翻白草总黄酮降血糖作用的药效学研究

1、中Information on Traditional信息Medicine2010 年第 27 卷第 3 期Vol. 27，No. 3，2010·20·翻白草总黄酮作用的药效学研究凤( 黑龙江中大学，黑龙江 哈尔滨150040)摘 要:目的:研究翻白草总黄酮富集物药理作用。方法:以小剂量链脲佐菌素( STZ) 腹腔注射大鼠模型，灌胃给予高剂量36g·( kg·d) 1 、中剂量18g·( kg·d) 1 加高脂饲料诱导 2 型和低剂量9g·( kg·d) 1 的翻白草总黄酮富集物，测定大鼠的空腹血糖( FBG) 、

2、糖耐量 2h 血糖、血清( FINS) 、胰岛素敏感性指数( ISI) 、超氧化物歧化酶( SOD) 、丙二醛( MDA) ，并用 HE 染色法胰岛对大鼠进行病理切片观察。结果:中、高剂量的翻白草总黄酮能显著降低大鼠的空腹血糖值和血糖耐量，提高胰岛素敏感指数，减轻胰岛素抵抗，提高机体 SOD 活性，降低血清清胰岛MDA 含量，并对胰岛细胞起到保护修复作用。结论:翻白草总黄酮通过减轻胰岛素抵抗和保护修复胰岛细胞多种机制治疗 2 型:翻白草;黄酮; 号:R285. 5。;药效学文献标识码:A文章编号:1002 2406(2010)03 0020 05Study on Pharmacology of

3、 Decreasing Blood Glucose of Flavonoid from Potentilla Discolor BungeSUN Hai feng，CHANG Hong，YANG Ting，WANG Jiang feng( Heilongjiang University ofMedicine，Harbin 150040)Abstract:Objective: To study the pharmacology of Decreasing Blood Glucose effects of the total flavonoidsfrom Potentilla Discolor B

4、unge. Methods: The type 2 diabetes ms in rats is made by fedding high lipidsfoods together with injecting the streptozotocin( STZ) of small dose，then perfusing the rats stomach with the total flavonoids of Potentilla discolor Bung in high doze36g·( kg·d) 1 、medium doze18g·( kg·d)

5、 1 and low doze9g·( kg·d) 1 ，determinating the fasted blood glucose( FBG) ，the glucose tolerance test(2HPG)， the fasting insulin levels( FINS) ，the insulin sensitivity index ( ISI) ，the activity of SOD，and the amount of MDA，and detecting the pancreas islet B cells by HE. Results: the total

6、 flavonoids of Potentilla discolor Bungin high doze and medium doze had significantly effect of decreasing FBG and FINS on diabetic rats，improvingglucose tolerance and insulin sensitivity index and reducing insulin. Potentilla discolor Bung can in-crease the activity of SOD，decrease the amount of MD

7、A，protect and repair pancreas islet cells.:the total flavonoids of Potentilla discolor Bung can treat the two type diabetes mellitus by decreasing the insulin，protecting and repairing the islet cell.Key words:Potentilla Discolor Bunge; Flavonoids; decrease blood glucose;Pharmacology咳血、吐血、痈肿疮毒等1。近年来民

8、间流行用翻白翻白草为蔷薇科委属植物翻白草( Potentilladiscolor Bunge. ) 的带根全草，主要分布在北半球的温带和寒带。本草纲目载其:气味甘，微苦，性平，无 毒;有清热解毒、凉血止血功效，主治肺热咳喘、泻痢、草治疗草具有其并取得一定疗效。现有研究表明，翻白作用2，3。翻白草所含的黄酮类成分为的主要有效成分4，本实验以翻白草总黄酮富集物为材料，研究其对 2 型大鼠空腹血糖、糖耐量、血清胰岛素等指标的影响，探讨翻白草治疗 2 型的作用机制，为翻白草的开发利用提供依据。基金项目:黑龙江省科技攻关计划( GC06C40504)作者简介:(1964) ，男，教授，中药学博士，主要从

