发酵操作流程

1、1 基因工程菌发醉操作流程.检查发酵车间是否达到发酵要求（所以设备处于待用状态）。2 .通知蒸汽车间按时送符合要求蒸汽。3 .种子罐基础培养基的领料及定容配制。4 .种子罐的PH、DO电极的校正安装和补料口堵头更换。5 .种子罐进料，调PH。6 .种子罐基础培养基在位灭菌，同时灭移种管道上段。7 .种子罐冷却后可连接酸、碱、消泡剂补料瓶。8 .种子罐培养基温度、PH（需进一步校准卜罐压、消泡达到发酵条件。通知菌种室准备菌种转接。9 .无菌操作将种子罐所需MgSO4、Amp转入菌种转换罐。10 .种子罐扩增培养发酵阶段需平稳控制罐压、PH、DO、温度、消泡。11 .大罐基础培养基领料及配制。12

2、 .大罐PH、DO电极校正安装及补料口堵头的更换。13 .大罐进料、定容、调PH;碱罐碱液的配制。14 .大罐基础培养基在位灭菌，同时对移种管道、进料管道、补料管道、碱罐及碱管道上段的灭菌。15 .大罐基础培养基温度降至发酵温度后再次校准PH、DO。连接补料瓶调节至发酵条件。16 .无菌操作将大罐所需MgSO4、Amp转入菌种转换罐并转入种子罐。17 .利用压力差将种子罐里的种子液移接到大罐。18 .补碱时，将管道上阀门打开。程序设为自动，控制流量。19 .补料罐补料培养基的领料定容配制。20 .补料罐补料培养基在位灭菌，同时对管道上段灭菌。21 .补料时，将管道上阀门打开。程序设为自动，设置

3、流量。22 .诱导剂领料，在配料罐中加水配制定容。23 羽诱导剂打入种子罐，灭菌后保持罐压。24 .利用压力差将种子罐里的诱导剂移接到大罐。25 .一段时间后，大罐的PH、DO呈上升形态即为发酵结束，可放罐离01 芽抱杆菌发酵操作流程.检查发酵车间是否达到发酵要求（所以设备处于待用状态）。2 .通知蒸汽车间按时送符合要求蒸汽。3 .种子罐基础培养基的领料及定容配制。4 .种子罐的PH、DO电极的校正安装和补料口堵头更换。5 .种子罐进料，调PH。6 .种子罐基础培养基在位灭菌，同时灭移种管道上段。7 .种子罐冷却后可连接酸、碱、消泡剂补料瓶。8 .种子罐培养基温度、PH（需进一步校准卜罐压、消

4、泡达到发酵条件。通知菌种室准备菌种转接。9 .无菌操作将种子罐所需MgSO4、Amp转入菌种转换罐。10 .种子罐扩增培养发酵阶段需平稳控制罐压、PH、DO、温度、消泡。11 .大罐基础培养基领料及配制。12 .大罐PH、DO电极校正安装及补料口堵头的更换。13 .大罐进料、定容、调PH;碱罐碱液的配制。14 .大罐基础培养基在位灭菌，同时对移种管道、进料管道、碱罐及碱管道上段的灭菌。15 .大罐基础培养基温度降至发酵温度后再次校准PH、DO。连接酸、消泡剂补料瓶调节至发酵条件。16 .无菌操作将大罐所需MgSO4、Amp转入菌种转换罐并转入种子.利用压力差将种子罐里的种子液移接到大罐。17

5、.补碱时，将管道上阀门打开。程序设为自动，控制流量。18 .发酵一定时间后，程序中PH设为手动，停止对PH、DO控制.一段时间后，大罐里抱子大量生长后即为发酵结束，可放罐离心,设备操作规程1 .种子罐灭菌.首先排夹套水，关闭所有阀门。然后先后打开夹套排污阀、夹套进蒸汽阀。夹套开始进蒸汽对罐体进行预热。2 .微开取样排蒸汽阀、取样进蒸汽阀，对取样管路进行灭菌。灭菌时间一股10分钟。取样管路灭菌结束后，先后关闭排蒸汽阀、进蒸汽阀。3 .全开过滤器后端隔离阀，微开过滤器蒸汽排放阀、过滤器进蒸汽阀，对过滤器及管路进行灭菌，每隔一段时间需打开过滤器下端排污阀排放过滤器壳内冷凝水，通过调节进出蒸汽流量的大

