常用基本实验知识

1、一、常用基本实验知识1、离心转速和相对离心力的换算在众多的参考文献中都是以离心力（ g force ）作为实验参数的说明而非转速（ rpm ）。 g：相对离心力（RCF, relative centrifugal force）r ：旋转中心至转头内离心管某一部分的半径（以 mm 为单位）rpm ：转头每分钟旋转的转数（r/min） RCF(g)=1.12 ×10-5×r×（RPM）22、酶活力及其测定 2.1 酶的活性（酶活力）： 又称为酶活性，一般把酶催化一定化学反应的能力称为酶活力。通常以在一定条件下酶所催化的化学反应速度来表示。因此酶活力可用单位时间内单位体

2、积中底物的减少量或产物的增加量表示，单位为浓度/单位时间等。 酶是蛋白质，种类多，结构复杂多样，一般对酶的测定，不是直接测定其酶蛋白的浓度，而是测定其催化化学反应的能力，这是基于在最优化条件下，当底物足够（过量），在酶促反应的初始阶段，酶促反应的速度（初速度）与酶的浓度成正比（即 V=K E ），故酶活力测定的是化学反应速度，一定条件下可代表酶活性分子浓度。 测定酶活力常有以下几种方法： l ） 在一个反应体系中，加入一定量的酶液，开始计时反应，经一定时间反应后，终止反应，测定在这一时间间隔内发生的化学反应量（终止时与起始时的浓度差），这时测得的是初速度。 2 ）在一定条件下，加入一定量底物（

3、规定），再加入合适量的酶液，测定完成该反应（底物反应完）所需的时间，（非初速度，为一平均速度）。 2.2 酶活力单位： 是衡量酶活力大小的计量单位 酶活力单位：规定条件（最适条件）下一定时间内催化完成一定化学反应量所需的酶量。 根据不同情况有几种酶活力单位或又称酶单位。 国际单位： 1 、国际单位 U （active unit）：在最佳条件或某一固定条件下每分钟催化生成 1 mol 产物所需要的酶量为一个酶活力单位 。1IU = 1mol /min 2 、 “ Katal ” 单位：指在一定条件下 1 秒钟内转化 1mol 底物所需的酶量。 1 Kat=1mol/s Kat 和 U 的换算关系

4、： 1 Kat=6 × 10 7 U ， 1U=16067 n Kat 3、 比活力（比活性）：每单位（一般是 mg ）蛋白质中的酶活力单位数（酶单位 /mg 蛋白） 。 实际应用中也用每单位制剂中含有的酶活力数表示（如：酶单位 /mL （液体制剂），酶单位 /g （固体制剂），对同一种酶来讲，比活力愈高则表示酶的纯度越高（含杂质越少），所以比活力是评价酶纯度高低的一个指标。 在评价纯化酶的纯化操作中，还有一个概念就是回收率。 回收率 = 某纯化操作后的总活力 / 某纯化操作前的总活力 总活力 = 比活力×总体积（总重量） 3、实验数据处理3.1表示方法在实验过程中，选择合

5、适的数据处理方法，能够简明、直观地分析和处理实验数据，易于显示物理量之间的联系和规律性。1、列表法使用表格处理数据时，需要注意标明物理量的单位和符号。2、作图法常用作图包括曲线图、折线图、直方图等，所用图纸有直角坐标、极坐标、对数坐标纸等几种。3.2 数据分析1）测量结果表示测量结果包括测量值、误差、单位三部分。其表达式为： （单位）式中 在单次测量中是算术平均值，在多次测量中是由函数关系计算出的间接测量值； 为多次测量的误差。2）标准偏差 ： （i=1,2,n）需要注意的是：测量值的标准偏差并不表示测量值的误差的实际大小，因为测量值的偶然误差是随机的，所以测量值的标准偏差只表示，任一测量值的

6、误差落在区域（+ 、- ）内的概率为 68.3%,这就是标准偏差的含义。3）LSD多重比较方法最小显著差数测验法 F 测验的目的是判断 K 个处理平均数间的差异是否显著。在一个正态总体中，随机抽取两个独立样本，分别求得其均方 和 ，则将 和 的比值定义为 F ： F = ，此 F 值具有的 自由度 和 的自由度 ，如果我们在给定的 和 下进行一系列连续独立的随机抽样，就会得到一系列 F 值，这所有可能的 F 值所构成的分布叫 F 分布。F 分布下一定区间的概率可从教材所附的 F 表查出， F 表系各种 和 下右尾概率 =0.05 和 =0.01 时的临界 F 值（一尾概率表）。如 =4 ， =

7、8 时， =3.84, =7.01, 即表示如以 =4 （ =5 ） , =8( =9) 在一正态总体中进行连续抽样，则所得 F 值大于 3.84 的仅有 5% ，而大于 7.01 的仅有 1% 。所以附表的数值设计是专供测验 的总体方差 是否显著大于 的总体方差 而用的（ : 对 : > ）。在作 F 测验时应以取大值的均方（ 也叫大均方）作分子，取小值的均方（ 即小均方）作分母而计算 F 值。若所得 F 或 ，则该 F 值即为在 =0.05 或 =0.01 水平上显著，应否定 ，接受 ；若所得 F< , 则接受 。     在方差分析体系中， F

8、测验是用于测验某项变异因素的效应（如处理效应）或方差是否真实存在。所以在计算 F 值时，总是将要测验的那一项变异因素的均方（如 ）作分子，而以另一项变异因素的均方（如 ）作分母。如果作分子的均方小于作分母的均方，则 F<1 ，此时不必查表即可确定应接受 。因此如果样本平均数间的变异并不显著大于样本内（随机误差）的变异，则 F = / 将不会给出显著的值；反之，则 F 将给出显著的值。所以，由                 

9、60;         F =                          （ 9.10 ） 可以测验 : （简写作 ）对 : 不相等。    F 测验需具备以下两个条件：（ 1 ）变数 遵循正态分布 N( , ) ，（ 2 ） 和 彼此独立。当资料不符

10、合这些条件时，需作数据转换。 LSD是 R. A. Fisher (1966) 提出的，简称 PISD 法 (protected least significant difference) 。它是以试验错误率保护下的比较错误率为准的。其程序为：在处理间的 F 测验为显著的前提下，计算出显著水平为的最小显著差数 ；任何两个处理平均数的差数（ ） , 如果其绝对值 ，即为差异显著；若 ，为差异极显著；若 ，差异不显著，接受 。 我们知道，在两个样本平均数 比较时， t= 的 |t| 值若超过 , 即为在水平上显著。如写出其最小显著差数即是： = × 。 因此将之推广于多个样本平均数的任两

11、个平均数 和 之间的比较，即有：                = ×                            （ 9.11 ） 而由前述内容可知，当两样本的 n 相等时 ,

12、= ，在方差分析中，因为自由度增大 , 此式中的 有了更精确的数值 。 = 而 ， 同一试验的误差是一致的，每处理的观察值数目相等时，公式(9.11)中的：                 =                             （ 9.12 ） 并按 查出 值。 4、（二） 常见缓冲液配制二、实验方法（中英文）实验1 细胞膜透性测定选取10个荔枝果皮，用直径10mm的打孔器在果皮中间打20个圆片，去离子水洗净后用