9、事中药及中药化妆品研究。材料仪器PHB 5 笔式酸度计( 上海伟业仪器厂); 日立1与开发1. 1收稿日期:2009修回日期:2010120221012010 年第 27 卷第 3 期Vol. 27，No. 3，2010中Information on Traditional信息Medicine·21·KY2000 半自动生化仪(开元医疗设备有限公采用喂养高糖高脂饲料加腹腔注射小剂量链脲佐 菌素( STZ) 的方法。75 只 Wistar 雄性大鼠自购置后适应性饲养 3 天后，将大鼠随机分为两组，空白组 10 只给予基础饲料，模型组 65 只喂以高糖高脂饲料 1 个司);恒温

10、水浴箱( 江苏金坛市医疗仪器厂);微量移液枪( 上海荣泰生化工程 托利多上海);电子分析天平( 梅);旋转蒸发仪( 上海亚荣生化仪器厂);K Q500E 型医用超声波器( 昆山月后，于实验前禁食不禁水 12h，模型组腹腔注射 1% 的 STZ 溶液 50mg·kg 1 ，正常组给予同体积的柠檬酸 柠檬酸钠缓冲溶液。72h 后尾静脉采血测空腹血糖，选择血糖值大于 11. 1mmol·L 1 的大鼠作为市超声仪器)。药品与试剂翻白草总黄酮富集物( 黑龙江中1. 2大学生药学提供);糖脉康颗粒( 成都中汇制药国药准字 Z10970026 );0. 9% NaCl 注射液( 哈药，

11、实验性动物模型，除空白组 10 只外，共有 40 只大鼠成模。将其随机分为模型对照组、糖脉康组、翻白草总黄酮富集物高、中、低剂量组五组，每组 8 只。制药六厂);链脲佐菌素( 美国 sigma 公司提供，批号:S0130);胰岛素放射免疫试剂盒( 北京市福瑞生物工实验给药方案空白对照组和模型对照组大鼠灌胃给予等体积生2. 3程公司);葡萄糖注射液( 哈药三精制药有限公司);蔗糖( 沈阳市新西试剂厂生产);葡萄糖(市理盐水。阳性对照组大鼠灌胃给予 1. 35g ·);冰醋酸( kg·d) 1 糖脉康溶液;翻白草总黄酮高、中、低剂量组分别灌胃给予 36g·( kg&#

12、183;d) 1 、18g·( kg·d) 1 、9g·( kg·d) 1 翻白草总黄酮药液。实验各组均连续灌胃 15d。科密欧化学试剂市耀华化学市凯通化化工有限公试剂学试剂公司);柠檬酸);柠檬酸钠(醇(市司);葡萄糖测定试剂盒( 上海荣盛生物技术有限公司，批号:20090101) ;SOD 试剂盒( 南京建成生物工程，批号:20090527) ;丙二醛( MDA) 测试盒( 南京2. 4各实验组大鼠空腹血糖的测定大鼠连续灌胃 15d 后，各组均禁食不禁水 12h，随后眼内眦取血，置离心管中 3500r·min 1 离心 10min，按血糖试

13、剂盒，采用葡萄糖氧化酶法结合分光光度法 测定大鼠空腹血糖值。，批号:20090527) 。建成生物工程1. 3实验动物健康 wistar 大鼠 75 只，体重(200 ± 20 ) g，雌雄各半( 上海斯莱克实验动物公司)。各实验组大鼠糖耐量的测定2. 5大鼠连续灌胃 15d 后，禁食不禁水 12h，检测空腹血糖值作为零时血糖值，随后按 3g·kg 1 剂量灌胃给予各组大鼠葡萄糖溶液，分别在注射后 0. 5h、1h 及 2h 测定大鼠血糖值，观察各实验组大鼠血糖变化情况。2方法2. 1 药品及试剂配制方法柠檬酸 柠檬酸钠缓冲溶液的配制:精密称取柠檬酸 2. 100g，溶于