6、小将过滤器壳内压力维持在0.11MPa左右。灭菌时间一般10分钟。过滤器灭菌结束后，同时关闭过滤器后端隔离阀、过滤器进蒸汽阀，关闭阀门时过滤器壳内压力不允许跌到0,然后开启过滤器前端隔离阀通入空气，过滤器壳内压力在0.10MPa左右后，关闭过滤器前端隔离阀，将过滤器段保压。需注意，因过滤器壳与管路降温时，内部压力也会损失，因此在压力损失后通入空气以便维持其保压压力。4 .在种子罐温度上升期间，要打开启尾气调节阀排放罐内冷空气然后关闭。当罐内温度升到90c时，打开取样进蒸汽阀和取样阀，使蒸汽从取样阀进入罐内，并打开进气路进蒸汽阀，先将进气路进蒸汽阀到过滤器蒸汽排放阀问那段管路灭透后，关闭过滤器蒸

7、汽排放阀，打开进气隔膜阀，使蒸汽从空气管路进入罐内。5 .当温度达到设定灭菌温度121c后，通过调节取样进蒸汽阀、进气路进蒸汽阀、尾气调节阀的开度，使罐压保持在0.11MPa及灭菌温度121C。夹套进蒸汽阀可以根据蒸汽情况微开或关闭，夹套排污阀一定要开着。注意：尾气调节阀不能全部关闭，以保证蒸汽流通，达到有效灭菌。6 .当罐温达到121c后，灭菌倒计时开始。此时可对种子罐接种管、移种补料管（3000L罐）进行灭菌操作。对于种子罐接种管可全开罐体端隔离阀，微开排放阀对管路进彳T灭菌，灭菌时间30分钟。7 .当倒计时为0时，程序自动将灭菌开关关闭，灭菌结束。先关闭取样阀、取样进蒸汽阀，再关闭进气路

8、进蒸汽阀，全开过滤器前后端隔离阀，将空气通入罐内。（注意：此操作时需保持过滤器处压力高于罐体压力）调节尾气调节阀，使罐压始终高于大气压。检查所有进蒸汽阀是否关闭。注意：实罐灭菌过程保证罐压始终处于正压状态，否则会染菌。8.关闭夹套排污阀，打开夹套排水阀、夹套手动进冷水阀，进冷水对罐体进行降温。彳f罐温低于100c后，关闭夹套排水阀、夹套手动进冷水阀,打开自控进水隔离阀、回水阀。系统进入发酵控制状态：按工艺要求设置控制参数，打开发酵开关，各单项控制开关，如温度控制开关、转速控制开关等进入发酵正常运行。1 .首先排夹套水，关闭所有阀门。然后先后打开夹套排污阀、夹套进蒸汽阀夹套开始进蒸汽对罐体进行预

9、热。2 .微开取样排蒸汽阀、取样进蒸汽阀，对取样管路进行灭菌。灭菌时间一般3 10分钟。取样管路灭菌结束后，先后关闭排蒸汽阀、进蒸汽阀.全开过滤器后端隔离阀，微开过滤器蒸汽排放阀、过滤器进蒸汽阀，对过滤器及管路进行灭菌，每隔一段时间需打开过滤器下端排污阀排放过滤器壳内冷凝水，通过调节进出蒸汽流量的大小将过滤器壳内压力维持在0.11MP*右。灭菌时间一般10分钟。过滤器灭菌结束后，同时关闭过滤器后端隔离阀、过滤器进蒸汽阀，关闭阀门时过滤器壳内压力不允许跌到0,然后开启过滤器前端隔离阀通入空气，过滤器壳内压力在0.10MPa左右后，关闭过滤器前端隔离阀，将过滤器段保压。需注意，因过滤器壳与管路降温

