Ⅲ价轮状病毒基因重配疫苗稳定性研究.docx

1、ID价轮状病毒基因重配疫苗稳定性研究寇桂英，包红，安红，周旭(兰州生物制品研究所，兰州730046)摘要:为了研究皿价轮状病毒基因重配疫苗的稳定性，对28T、25弋、37丁放置不同时间的9批成品疫苗定期取样观察外观物理性状、检测病毒滴度。结果表明，在28弋可保存两年以上,疫苗滴度保持不变;在25勾放置2周、37Y放置1周后疫苗滴度开始下降，因此，该疫苗在贮存、运输以及使用过程中环境温度应以28Y为宜。关键谒:轮状病毒;重配株;热稳定性;病毒滴度中图分类号:R372.2文献标识码:A文章编号：1005-5673(2009)04-0011-03Studyonthestabilityofthetri

2、valentreassortantrotavirusvaccineKOUCui-yingtBAOHong,ANHong,etal.(IjinzhouInstituteofBiologicalProductstLanzhou,730046,China)Abstract:Inordertostudythestabilityofthetrivalentreassortantrotavirusvaccine,thetitersandcharacteristicsofvaccinesplacedat2"8Tf25and37Yfordifferenttimeweretested.Theteste

3、dresultsshowedthatrotavirusvaccinesarestilleflectivewhentheyarestoredat2-3龙for24months,andthetimeoftiterreductionforvaccinestoredat25Yistwoweeks,butthatisoneweekstoredat37T.Inconclusion,theenvironmentaltemperatureof2-8Yismoresuitableforvaccinestorage,useandtransportation.Keywords：Rotavirus;Reassorta

4、ntstrains;Stability;Virustiter轮状病毒是引起世界范围内5岁以下婴幼儿急性腹泻和死亡的重要病因。世界各地常见的感染婴幼儿轮状病毒为G1G4型，目前尚无治疗轮状病毒腹泻的特效药，接种轮状病毒疫苗是预防轮状病毒感染、发病和死亡比较经济和有效的方法。疫苗的免疫效果与抗原表位的结构完整性密切相关，因此探讨疫苗抗原结构稳定存在的内部溶剂属性和外部环境条件至关重要，通过系统的常规留样观察法和加速热稳定试验，研究了III价轮状病毒基因重配株疫苗的热稳定性，为该疫苗的储存、运输、使用等过程中环境温度的设置提供重要的理论支持。材料与方法1材料1.1疫苗III价轮状病毒基因重配疫苗9批

5、(批号为20060601.20060602.20060603、20060604.20060605、20060606.20060607,20060608、收稿日期：2009-05-18;修回日期：2009-08-17通讯作者：周旭,Tel者简介:寇桂英(1973-),女，医学生物学_E程师，主要从事病毒性疫苗研制工作。20060609),规格为2ml/瓶，来源于兰州生物制品研究所第二研究室。1.2MA-104细胞由兰州生物制品研究所第二研究室保存。1.3轮状病毒EUSA检测试剂盒由兰州生物制品研究所出品(国药准字S10870016)，实验方法按说明书进行。1.4仪器设

6、备CO?培养箱、冰箱、酶标仪、倒置显微镜。2方法2.1疫苗贮存温度和时间每批供试疫苗分为三组，分别置于28龙、25Y、37T；28Y实验组放置的9批次疫苗分别于6、9、12、15、18、24个月取样,25T放置的疫苗分别于3、7、14、21、28、35d取样,37T放置的疫苗分别于l、3、7、14、21、28d取样。2.2外观观察透视法对疫苗的澄清度、沉淀、悬浮物、颜色进行观察。2.3病毒滴度测定按中国生物制品规程2000年版,2002年增补本中效力检定部分进行。将生长状态良好的MA-104细胞转种于96孔组织培养板各孔中，置37Y5%CO?培养箱培养，镜检确定细胞生长良好，将待测供试品作10

7、倍系列稀释，并取io-210,系列梯度,每稀释度纵向平行接种4孔，每孔100心，同时以细胞培养液为空白对照，置37Y5%CO2培养箱培养至镜检病变为止,-20T冻融2次后用轮状病毒EUSA试剂盒检测每孔抗原量,并用Karber法计算其logCCID/ml值。2.4统计分析用SPSS软件进行方差分析，确定疫苗滴度改变的统计学意义。结果1疫苗存放于28T时外观及滴度稳定性9批供试疫苗在该条件下保存24个月后，外观物理性状并没有发生明显的改变，对每一时间段收获的疫苗测定滴度，并用Karber法计算其logC-CIDjo/ml值，结果见表1。表1疫苗28P放置不同时间检测的滴度(1咽(：10*/011