14、100mL 重蒸馏水中，精密称取柠檬酸钠 2. 900g，溶于 100mL 重蒸馏水中，将柠檬酸溶液和柠檬酸钠溶液按 1 1. 32 配成 pH 值为 4. 4 的溶液( 现用现配并用酸度计准确测定) ，用 0. 22m 滤膜除菌，备用。1% 链脲佐菌素溶液的配制:精确称取链脲佐菌素100mg，溶于 10mL 柠檬酸 柠檬酸钠缓冲溶液中，摇匀( 此操作在冰盒上进行，并且避光，所配溶液在30min 内用完)。2. 6各实验组大鼠血清胰岛的测定检测糖耐量后第 2 天，各实验组禁食不禁水 12h， 眼内眦取血，置离心管中 3500r·min 1 离心 10min，精密吸取血清 100L，按

15、照放射免疫试剂盒说明操作，测定大鼠血清胰岛。大鼠胰岛素敏感性指数的测定各实验组2. 7胰岛素敏感性指数( insulinsensitivity index，ISI)计算公式为 ISI = Ln1 /( FINS × FBG) ，其中 FINS 为高糖高脂饲料的: 由 10% 猪油，2. 5%血清胰岛，FBG 为空腹血糖含量。将实验各组醇，1% 胆酸钠，20% 蔗糖，以及 66. 6% 的基础饲料组成。翻白草总黄酮富集物低、中、高剂量组配制方法: 精密称取翻白草富集物粉末 14. 2g、28. 4g、56. 8g，分别加入 282mL 蒸馏水，摇匀即得;糖脉康颗粒溶液:取糖脉康颗粒 4

16、0g 加入 148mL 蒸馏水，摇匀，待用。FINS 和 FBG 值分别代入公式计算胰岛素敏感性指数值。大鼠超氧化物歧化酶( SOD) 的2. 8测定各实验组检测糖耐量后第 2 天，各实验组禁食不禁水 12h， 眼内眦取血，置离心管中 3500r·min 1 离心 10min，用半自动生化仪检测超氧化物歧化酶( SOD)。大鼠模型的造模与分组2. 2中Information on Traditional信息Medicine2010 年第 27 卷第 3 期Vol. 27，No. 3，2010·22·富集物中、高剂量组在糖负荷后 0. 5h 达峰值，血糖升高幅度均明

17、显小于模型组( P < 0. 05) ，2h 后降低至糖负荷前血糖水平附近，与模型组血糖比较有显著性差2. 9 各实验组大鼠 MDA 的测定检测糖耐量后第 2 天，各实验组禁食不禁水 12h，眼内眦取血，置离心管中 3500r·min 1 离心 10min，用半自动生化仪检测 MDA。异( P < 0. 01) ，表明翻白草对作用。大鼠的糖耐量有各实验组大鼠胰腺组织形态的观察2. 103. 3 各实验组表 3。大鼠血清胰岛结果见大鼠麻醉采血处死后，迅速取出脾脏周围的胰腺，置于福尔液中固定，常规脱水，石蜡包埋，4m 切片，HE 染色后进行光镜检查。( x ± s)

18、表 3各实验组大鼠血清胰岛结果各实验组表 13组别例数( n)1 )血清胰岛素( IU·mL3. 1大鼠血糖水平结果见表 1。空白对照组8. 26 ± 1. 928各实验组大鼠血糖水平( x ± s)模型组825. 75 ± 7. 84例数( n)给药前血糖给药后血糖组别( mmol·L1 )( mmol·L1 )阳性组816. 68 ± 4. 84空白对照组模型组阳性组翻白草总黄酮低剂量组翻白草总黄酮中剂量组翻白草总黄酮高剂量组85. 62 ± 1. 325. 13 ± 1. 0617. 07 