10、时，内部压力也会损失，因此在压力损失后通入空气以便维持其保压压力。4 .在发酵罐罐温度上升期间，要打开启尾气调节阀排放罐内冷空气然后关闭。当罐内温度升到90c时，打开放料进蒸汽阀和放料阀，使蒸汽从放料阀进入罐内，并打开进气路进蒸汽阀，先将进气路进蒸汽阀到过滤器蒸汽排放阀间那段管路灭透后，关闭过滤器蒸汽排放阀，打开进气隔膜阀，使蒸汽从空气管路进入罐内。5 .当温度达到设定灭菌温度121c后，通过调节放料进蒸汽阀、进气路进蒸汽阀、尾气调节阀的开度，使罐压保持在0.11MPa及灭菌温度121C。夹套进蒸汽阀可以根据蒸汽情况微开或关闭，夹套排污阀一定要开着。注意：尾气调节阀不能全部关闭，以保证蒸汽流通

11、，达到有效灭菌。6 .当罐温达到121c后，灭菌倒计时开始。此时可对发酵罐移种补料管及补碱管道（3000L罐）进行灭菌操作。打全开移种管道、补料管道及补碱管道阀门，微开移种管道、补料管道及补碱管道的排蒸汽阀门，灭菌30分钟。7 .当倒计时为0时，程序自动将灭菌开关关闭，灭菌结束。先关闭放料阀、放料进蒸汽阀，再关闭进气路进蒸汽阀，全开过滤器前后端隔离阀，将空气通入罐内。（注意：此操作时需保持过滤器处压力高于罐体压力）调节尾气调节阀，使罐压始终高于大气压。检查所有进蒸汽阀是否关闭。注意：实罐灭菌过程保证罐压始终处于正压状态，否则会染菌。8 .关闭夹套排污阀，打开夹套排水阀、夹套手动进冷水阀，进冷水

12、对罐体进行降温。待罐温低于100c后，关闭夹套排水阀、夹套手动进冷水阀，打开自控进水隔离阀、回水阀。系统进入发酵控制状态：按工艺要求设置控制参数，打开发酵开关，各单项控制开关，如温度控制开关、转速控制开关等进入发酵正常运行。1 三.补料罐灭菌.首先排夹套水，关闭所有阀门。然后先后打开夹套排污阀、夹套进蒸汽阀。夹套开始进蒸汽对罐体进行预热。2 .微开取样排蒸汽阀、取样进蒸汽阀，对取样管路进行灭菌。灭菌时间一般10分钟。取样管路灭菌结束后，先后关闭排蒸汽阀、进蒸汽阀。3 .全开过滤器后端隔离阀，微开过滤器蒸汽排放阀、过滤器进蒸汽阀，对过滤器及管路进行灭菌，每隔一段时间需打开过滤器下端排污阀排放过滤

13、器壳内冷凝水，通过调节进出蒸汽流量的大小将过滤器壳内压力维持在0.11MP*右。灭菌时间一般10分钟。过滤器灭菌结束后，同时关闭过滤器后端隔离阀、过滤器进蒸汽阀，关闭阀门时过滤器壳内压力不允许跌到0,然后开启过滤器前端隔离阀通入空气，过滤器壳内压力在0.10MPa左右后，关闭过滤器前端隔离阀，将过滤器段保压。需注意，因过滤器壳与管路降温时，内部压力也会损失，因此在压力损失后通入空气以便维持其保压压力。4 .在补料罐温度上升期间，要打开启尾气调节阀排放罐内冷空气然后关闭。当罐内温度升到90c时，打开取样进蒸汽阀和取样阀，使蒸汽从取样阀进入罐内，并打开进气路进蒸汽阀，先将进气路进蒸汽阀到过滤器蒸汽