8、)Table1Virustiterofthevaccineindifferentdetectiontimestoredat2-8(logCCID/ml)LotNo.Time(m)06912151824200606015.505.505.505.505.505.505.50200606025.505.505.505.505.505.505.50200606035.505.505.505.505.505.505.50200606045.755.755.755.755.755.755.50200606055.505.505.505.505.505.505.50200606065.505.505.50

9、5.505.505.505.50200606075.505.505.505.505.505.505.50200606085.755.755.755.755.755.505.75200606095.505.505.505.505.505.505.50对上述数据进行统计学分析，任意两组间的P=1.000,无统计学意义,说明在28勾存放疫苗24个月，疫苗滴度持续稳定，没有发生明显的下降。【I价轮状病毒基因重配疫苗效期初步确定为一年，从结果中可以看出,28T时9批供试疫苗在2年内病毒滴度保持稳定，因此,28乜可以作为疫苗贮存、运输以及使用过程中的最佳环境温度。2疫苗贮存于25幻不同时间的外观及滴度9批

10、供试疫苗在25Y放置1个月后，外观物理性状检查没有发生明显的变化，澄清度均符合规程要求;滴度测定结果见表2。表2疫苗25P放置不同时间检测的滴度(logCCID./ml)Table2Vimstiterofthevaccineindifferentdetectiontimestoredat25*(logCCID/ml)LotNo.Time(d)03714212835200606015.505.505.505.004.504.002.50200606025.505.505.005.004.754.252.50200606035.505.505.504.754.003.502.50200606045

11、.755.755.755.004.753.502.50200606055.505.505.004.754.504.003.00200606065.505.505.505.005.004,502.50200606075.505.505.004.754.754.503.00200606085.755.505.505.004.003.502.50200606095.505.505.504.754.504.003.00从表2中可以看出随着放置时间的增长，其滴度开始下降，用SPSS统计软件分析,0d、3d、7d之间的P=1.000,无统计学意义，14d、21d、28d、35d任一项同前三项之间的P=0.

12、000,有统计学意义，最后三项相互之间的P=0.000,有统计学意义，说明在该条件下疫苗放置7d左右病毒滴度保持不变，之后滴度开始下降，因此该疫苗的贮存、运输以及使用过程中尽量避免长时间的室温放置。337T加速稳定性试验9批供试疫苗在37T放置1月之后，物理性状外观检查没有发生明显的变化，疫苗滴度检测结果(见表3),经统计学分析,0d、1d、3d三项之间的P=1000,无统计学意义,7d、14d、21d、28d四项任一项同前三项之间的P=0.000,有统计学意义，且相互之间的P=0.000,有统计学意义;说明在该条件下疫苗滴度在前3d保持稳定，之后开始下降，至21d时会降到一个很低的水平,因此

13、疫苗贮存、运输以及使用过程中尽量避免环境温度的过高，须要求冷链储运。表3疫苗37P放置不同时间检测的滴度(logCaDj./ml)Table3Virustiterofthevaccineindifferentdetectiontimestoredat37t(logCCID/ml)Timc(d)LotNo.0137142128200606015.505.505.504.754.252.502.50200606025.505.505.004.254.002.502.50200606035.505.505.004.503.502.502.50200606045.755.755.504.504.003

14、.502.75200606055.505.505.254.503.752.502.50200606065.505.505.004.504.253.002.75200606075.505.505.505.004.502.502.50200606085.755.505.504.754.503.002.50200606095.505.505.004.254.002.502.00讨论不同温度下疫苗可贮存的时间不同，研究疫苗的稳定性，对疫苗运输、贮存以及使用过程中环境温度的要求至关重要；在实验中,轮状病毒基因重配疫苗随保存温度升高，疫苗滴度变化加快，在28Y可保存2年以上，病毒滴度无明显下降;在25Y贮存2周、37勾贮存1周后病毒滴度开始下降。将28乞已放置了26个月的9批轮状病毒基因重配疫苗于2008年9月10日又作了一次病毒滴定，滴度与当初相比无任何变化，物理检查其颜色没有发生改变，外观仍澄清，无混浊及异物；多次检测结果充分证明,28Y是贮存该疫苗的最适温度.这提示该疫苗在贮存、运输和使用过程中必须注意冷链要求,才能最大可能的保证疫苗质觉和稳定性。参考文献：1)白植生，陈冬梅，申硕.口服轮状病毒活疫苗LLRW5株的选育及鉴定J.中国生物