19、7; 4. 7翻白草总黄酮低剂量组817. 39 ± 4. 25815. 31 ± 3. 3翻白草总黄酮中剂量组815. 16 ± 4. 08*815. 21 ± 3. 7712. 36 ± 5. 24815. 34 ± 3. 2610. 94 ± 6. 0710. 34 ± 1. 98*翻白草总黄酮高剂量组89. 49 ± 4. 87*9. 31 ± 5. 61*815. 28 ± 3. 32注:与模型对照组比较， P < 0. 01，* P < 0. 05。815. 1

20、8 ± 2. 86翻白草总黄酮富集物高剂量组、中剂量组血清胰注:与模型对照组比较， P < 0. 01，* P < 0. 05。翻白草总黄酮富集物高剂量组、中剂量组空腹血模型组( P < 0. 05 );低剂量组血岛素显著低于清胰岛素值与0. 05)。模型组比较无显著差异( P>模型组( P < 0. 05 );低剂量组空糖值显著低于腹血糖值与 0. 05)。3. 2 各实验组表 2模型组比较无显著性差异( P>3. 4各实验组大鼠胰岛素敏感性指数 结果见表 4。表 4大鼠糖耐量 结果见表 2。各实验组大鼠糖耐量( x ± s)各实验组大

21、鼠胰岛素敏感性指数( x ± s)例数( n)组别例数( n)胰岛素敏感性指数血清葡萄糖( mmol·L1 )组别空白对照组83. 74 ± 1. 720h0. 5h1h2h模型组86. 08 ± 5. 81空白对照组模型组阳性组85. 13 ± 1. 06 8. 75 ± 2. 417. 73 ± 3. 34 6. 04 ± 1. 15阳性组85. 32 ± 3. 74817. 07 ± 4. 726. 32 ± 3. 3123. 32 ± 2. 8320. 54 

22、7; 3. 37812. 35 ± 5. 2422. 56 ± 4. 5519. 27 ± 3. 8713. 31 ± 2. 02翻白草总黄酮低剂量组85. 24 ± 3. 15翻白草总黄酮低剂量组810. 94 ± 6. 0723. 89 ± 2. 2220. 54 ± 2. 6815. 53 ± 2. 98翻白草总黄酮中剂量组4. 96 ± 3. 18*8翻白草总黄酮高剂量组4. 56 ± 1. 32*8翻白草总黄酮中剂量组9. 49 ± 4. 87 19. 09

23、77; 2. 47* 16. 42 ± 2. 51* 11. 54 ± 3. 02*8注:与模型对照组比较， P < 0. 01，* P < 0. 05。翻白草总黄酮富集物高剂量组、中剂量组胰岛素翻白草总黄酮高剂量组19. 19 ± 3. 21* 16. 89 ± 2. 54* 11. 78 ± 2. 78*89. 31 ± 5. 61模型组( P < 0. 05 );低剂模型组比较无显著差异敏感性指数显著高于量组空腹血糖值与 ( P > 0. 05)。3. 5 各实验组结果见表 5。注:与模型对照组比较， P

24、 < 0. 01，* P < 0. 05。正常组大鼠血糖于灌胃给与 3g · Kg 1 葡萄糖0. 5h 后迅速升高并达峰值，以后血糖开始下降。模型组大鼠血糖于糖负荷后持续升高，虽于 2h 有所降低， 但与糖负荷前血糖浓度相比变化不大。翻白草总黄酮大鼠超氧化物歧化酶值( SOD)2010 年第 27 卷第 3 期Vol. 27，No. 3，2010中Information on Traditional信息Medicine·23·各实验组大鼠 SOD 值( x ± s)附图:表 5组别例数( n)SOD( NU·mL1 )空白对照组8