14、排放阀间那段管路灭透后，关闭过滤器蒸汽排放阀，打开进气隔膜阀，使蒸汽从空气管路进入罐内。5 .当温度达到设定灭菌温度121c后，通过调节取样进蒸汽阀、进气路进蒸汽阀、尾气调节阀的开度，使罐压保持在0.11MPa及灭菌温度121C。夹套进蒸汽阀可以根据蒸汽情况微开或关闭，夹套排污阀一定要开着。注意：尾气调节阀不能全部关闭，以保证蒸汽流通，达到有效灭菌。6 .当罐温达到121c后，灭菌倒计时开始。灭菌时间30分钟。当倒计时为0时，程序自动将灭菌开关关闭，灭菌结束。先关闭取样阀、取样进蒸汽阀，再关闭进气路进蒸汽阀，全开过滤器前后端隔离阀，将空气通入罐内。（注意：此操作时需保持过滤器处压力高于罐体压力

15、）调节尾气调节阀，使罐压始终高于大气压。检查所有进蒸汽阀是否关闭。注意：实罐灭菌过程保证罐压始终处于正压状态，否则会染菌。7 .关闭夹套排污阀，打开夹套排水阀、夹套手动进冷水阀，进冷水对罐体进行降温。降至一定温度后为发酵罐的补料做准备。1 .首先排夹套水，关闭所有阀门。然后先后打开夹套排污阀、夹套进蒸汽阀。夹套开始进蒸汽对罐体进行预热。2 .微开取样排蒸汽阀、取样进蒸汽阀，对取样管路进行灭菌。灭菌时间一般10分钟。取样管路灭菌结束后，先后关闭排蒸汽阀、进蒸汽阀。3 .全开过滤器后端隔离阀，微开过滤器蒸汽排放阀、过滤器进蒸汽阀，对过滤器及管路进行灭菌，每隔一段时间需打开过滤器下端排污阀排放过滤器

16、壳内冷凝水，通过调节进出蒸汽流量的大小将过滤器壳内压力维持在0.11MP*右。灭菌时间一般10分钟。过滤器灭菌结束后，同时关闭过滤器后端隔离阀、过滤器进蒸汽阀，关闭阀门时过滤器壳内压力不允许跌到0,然后开启过滤器前端隔离阀通入空气，过滤器壳内压力在0.10MPa左右后，关闭过滤器前端隔离阀，将过滤器段保压。需注意，因过滤器壳与管路降温时，内部压力也会损失，因此在压力损失后通入空气以便维持其保压压力。4 .在碱罐温度上升期间，要打开启尾气调节阀排放罐内冷空气然后关闭。当罐内温度升到90c时，打开取样进蒸汽阀和取样阀，使蒸汽从取样阀进入罐内，并打开进气路进蒸汽阀，先将进气路进蒸汽阀到过滤器蒸汽排放

17、阀问那段管路灭透后，关闭过滤器蒸汽排放阀，打开进气隔膜阀，使蒸汽从空气管路进入罐内。5 .当温度达到设定灭菌温度121c后，通过调节取样进蒸汽阀、进气路进蒸汽阀、尾气调节阀的开度，使罐压保持在0.11MPa及灭菌温度121C。夹套进蒸汽阀可以根据蒸汽情况微开或关闭，夹套排污阀一定要开着。注意：尾气调节阀不能全部关闭，以保证蒸汽流通，达到有效灭菌。6 .关闭夹套排污阀，打开夹套排水阀、夹套手动进冷水阀，进冷水对罐体进行降温。降至一定温度后为发酵罐的补碱做准备。五.配料罐操作规程1 .在配料之前应确保配料罐里面干净，并关闭配料罐底阀和排污阀门。2 .加料进配料罐后，打开罐顶的水阀进水溶料，然后定容

