核桃组织培养研究综述

1、核桃组织培养研究综述核桃组织培养研究综述2015级林综1班陶宇 2015050851植物组织培养作为一种有效的技术手段已被广泛应用于生产实践的各个领域。本文综述了影响核桃组培的主要因子, 不同的核桃品种、培养基、激素和培养条件等都会影响核桃的组织培养。并对组织培养过程中存在的褐化、污染、适宜培养基选择和外植体选择等问题及解决办法进行了讨论, 对核桃组织培养的应用前景进行了展望。外植体选择与消毒研究核桃的不同品种，其外植体分化与再生的能力差异很大。早实核桃、山核桃、黑核桃、“薄皮香“、“汾阳核桃 ”、等都有培养成功的报道。而其他品种则很少见到。国外学者在 M S培养基上培养核桃分生组织、茎尖、顶

2、芽时发现：2 3 mm长的茎尖、带 1 2个顶芽的茎段为最适培养材料 ;分生组织则不适合于作培养材料。李颖等利用青霉素和多菌灵来控制污染得到：多菌灵能有效地杀灭真菌，而青霉素在初代培养时只能起抑制细菌作用。傅玉兰等试验得出了美国山核桃的最佳灭菌方法：外植体在 70% 酒精中浸 30 s，再将其用 0. 2%升汞液 (加数滴吐温 80)浸 15 min，无菌水冲洗 10次，最后接种。培养基中添加适量活性炭，前期暗培养。培养基及主要培养条件培养基及主要培养条件培养基种类培养基种类核桃组织培养所用培养基有WPM(Woody Plant Miedium)、DKW、MS改良等，但效果最好的是 WPM和

3、DKW培养基。WPM是 1933年 Mecown Loydi 设计的 , 培养基中含有较低的盐分，硝态氮和钙、钾含量较高，不含碘和锰。张进、刘兰英、张俊林、张小红、奚声珂等人研究发现，核桃试管苗在 DKW培养基中，生长状况及嫩枝生长量明显高于其它培养基，并且认为用 DKW作为基本培养基是比较适宜的。激素激素激素在核桃组培中有着重要作用。组织培养基中 BA主要用于刺激腋芽不断分化、生长和诱导不定芽的产生，IBA主要促进腋芽生长。单独使用 IBA，侧芽发生少，嫩梢生长量小，所以组培微繁中，芽的增殖和嫩梢增长主要取决于 BA于 IBA二者的相对比例。许多研究表明，高浓度的细胞分裂素和低浓度的生长素配

4、合使用，有利于核桃愈伤组织的形成。杜金友认为6 -BA对核桃组培苗的生长有促进作用，可以提高瓶苗转化酶、超氧化物歧化酶等的活性，增强呼吸速率和叶片数，提高苗的繁殖系数。外植体褐化问题外植体褐化问题褐化是指外植体在诱导脱分化或再分化过程中 ,自身组织从表面向培养基释放褐色物 质 ,以至培养基逐渐变成褐色 ,外植体也随之进一步变褐而死亡的现象。外植体褐化外植体褐化的原因的原因核桃组织中酚类物质含量较高。酚类的糖苷化合物是木质素、单宁和色素的合成前体。因此 ,当酚类化合物含量高时，木质素、单宁或色素形成就多，导致褐变的发生。褐变现象能否得到有效控制，是核桃组培能否成功的关键所在。 防止褐化的方法防止

5、褐化的方法不同基因型、不同时期的外植体褐变的程度不同。所以应选取褐变程度低的品种，并且最好选用早春或秋季的材料作为外植体。植物体内酚类化合物含量和 PPO活性呈季节性变化。PPO活性和酶类含量基本是对应的，春秋季较弱，随着生长季节的到来，酶活性逐渐增强，所以一般都在早春或秋季取材。外植体的选择外植体的选择适宜的培养基和培养条件适宜的培养基和培养条件筛选合适的培养基，在无机离子的浓度和种类上选择合适的培养基。在激素的浓度和组合的基础上，调节pH可减轻褐化。把外植体置于黑暗或弱光和温度稍低的条件下培养，可抑制酚类物质的氧化。在不同的植物激素中，培养基中加入6 -BA和IAA、GA时，外植体褐变轻，

6、生长快看，附加 NAA的褐化较重，说明选择适宜的植物激素可以减轻揭变。在培养基中加入抗氧化剂和吸在培养基中加入抗氧化剂和吸附剂附剂在培养基中添加抗氧化剂或酚类物质吸附剂，是常用的防止外植体褐变的方法。硫代硫酸钠在免除培养物被酚类化合物氧化污染上作用很大，聚乙烯吡咯烷酮在生化分离制备中，常用作酚类物质的保护剂。活性炭也可以去除酚类氧化造成的毒害效应，其有吸附能力，可以减少有害物质的影响。研究展望研究展望关于组培中的褐变现象人们提出了各种假说，认为褐变的发生往往是多种因素共同作用的结果。因此，只有深入了解有关机制 ,找到影响褐变的主导因素和克服褐变的有效方法，才能在实践中防止褐变的发生。在对核桃的

7、组织培养研究过程中，有如下问题应慎重对待 :l初代培养中的问题初代培养中的问题核桃的初代培养是组织培养中最关键的一步，核桃枝条长期暴露在田间，容易滋生各种各样的细菌，有的细菌甚至长入组织内部。外植体即使经过细致的表面灭菌，仍然会发生污染。另外，核桃树体内富含酚类物质，克服污染和褐化这两大难题，是核桃初代培养成功的关键 。l继代培养中的问题继代培养中的问题这一阶段的主要任务是繁殖大量有效芽苗，用芽增殖的方法比通过愈伤组织分化，更有利于保持遗传稳定性和旺盛增殖，较少出现再生能力丧失等问题，植物生长调节剂在试管苗增殖中起着决定性的作用。但在植物体内，内源激素难以测定。因此，外源激素加入的种类及用量还要通过试验来确定。l生根培养中的问题生根培养中的问题生根是试管繁殖的最后一道复杂的工序，是能否进行大量生产和实际应用的重要环节,也是商