25、378 ± 29. 85模型组8305. 68 ± 24. 19阳性组8311. 76 ± 20. 15翻白草总黄酮低剂量组8321. 3 ± 60. 7350. 26 ± 12. 29*翻白草总黄酮中剂量组8翻白草总黄酮高剂量组345. 05 ± 23. 1*8注:与模型对照组比较，* P < 0. 05。翻白草总黄酮富集物高剂量组、中剂量组 SOD 显图 1 空白组大鼠胰岛组织形态模型组( P < 0. 05);低剂量组 SOD 与糖著高于尿病模型组比较无显著差异( P > 0. 05)。3. 6 各实验组表 6

26、大鼠 MDA 值 结果见表 6。各实验对大鼠 MDA 值( x ± s)组别例数( n)MDA( nmol·mL1 )空白对照组85. 95 ± 1. 13模型组87. 62 ± 0. 79阳性组86. 73 ± 1. 14翻白草总黄酮低剂量组87. 33 ± 1. 03图 2模型对照组大鼠胰岛组织形态翻白草总黄酮中剂量组6. 26 ± 0. 91*8翻白草总黄酮高剂量组86. 45 ± 0. 97*注:与模型对照组比较， P < 0. 01，* P < 0. 05。翻白草总黄酮富集物高剂量组、中剂量组

27、 MDA显著低于模型组( P < 0. 05);低剂量组 MDA 与模型组比较无显著差异( P > 0. 05)。3. 7 各实验组大鼠胰腺组织形态空白对照组大鼠( 图 1):胰岛呈圆形或椭圆型，边界清晰，胰岛细胞排列规整;模型对照组大鼠( 图 2): 胰岛明显萎缩，边界模糊，胰岛细胞排列紊乱，其数量较正常对照组明显减少，并有明显的细胞肿胀、坏死现 象，细胞核可见染色不清或深染，有核固缩现象;阳性对照组大鼠( 图 3):胰岛边界较清晰，细胞数量较模型对照组有所增加，细胞形态较好，无明显细胞肿胀、坏死，核清晰;翻白草总黄酮低剂量组( 图 4) 与模型对照图 3阳性对照组大鼠胰岛组织形

28、态组相近，胰岛程度小;翻白草总黄酮中( 图 5) 、高( 图 6) 剂量组大鼠胰岛的结构形态有不同程度，胰岛边界较清晰，细胞数量较模型对照组增加，其中高 剂量组胰岛恢复结果显著，细胞结构完整，无明显肿胀 坏死，无核固缩现象，接近正常胰岛结构。说明翻白草中、高剂量能修复胰岛组织，表现出促进图 4翻白草总黄酮低剂量组大鼠胰岛组织形态胰岛组织再生的作用，且其高剂量效果优于阳性。中Information on Traditional信息Medicine2010 年第 27 卷第 3 期Vol. 27，No. 3，2010·24·清除自由基的酶，可阻断自由基，促使产生 LPO 的链式

29、反应，从而保护细胞不受自由基的损害。大鼠抗氧化防御体系受抑制，自由基产生率大于清除率， 而LPO 的升高与SOD 活性降低呈负相关，同时与血糖升高呈正相关，说明血糖升高与自由基引起的脂质过 氧化有直接关系7，8。本实验检测血清 MDA 含量及SOD 活性结果:实验高、中剂量组的血清 SOD 活性明显增高，血清 MDA 含量明显减少，说明翻白草总黄酮可以提高大鼠机体 SOD 活性，清除自由基，并抑制脂质过氧化作用。胰岛细胞观察结果显示，翻白草总黄酮中、高剂量 组都不同程度修复胰岛 细胞，表明翻白草具有显著的修复胰岛组织，促进胰岛组织再生，从而促进胰岛素图 5翻白草总黄酮中剂量组大鼠胰岛组织形态胰岛素 细胞缺陷。参考文献:1，等. 10 种委的生药学研究J. 时珍国医国药，2008，19(12) :3039 3041.，郭新民.