18、。最后打开配料罐搅拌机充分搅拌培养基0.打开底阀，启动料泵，然后根据要求打开大料管道阀门为发酵罐打基础培养基。基础培养基打完后停料泵，关闭配料罐底阀和打料管道阀门。3 .清洗配料罐。六.储罐操作规程1 .在打发酵液过来之前要保证储罐干净，关闭储罐底阀和排污阀门。2 .打开发酵罐的放料阀门、打开发酵罐至储罐管道阀门，利用发酵罐与储罐的压力差将发酵液输送至储罐。3 .打开储罐至离心机之间阀门，利用储罐与离心机间高度差将发酵液输送至离心机离心。4 .发酵液离心完成后储罐要清洗。七.PH电极校正、安装与保养1. 在主菜单中点击电极校正按钮，选择要校正的PH电极，点击校正，则进入相应的校正界面。打开PH

19、校正开关。（总开关必须处于关闭状态）设置一号标准液和二号标准液的值，不必考虑大小顺序。第一步：设置一号标准液和二号标准液的值，不必考虑大小顺序。第二步：将PH电极放入一号标准液里，观察屏幕右上角的反馈电压的数据，当数值基本稳定后，点击一号采集电压后面的开关进行电压采集。第三步：将PH电极取出，用蒸储水洗净擦干后放入二号标准液里，观察屏幕右上角的反馈数据，当数值基本稳定后，点击二号采集电压后面的开关进行电压采集。第四步：点击计算后的开关，则PH电极离线校正完毕。2. PH电极的在线校正：待实罐灭菌完毕，各控制参数都控制到设定值，接种前后（一般大罐宜在接种后马上进行），还需进行一次在线校正（直接在

20、发酵界面调出在线校正界面）。方法如下：第一步：对罐内培养液取样；第二步：用台式酸度计测定培养液的PH值；第三步：将台式酸度计测得的PHffi输入到实测PH值后，点击确定按钮。至此，PH电极校正完毕。PH电极平时不使用，可以浸泡在3mol/L的kcl溶液或饱和kcl溶液中，严格禁止将电极浸泡在蒸储水，去离子水或自来水等离子含量极少的液体中。如果PH电极长期干放而暴露在空气中，在重新使用之前，请先将电极浸泡在3mol/L的kcl溶液或饱和kcl溶液中2-3天，使电极恢复活性，如果有条件，请先将电极浸泡在9895电极再生液中1分钟左右，再用蒸储水洗干净，然后浸泡在3mol/L的kcl或饱和kcl溶液

21、中至少1天才能使用。如果PH电极被无机物质污染可以用0.1mol/L的Hcl或NaOH清洗数分钟，然后再用蒸储水洗干净。如果PH电极被有机物质污染，可以用酒精或丙酮清洗，然后再用蒸储水洗干净。PH电极上端和电缆线相连接处的接头是高阻抗部件，禁止用水等液体浸泡或蒸汽等潮湿空气侵蚀，可以用新电极所带的红色小螺帽盖住，电极电缆的接头也属于高阻抗部件，严禁用水等液体浸泡或蒸汽等潮湿空气侵蚀，一定要存放在干燥处1 八.DO电极校正、安装与保养.在主菜单中点击电极校正按钮，选择要校正的DO电极，点击校正，则进入相应的校正界面。打开DO校正开关。（总开关必须处于关闭状态）设置一号标准液和二号标准液的值，不必考虑大小顺序。第一步：设置一号标准液和二号标准液的值，一个为0值，另一个为100。其中0值对应的是饱和亚硫酸钠标定值，100值对应为DO电极在空气中标定值。第二步：将DO电极放入一号标准液里，观察屏幕右上角的反馈电压的数据，当数值基本稳定后，点击一号采集电压后面的开关进行电压采集。第三步：将DO电极取出，用蒸储水洗净擦干后放入二号标准液里，观察屏幕右上角的反馈数据，当数值基本稳定后，点击二号采集电压后面的开关进行电压采集。第四步：点击计