免疫。多种疫苗同时接种时要根据当地疫病发生和流行情况，确定重要和次要，不能在7d内将几种疫苗一起免疫接种，否则会降低免疫效果，更不能将几种疫苗混合使用.因为免疫接种后，会产生应激反应，机体发生一定的机能变化，有的甚至体温稍微升高。由于不同的疫苗类型或免疫途径不科学、免疫技术不规范等因素造成注射部位形成肿块导致注射的疫苗吸收不良，导致产生的免疫强度不足，遇强毒攻击则会发病.4. 养殖户防疫卫生意识不强。平时不注重消毒，免场内外环境卫生差，类、尿等

14、排泄物没有及时清理，环境当中已经存在大缺的强毒株，导致病原菌滋生。如果兔群中感染其他病菌引起组织器官不同程度的病变，也会降低机体抵抗力，影响免疫效果。注射器具消毒不彻底，对疫苗町能造成直接污染，注射过程中没有做到1兔1针头，造成疾病传播。5. 饲左蓉理不如兔瘟免疫接种产生抗体需要足够的营芥，骨养缺乏和不足会影响抗体生成的速度和数量。因此，应饲喂全价饲料，适当增加生物学价值高的蛋白质含景，进行科学饲养管理。在鼠害严煎、应激、兔舍内氨气浓度过高时也同样会降低免疫效果。6. 药物因素。注射疫苗前后-周内大削E：使用各种抗生素等都会影响到疫苗免疫作用的发挥。某些抗生素、抗球虫药、肾上腺皮质激素、消奏剂

15、和抗病茬药物能够破坏灭活疫苗的抗原性，干扰免疫应答,因此,在免疫的前后3d不能使用消毒药、抗生素、抗球虫药和抗病毒药。免疫接种时，在饲料中添加双倍呈的多种维生素，同时喂给左旋咪唆可有效提高兔群的免疫应答。（二）防止免疫失败的措施I. 制订合理的允痕程序。要根据各兔场实际，制订合理的免疫程序以及按程序准时免疫接种是取得良好免疫效果的基础。当有疾病发生或体质下降时不能免疫接种。，资料表明.用兔瘟疫苗免疫过的母兔，其所产仔兔的伴源抗体在50日龄内的保护率为100%,5560日龄有75%不能抵御强毒攻击,70日龄有100%不能抵御病毒攻击，没有作兔瘟疫苗免疫的母兔，其仔兔45日龄时则完全不能抵御强毒攻

16、击；无论母兔免疫与否其仔免在30日龄内均对兔瘟病谁不敏感。因此，确定兔瘟的免疫程序为：未经免疫过的兔群仔免在30日龄应用兔瘟疫苗旺行首免，免疫兔群的仔兔在4245龄应用兔瘟疫苗进行改免。符只兔皮F注射疫苗1ml,180日龄复免一次，成年兔每4个月免疫一次，每次注射疫苗2ml。2. 加强科学何养管理和防疫消毒工作。做到封闭式饲养、定期消毒,注意防K害，杜绝饮水接种免疫，禁止使用过期、夹效或劣质疫苗。另外兔瘟疫苗在运输过程中必须保温（2C8C）,使用过程中应注意现配现用，没有用完的应放在冰箱冷藏室或保温杯内。注射器具应该严格消毒，尽段做到1兔1针头.四、展望迄今为止，RHDV灭活疫苗的研究虽然已有

17、一定的进展，但该病毒的体外培养仍是难题还没有找到合适的体外培养细胞。现仍用该病死兔的肝脏制灭活苗，因灭活不彻底有导致放毒可能，故有必要在病卷结构和体外易感细胞上突破，研制基因疫苗。相信，随若对该病毒疫苗研究、认识的不断深入，将给我们预防RHDV感染带来福昔。参考文献（略）农业部新批准11家兽药GMP企业近H,农业部发布第H71号公告，批准北京天牧清源生物技术有限公司等）1家兽药生产企业为兽药GMP企业（见表1）,核发兽药GMP证书。赣州百灵动物药业有限公司等5家鲁药生产企业通过鲁药GMP夏验（见表1）,核发洋药GMP证1弓。表1兽药GMP合格企业目录企业名称北京天牧清源生物技术有限公司北京帕尔

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